目的通過建立LPS誘導(dǎo)體外培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞損傷模型,探討1、Fas-siRNA轉(zhuǎn)染肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的可行性;2、Fas-siRNA對Fas/FasL依賴的LPS誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)的影響。方法經(jīng)分離純化大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞,隨機(jī)分為5組:空白組:AECⅡ（僅加脂質(zhì)體）、AECⅡ+siRNA-213組、AECⅡ+siRNA-641組、AECⅡ+siRNA-830組、AECⅡ+陰性對照siRNA組。6h后觀察轉(zhuǎn)染效率,48h后RT-PCR檢測Fas mRNA表達(dá)。肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞分為5組:對照組、LPS組、LPS+FasL組、FasL組、LPS+FasSiRNA+FasL組,轉(zhuǎn)染FasSiRNA后20小時(shí),加入LPS和FasL,加入PBS為每孔容積1ml,終濃度分別為10ug/ml和5ng/ml,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí),RT-PCR、Westen Blot檢測Fas的表達(dá),Westen Blot檢測p-caspase8,流式檢測細(xì)胞凋亡,ELISA檢測培養(yǎng)液上清MCP-1和TNF-a的濃度。結(jié)果1、siRNA轉(zhuǎn)染效率超過80%,與空白組與陰性對照組比較,AECⅡ+siRNA... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AKP染色大鼠肺泡n型上皮細(xì)胞

圖4不同處理后FaSmRNA的表達(dá)。與C組比較，*P<0.05與LPS組比較#p<0.05Fas蛋白表達(dá)月娜祖湘:匕篡驟︸︸切腸和5572始3426圖5、不同處理后Fas蛋白的表達(dá)。與C組比較，*P<0.05與LPS組比較，#p(0.05與control組比較，LPS組、FasL組、LPS+FasL組、LPS+FaSSIRNA+組p一caspases表達(dá)增加，<0.05);與LpS組比較，LpS+FasL組p一caspas

圖5、不同處理后Fas蛋白的表達(dá)。與C組比較，*P<0.05與LPS組比較，#p(0.05與control組比較，LPS組、FasL組、LPS+FasL組、LPS+FaSSIRNA組p一caspases表達(dá)增加，<0.05);與LpS組比較，LpS+FasL組p一casp達(dá)增加切<0.05);與LpS+FasL組比較LpS+FassiRNA+FasL組p一easpase減少切<0.05)(如圖6)。深︸櫻﹃︸嘟瞬櫻仍72璐43擬，，，，，，，，r.”舊.r侶侶，，:一反爪汾汾汾汾汾汾汾令八離離產(chǎn)產(chǎn)哀廠廠丫丫“““了了了

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TNF-α信號傳導(dǎo)通路的分子機(jī)理[J]. 丘創(chuàng)華,侯敢,黃迪南.  中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2007(06)
[2]利多卡因?qū)PS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J]. 徐道妙,明廣峰,吳曉英,陳勝喜.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(02)
[3]沐舒坦對吸入性肺損傷大鼠的肺保護(hù)作用[J]. 趙雙平,郭曲練,艾宇航,王瑞珂,王鍔,賀民.  中國危重病急救醫(yī)學(xué). 2005(06)
[4]肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的分離純化及原代培養(yǎng)[J]. 曾慶富,蔣海鷹,錢仲,孫去病.  中華病理學(xué)雜志. 1998(05)
[5]利多卡因預(yù)先給藥對LPS誘導(dǎo)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞SP-A表達(dá)的影響[J]. 馬新華,徐道妙,明廣峰,艾宇航,郭曲練.  中華麻醉學(xué)雜志. 2007 (11)



本文編號：2932625