第一部分吸入LPS對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道黏液分泌的影響目的觀察吸入脂多糖（LPS）對哮喘小鼠氣道炎癥和氣道黏液分泌的改變方法清潔級BALB/c小鼠30只隨機分為三組：哮喘組（AST組）10只、LPS哮喘組（LPS組）10只和正常組（NS組）10只,哮喘組用卵清白蛋白（OVA）致敏和激發(fā)制作哮喘模型,LPS哮喘組在哮喘模型的基礎(chǔ)上加用LPS（50ug/ml）霧化吸入30分鐘,正常組用生理鹽水代替OVA。檢測NS組、AST組及LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）細(xì)胞總數(shù)和細(xì)胞分類計數(shù),采用ELISA檢測BALF中的IL-4和TNF-α水平,HE染色觀察肺部病理學(xué)改變,用阿爾辛藍(lán)—過碘酸雪夫（AB-PAS）染色氣道杯狀細(xì)胞,免疫組織化學(xué)法檢測肺組織中黏蛋白5ac（Muc5ac）以及TLR4的表達(dá),熒光定量RT-PCR檢測Muc5acmRNA和TLR4 mRNA在肺內(nèi)的表達(dá),Western-blotting檢測氣道m(xù)uc5ac和TLR4蛋白含量。結(jié)果AST組及LPS小鼠較NS組小鼠在BALF中的細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞百分比,IL-4和TNF-α水平、肺組織AB-PAS... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小鼠哮喘模型及LPS刺激哮喘模型制備示意圖

圖2.小鼠支氣管肺泡灌洗2.3BALF細(xì)胞總數(shù)計數(shù)及白細(xì)胞分類吸6ulBALF滴于計數(shù)板上，10倍鏡下分別數(shù)計數(shù)板一側(cè)4角大方格之內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，按公式:N/4x106，計算細(xì)胞總數(shù)。將剩余BALF離心(4℃，1500rPmxIOmin)，取沉淀涂片，常規(guī)瑞氏一吉姆薩復(fù)合染色，單盲法40倍鏡下至少200個細(xì)胞做嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴及單核細(xì)胞分類。2.4肺組織病理學(xué)檢查2.4.1石蠟塊的制作(l)將己固定的肺組織(固定時間不超過24小時)置于50%乙醇12小時。(2)置于70%乙醇4小時。(3)置于80%乙醇30分鐘。(4)置于90%乙醇30分鐘。

圖3核酸蛋白測量儀測量RNA濃度及OD值(2)將提取的RNA樣品用RNANase一free水稀釋為等體積等濃度工作液濃度(50ng/川)，分裝于數(shù)個EP管，放入一80℃冰箱保存，以備進(jìn)行熒光定量RFPCR測定。2.7.2RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNARNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA按試劑盒說明書進(jìn)行，反應(yīng)體系如下:成分使用量終濃度2閏2X25Pmol50Pmol，..二‘..幾11.舊1.林抖林林一、口一、︺一、Jt工Jn口00sxPrimeseriptTMBurrer(偽rRealTime)PrimeseriptTMRTEnzymeMixloxigodTPrimer(souM)’1Random6mers(1oouM)’1TotalRNA


本文編號：2905930