目的肺炎克雷伯菌是引起醫(yī)院獲得性感染的常見革蘭氏陰性條件致病菌之一。自上世紀80年代隨著耐藥性肺炎克雷伯菌出現(xiàn),多重耐藥肺炎克雷伯菌造成的復雜感染治療愈加困難。隨著全耐藥性肺炎克雷伯菌的報道不斷增多,迫使我們尋求治療耐藥性肺炎克雷伯菌感染的新型治療策略與方法。本研究以莢膜型KN1型菌株Kp409為宿主菌,成功分離并鑒定一株裂解性噬菌體IME321,并對其進行全基因組高通量測序及相關生物信息學分析。在體外克隆表達噬菌體解聚酶、明確其抗菌活性后,在小鼠感染模型中評估該解聚酶的治療及預防效果。方法以臨床分離的肺炎克雷伯菌Kp409為宿主菌,從解放軍總醫(yī)院第五醫(yī)學中心南院區(qū)（原解放軍307醫(yī)院）未經處理污水中篩選噬菌體;利用雙層平板培養(yǎng)法測定噬菌體IME321的滴度,同時繪制噬菌體的最佳感染復數(shù)及一步生長曲線;經透射電鏡觀察負染法處理的噬菌體形態(tài);提取噬菌體核酸,利用Ilumina Miseq高通量測序平臺對噬菌體IME321進行全基因組測序,并進行有關生物信息學分析。PCR擴增噬菌體IME321解聚酶基因ORF42,將目的基因克隆進pEasy-BluntE1Expression Vector... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

IME321在Kp409鋪雙層平板所形成的噬菌斑塊和暈環(huán)A：感染24h后，噬菌斑的周圍出現(xiàn)半透明暈環(huán)，并隨著時間的延長而擴大

圖 2 噬菌體 IME321 透射電鏡下形態(tài)Fig 2 Transmission electron microscopy of phage IME321染復數(shù)I分別為0.01、0.1、1、10和100混合噬菌體原液和宿主菌液培養(yǎng)

噬菌體IME321一步生長曲線


本文編號：2956678