發(fā)布時間：2020-12-24 16:04

　　目的 建立多腫瘤抑制基因（MTS1或p16基因）純合性缺失分析方法，探討胸水p16基因純合性缺失檢測的臨床意義。方法 本研究以人Hela細胞mRNA為模板，經RT-PCR獲得p16第二外顯子cDNA，插入質粒pGEM-T中，然后轉化E.coliXL1-blue，經限制性內切酶酶切圖譜分析，并以美國冷泉港實驗室提供的p16基因第二外顯子cDNA為探針證實我們所構建的重組質粒含p16基因第二外顯子。此重組質粒經擴大培養(yǎng)、質粒純化、EcoR1酶切、酶切DNA片段純化獲得p16基因第二外顯子cDNA作為DNA探針；用地高辛標記法標記p16cDNA探針。再根據已發(fā)表的p16基因序列，設計p16基因第一、第二外顯子和CDK4引物，以CDK4為內參照，經PCR獲得特異擴增產物，無p16基因的PCR產物而出現CDK4擴增產物者為p16基因第一、第二外顯子純合性缺失。結果21例結核性胸水無一例存在p16基因純合性缺失，31例癌性胸水中均未出現p16基因第一外顯子純合性缺失，但發(fā)現有12例存在p16基因第二外顯子純合性缺失，陽性率為38.7％（12/31）。同時也作了胸水細胞學檢測，16例胸水細胞學陽性，... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學安徽省

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
1 材料與方法
    1.1 Hela細胞培養(yǎng)
    1.2 Hela細胞總RNA的制備（異硫氰酸法）
    1.3 mRNA的制備（oligo（dT）層析法）
    1.4 cDNA第一鏈的合成以及RT-PCR
    1.5 p16第二外顯子cDNA PCR產物的純化
    1.6 pGEMT質粒與p16第二外顯子cDNA連接
    1.7 感受態(tài)細胞的制備和轉化
    1.8 質粒提取及定量
    1.9 陽性克隆鑒定
        1.9.1 重組質粒DNA酶切圖譜分析
        1.9.2 DNA序列分析
    1.10 p16基因第二外顯子cDNA的制備及純化
    1.11 p16基因第二外顯子cDNA探針的標記
    1.12 p16基因第二外顯子Southern Blotting方法的建立
    1.13 胸水DNA的制備
    1.14 多腫瘤抑制基因（MTS）基因純合性缺失PCR分析方法的建立
2 結果
    2.1 pGEM-p16克隆的構建及其p16基因第二外顯子純合性缺失PCR分析方法的建立
        2.1.1 pGEM-p16重組質粒的限制性內切酶酶切圖譜分析
        2.1.2 DNA序列分析
        2.1.3 p16基因第二外顯子cDNA的制備
        2.1.4 Southern blot結果
        2.1.5 p16基因第二外顯子純合性缺失PCR分析方法的建立
    2.2 臨床胸水標本p16、p15基因純合性缺失的分析
        2.2.1 癌性胸水中多腫瘤抑制基因（p16、p15）基因純合性缺失率
        2.2.2 多腫瘤抑制基因（p16、p15）基因純合性缺失和其他確診方法
        2.2.3 31例癌性胸水p16基因第二外顯子純合性缺失情況
3 討論
    3.1 pGEM-p16克隆的構建及其p16基因第二外顯子純合性缺失PCR分析方法的建立
        3.1.1 pGEM-p16克隆的構建
        3.1.2 p16基因第二外顯子純合性缺失PCR分析方法的建立
    3.2 p16基因的作用及其在肺癌、癌性胸水中的研究意義
        3.2.1 p16基因在細胞周期中作用
        3.2.2 p16基因研究在肺癌及癌性胸水中的臨床意義
4 結論
參考文獻
對本課題的進一步設想
致謝
個人簡歷
在學期間的研究成果目錄
綜述-p16基因與肺癌關系的研究進展
    1 p16基因在細胞周期中的作用
    2 p16基因異常與肺癌的發(fā)生和發(fā)展
        2.1 p16基因缺失與肺癌
        2.2 p16基因點突變與肺癌
        2.3 p16基因甲基化與肺癌
    3 p16基因與肺癌基因治療研究
    4 p16的臨床研究進展
    5 結語
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]重視胸膜疾病的診治和研究[J]. 謝燦茂.  中華結核和呼吸雜志. 2001(01)
[2]聚合酶鏈反應分析多腫瘤抑癌基因1第二外顯子純合性缺失[J]. 劉虎,桂淑玉,汪淵,周青.  安徽醫(yī)科大學學報. 2000(03)
[3]抑癌基因在肺癌治療中的新進展[J]. 吳文青,范希光,饒緯華.  中華結核和呼吸雜志. 1999(11)
[4]肺癌P16基因純合缺失、突變、表達及臨床意義[J]. 冉瑞瓊,曹曉運,涂宣林,傅曉穎,宋后燕,曹世龍.  中國癌癥雜志. 1998(03)
[5]胸水癌胚抗原與鐵蛋白檢測對惡性胸水的參考價值[J]. 李靜,梅昆.  中華結核和呼吸雜志. 1994(03)



本文編號：2935938