本文關(guān)鍵詞：p38MAPK在百草枯誘導(dǎo)大鼠急性肺損傷中作用的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景百草枯是一種接觸性的脫葉劑和除草劑,目前在世界范圍內(nèi)廣泛使用。臨床上經(jīng)常遇到百草枯(paraquat,PQ)自服或誤服的中毒患者。由于百草枯毒性強,且目前臨床上針對百草枯中毒尚無有效的治療手段,因此致死率極高。百草枯吸收進入人體之后可導(dǎo)致多臟器功能的損害,其中最嚴重的損害部位在肺,主要表現(xiàn)為早期的急性肺損傷(acute lung injury,ALI)以及后來逐漸進展的肺纖維化。百草枯的具體中毒機制尚未完全闡明,因此進一步探討百草枯的中毒機制和尋找新的治療靶點迫在眉睫。百草枯進入人體后,可以被肺泡上皮細胞所吸收,引起肺組織內(nèi)各類細胞的氧化應(yīng)激反應(yīng),進而能夠通過多種信號通路介導(dǎo)肺組織甚至全身產(chǎn)生大量炎癥因子,尤其是上調(diào)腫瘤壞死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)等的表達,進一步加重了急性肺損傷反應(yīng),早期阻斷或減輕肺組織的炎癥反應(yīng)過程與抑制后期的肺纖維化進展以及對改善患者的預(yù)后密切相關(guān)。與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的絲裂原活化蛋白酶(mitogen activated kinas, MAPKs)家族中的p38MAPK一直成為各領(lǐng)域研究的熱點和難點,大量研究證實p38MAPK在參與肺損傷的炎癥反應(yīng)和細胞凋亡等機制中發(fā)揮了重要的作用,p38MAPK通過調(diào)節(jié)基因水平或后轉(zhuǎn)錄水平的蛋白變化進而調(diào)節(jié)下游的炎癥反應(yīng),增加TNF-α、IL-1β等炎癥因子的表達,而TNF-α和IL-1p作為炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因子可以反過來再激活p38MAPK,這樣在炎癥反應(yīng)過程中就形成了一個惡性循環(huán)。然而目前p38MAPK與百草枯中毒所致ALI相關(guān)性的研究甚少。本研究旨在探討p38MAPK介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與百草枯所致肺損傷之間的關(guān)系,并應(yīng)用p38MAPK的特異性抑制劑SB203580干擾阻斷,以進一步明確其在治療中的潛在臨床意義。目的探討p38MAPK在百草枯所致急性肺損傷炎癥反應(yīng)中的作用,進一步明確急性百草枯中毒致肺損傷的機制,并用抑制劑干擾以期為臨床治療提供新的靶點。方法分別選取96只健康雄性SD大鼠,重量在250-300g,按照隨機數(shù)字表法隨機分為四組并按照以下劑量和方法給藥：(1)生理鹽水組(NS組),24只,生理鹽水20mg/kg;(2)百草枯中毒組(PQ組),24只,PQ 20mg/kg;(3)PQ+抑制劑組(PQ+SB),24只,PQ20mg/kg+SB203580 10mg/kg;(4)抑制劑組(SB),24只,SB203580 10mg/kg。其中PQ中毒致大鼠急性肺損傷的模型采用本課題組前期制作的病理模型,即按照20mg/kg的劑量腹腔注射,PQ+SB組和SB組在PQ給藥前提前半小時腹腔一次性注入抑制劑SB203580 10mg/kg。分別于實驗開始后的第1、3、5、7d各取6只抽取腹主動脈血處死大鼠,取肺組織和支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)樣本,分別檢測肺干濕重、肺泡灌洗液和肺組織中的TNF-a和IL-1β,肺組織病理切片觀察肺組織結(jié)構(gòu)并進行病理評分,westemblot方法檢測肺組織p38MAPK、p-p38MAPK的表達水平。結(jié)果1)各組大鼠濕干比(wet/dry,W/D)變化PQ與NS組相比,肺W/D值明顯升高,且在3、5、7d三個時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),用抑制劑SB203580干預(yù)后,PQ+SB組的肺W/D在3、5、7d均低于PQ組(P0.05),證實了抑制劑SB203580干預(yù)阻斷p38MAPK信號通路后可以明顯改善PQ中毒組大鼠肺組織的炎癥滲出。2)各組大鼠肺組織的病理學變化 光鏡觀察顯示與NS對照組比較,PQ組3d時肺泡腔內(nèi)滲出液、肺間質(zhì)充血、水腫、炎癥細胞浸潤等均明顯加重,PQ+SB組較PQ組有所減輕。肺病理評分結(jié)果顯示PQ組的病理評分顯著高于NS組(P0.05);PQ+SB組的病理評分顯著低于PQ組(P0.05)。研究結(jié)果證實了PQ中毒后大鼠肺組織病理損傷明顯加重,抑制劑SB203580干預(yù)后對PQ引起的肺組織有一定的保護作用。3)大鼠肺組織中TNF-α及IL-1β的含量變化Elisa結(jié)果顯示PQ中毒組的大鼠肺組織和BALF中TNF-α、IL-1β表達水平明顯高于NS組,且在各個時間點差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。PQ+SB組除了第5d、7d BALF中的TNF-α水平與PQ組比較無顯著差異(P0.05),其它在各個時間點PQ+SB組的大鼠肺組織和BALF中TNF-α、IL-1β的水平較PQ組均明顯下降(P0.05)。表明了PQ中毒后可引起大鼠肺組織中炎癥因子TNF-α、IL-1β表達水平的明顯升高,用SB203580干預(yù)后可以降低炎癥因子的表達水平。4)大鼠肺組織中p38MAPK、p-p38MAPK的表達量變化westernblot結(jié)果顯示PQ組p-p38MAPK表達水平較NS組明顯增多(P0.05),PQ+SB組較PQ組表達水平有所下降(P0.05),表明了PQ中毒后可以引起p-p38MAPK表達水平的明顯增高,且用抑制劑SB203580干預(yù)可以降低p-p38MAPK的表達水平。p-p38MAPK在NS,SB,PQ,PQ+SB四個組中條帶的平均灰度比值為1：0.8：5.3：3.4。結(jié)論1)p38MAPK參與了百草枯致大鼠急性肺損傷的炎癥反應(yīng)過程。2)p38MAPK的特異性抑制劑SB203580干預(yù)后抑制了p-p38MAPK的表達,減輕了其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng),從而減輕了PQ導(dǎo)致的急性肺損傷反應(yīng),為臨床治療PQ中毒提供了新的治療靶點。
【關(guān)鍵詞】：p38絲裂原活化蛋白激酶 百草枯 急性肺損傷 炎癥反應(yīng) 腫瘤壞死因子α 白細胞介素-1β
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R563;R595.4
【目錄】：

• 縮略詞表6-7
• 摘要7-10
• Abstract10-14
• 0 引言14-15
• 1 材料與方法15-19
• 1.1 實驗材料15-16
• 1.2 實驗方法16
• 1.3 標本處理及檢測指標16-17
• 1.4 檢測指標方法17-19
• 1.5 統(tǒng)計學方法19
• 2 結(jié)果19-23
• 2.1 各組的W/D變化19-20
• 2.2 肺組織的病理學變化20-22
• 2.3 肺組織中TNF-α及IL-1 β的含量變化22
• 2.4 肺組織中p38MAPK、p-p38MAPK的表達量變化22-23
• 3 討論23-26
• 4 結(jié)論26
• 參考文獻26-28
• 文獻綜述28-44
• （一） P38絲裂原活化蛋白激酶在急性肺損傷中的研究進展28-35
• 1 p38MAPK信號通路概述29-30
• 2 p38MAPK的主要功能30-31
• 3 p38MAPK在急性肺損傷中的作用31-32
• 小結(jié)32-33
• 參考文獻33-35
• （二） 急性肺損傷動物模型的研究現(xiàn)狀35-44
• 1 人類肺損傷的生理病理特點及動物模型所面臨的挑戰(zhàn)36-37
• 2 幾種常用的不同肺損傷動物模型之間的獨有特點37-39
• 3 誘導(dǎo)ALI模型常見的幾種動物模型39-41
• 4 總結(jié)41
• 參考文獻41-44
• 攻讀碩士期間發(fā)表的主要論文44-45
• 致謝45-46

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本文編號：293418