本文關(guān)鍵詞：Caspase-12和m-Calpain蛋白及mRNA在COPD模型大鼠膈肌和趾長伸肌中表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景和目的 慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）以氣流受限為特征，是可以預(yù)防、可以治療的疾病，氣流受限不完全可逆、呈進(jìn)行性發(fā)展，與肺部對香煙煙霧等有害氣體或有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)。COPD不但導(dǎo)致肺部疾病，而且還累及心血管、骨骼肌、骨骼、消化等多系統(tǒng)的全身性疾病[1]。骨骼肌萎縮在COPD患者發(fā)生率達(dá)20%-40%，不僅增加COPD患者死亡率[2]，還嚴(yán)重影響疾病預(yù)后。最近研究示，在骨骼肌萎縮中骨骼肌細(xì)胞過度凋亡起重要作用[3-4]，而肌纖維蛋白降解也起一定作用[5]，說明細(xì)胞凋亡在骨骼肌萎縮機(jī)制中發(fā)揮重要作用，作為半胱氨酸蛋白酶家族一員，Caspases是細(xì)胞凋亡分子機(jī)制中重要的效應(yīng)子。骨骼肌細(xì)胞凋亡的增加，導(dǎo)致肌纖維數(shù)量減少，引起COPD患者骨骼肌萎縮和體重減輕[6]。實驗發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重?zé)齻笫�、失神�?jīng)支配大鼠引起的骨骼肌萎縮均伴細(xì)胞凋亡增加[7-8]。 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)途徑是細(xì)胞凋亡信號傳導(dǎo)途徑之一，Caspase-12存在于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)凋亡過程中發(fā)揮重要作用[9]。m-Calpain是Ca2+依賴的中性半胱氨酸蛋白酶，存在于哺乳動物細(xì)胞和組織中，被激活后可以激活Caspase-12[10-11]，最終引起一系列細(xì)胞凋亡。KalaiM證明Caspase-12主要在肺部和骨骼肌表達(dá)[12]。已有研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑在老年大鼠骨骼肌萎縮中起重要作用[13]，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)凋亡中的重要因子Caspase-12是否參與COPD大鼠骨骼�。跫『椭洪L伸�。┪s，m-Calpain是否通過激活Caspase-12參與其中？因此我們擬定本課題，通過COPD大鼠模型，檢測大鼠膈肌和趾長伸肌細(xì)胞凋亡率、膈肌和趾長伸肌中Caspase-12和m-Calpain蛋白及mRNA的表達(dá)，以及Caspase-12和m-Calpain相關(guān)性，初步探討Caspase-12和m-Calpain是否參與COPD大鼠膈肌和趾長伸肌萎縮過程，m-Calpain是否是通過激活Caspase-12參與其中？ 材料與方法 按照隨機(jī)數(shù)字表，把40只健康成年雄性Wistar大鼠分為兩組，對照組和模型組，每組各20只。模型組按照以下方法造模：實驗第1～29天、31～60天，將大鼠置于密閉染毒箱（自制）內(nèi)被動吸入香煙煙霧，每日兩次，每次30分鐘，間隔時間8小時，持續(xù)2個月。第30天模型組大鼠氣管內(nèi)注入PPE，，對照組大鼠以相同方式同時注入等量注射用生理鹽水，余不做處理。第60天，在每組中隨機(jī)選取10只大鼠進(jìn)行肺功能檢測；第61天處死全部大鼠，取肺組織、膈肌及雙側(cè)趾長伸肌，并將膈肌和右側(cè)趾長伸肌稱重后進(jìn)行如下測定： 1、TUNEL法檢測膈肌和趾長伸肌細(xì)胞凋亡率； 2、肺組織、膈肌和趾長伸肌組織作病理切片HE染色； 3、免疫組織化學(xué)法檢測膈肌和趾長伸肌中Caspase-12和m-Calpain蛋白的表達(dá)； 4、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測膈肌和趾長伸肌中Caspase-12和m-CalpainmRNA的表達(dá)； 結(jié)果 1、肺功能結(jié)果示：模型組大鼠PEF、FEVO.3和FEVO.3/FVC%均顯著降低，提示存在小氣道阻力增加和阻塞性通氣功能障礙現(xiàn)象。 2、TUNEL法檢測示：COPD模型大鼠膈肌和趾長伸肌細(xì)胞凋亡率均較正常組明顯增加（P＜0.05），提示模型組大鼠膈肌、趾長伸肌組織中存在細(xì)胞凋亡。 3、肺組織病理切片示：模型組大鼠肺組織出現(xiàn)慢性非特異性炎癥及肺氣腫現(xiàn)象，符合COPD肺組織病理學(xué)變化特點(diǎn)。 4、膈肌和趾長伸肌病理組織切片示：模型大鼠膈肌和趾長伸肌的肌纖維發(fā)生斷裂、溶解、壞死及萎縮現(xiàn)象。 5、膈肌和趾長伸肌重量與其凋亡率分別呈負(fù)相關(guān)（r=-0.852，r=-0.844）。 6、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：與對照組比較，Caspase-12蛋白在模型組大鼠膈肌、趾長伸肌中表達(dá)均有顯著差異（P＜0.05），m-Calpain蛋白在模型組大鼠膈肌和趾長伸肌中的表達(dá)亦顯著增強(qiáng)（P＜0.05），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。膈肌和趾長伸肌中Caspase-12和m-Calpain蛋白均呈正相關(guān)（r=0.885，r=0.862）。 7、RT-PCR法檢測結(jié)果示：與對照組比較，模型組大鼠膈肌中Caspase-12和m-Calpain mRNA的表達(dá)顯著增強(qiáng)，有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），模型組大鼠趾長伸肌中Caspase-12和m-Calpain mRNA的表達(dá)也顯著增強(qiáng)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。膈肌和趾長伸肌中Caspase-12和m-Calpain mRNA均呈正相關(guān)（r=0.787，r=0.774）。 結(jié)論 模型組大鼠膈肌和趾長伸肌存在細(xì)胞凋亡及肌萎縮；膈肌和趾長伸肌的萎縮與凋亡存在聯(lián)系；在膈肌和趾長伸肌中，Caspase-12和m-Calpain蛋白表達(dá)增強(qiáng)，Caspase-12和m-Calpain mRNA表達(dá)也增強(qiáng)，且Caspase-12和m-Calpain蛋白及其mRNA表達(dá)均呈正相關(guān)性。提示Caspase-12和m-Calpain可能參與COPD大鼠膈肌和趾長伸肌萎縮，m-Calpain可能通過激活Caspase-12參與該過程。
【關(guān)鍵詞】：慢性阻塞性肺疾病 細(xì)胞凋亡 膈肌 趾長伸肌 萎縮 Caspase-12 m-Calpain
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R565;R-332
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-12
• 英漢縮略詞表12-14
• 1 引言14-16
• 2 材料與方法16-26
• 3 結(jié)果26-31
• 4 討論31-35
• 5 結(jié)論35-36
• 附圖36-44
• 參考文獻(xiàn)44-47
• 綜述47-61
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 個人簡歷61-62
• 在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文62-63
• 致謝63

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 胡司淦;蔡鑫;;Fas系統(tǒng)在冠心病和慢性心力衰竭中的變化及意義[J];蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2006年04期

2 劉娜;劉俊田;;失巢凋亡在As斑塊破裂中的作用及機(jī)制[J];中國藥理學(xué)通報;2007年03期

3 周蘭英;孫圣華;李定梅;楊勇;唐文祥;鄭莉茗;曾祥伯;;Bcl-2及Bax表達(dá)與COPD大鼠骨骼肌細(xì)胞凋亡的相關(guān)性[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2011年08期

4 宋一平,崔德健,茅培英,梁延杰,王德文;慢性阻塞性肺疾病大鼠模型氣道重塑及生長因子的研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2001年05期

5 ;慢性阻塞性肺疾病診治指南(2007年修訂版)[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;2007年01期

  本文關(guān)鍵詞：Caspase-12和m-Calpain蛋白及mRNA在COPD模型大鼠膈肌和趾長伸肌中表達(dá)的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：291590