目的:了解在免疫受損小鼠侵襲性肺曲菌病模型肺組織中NOD2表達的改變,并進一步研究其NOD2在小鼠巨噬細胞RAW264.7抗曲菌免疫中的作用。方法:（1）采用環(huán)磷酰胺腹腔注射的方法造成小鼠粒細胞缺乏,經(jīng)鼻滴入煙曲菌孢子,建立小鼠侵襲性肺曲菌病模型,檢測感染前后肺組織中NOD2和RIP2基因表達情況;（2）合成針對小鼠NOD2的三條siRNA序列及陰性對照序列,轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞,通過實時熒光PCR方法及western blot方法檢測基因沉默效果,篩選出有效序列;（3）以篩選出的有效siRNA序列轉(zhuǎn)染RAW264.7細胞,設(shè)置正常RAW264.7細胞做對照,分別以底液、MDP、Af、MDP+Af刺激兩組細胞,并觀察24h、48h、72h,收集細胞和上清,檢測NOD2和RIP2基因及其蛋白的表達情況、NF-κB蛋白表達情況和上清液TNF-α、IL-8的變化。結(jié)果:（1）免疫受損小鼠接種煙曲菌后肺部病理切片顯示明顯的充血、水腫、中性粒細胞浸潤并形成多發(fā)病灶,六胺銀染色可見孢子生發(fā)成菌絲并呈多發(fā)集落分布,至18～48小時最為顯著,提示侵襲性肺曲菌病小鼠建模成功,而對照組炎癥反應(yīng)輕于免疫... 

【文章來源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文詞匯對照
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 免疫受損小鼠肺曲菌病模型的建立及其肺組織中NOD2和RIP2的表達
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分 針對RAW264.7細胞NOD2的siRNA序列篩選
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
第三部分 NOD2在RAW264.7細胞抗曲茵免疫中的作用
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
參考文獻
綜述
致謝



本文編號：3039818