革蘭氏陰性菌感染是引起急性肺損傷的臨床常見病因,革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)與體內(nèi)相應受體結合后,在肺內(nèi)啟動多種信號級聯(lián)放大系統(tǒng),導致前炎因子、炎癥介質、化學趨化因子、黏附分子等產(chǎn)生和釋放。炎癥因子大量釋放入血,誘發(fā)炎癥瀑布級聯(lián)效應,導致炎癥繼續(xù)發(fā)展和放大；但在上述過程中,同時有抗炎介質如白細胞介素10(interleukin-10, IL-10)等的合成和釋放,它們之間構成復雜的網(wǎng)絡,調控炎癥的發(fā)生、發(fā)展和轉歸。而IL-10在其中發(fā)揮著重要的病理生理學作用。 IL-10是一種具有抗炎作用的細胞因子,其主要生物活性表現(xiàn)為直接抑制炎癥細胞活化,進而抑制細胞因子的產(chǎn)生。適時的、適度的IL-10的產(chǎn)生可以調節(jié)炎癥的程度,并保護正常組織免受炎癥損傷,在機體對抗感染的過程中發(fā)揮重要的保護性作用。肺泡巨噬細胞(Alveolar Macrophage)是肺內(nèi)重要的免疫防御細胞,具有趨化、吞噬和殺菌作用,是炎癥反應中炎癥因子及IL-10的重要來源細胞。 Clara細胞是指襯覆于遠端細支氣管的非纖毛上皮細胞,其分泌蛋白(Clara cell secretory protein, CCSP,又稱CC1O)屬于子宮珠蛋白(uteroglobin,UG)家族；子宮珠蛋白是一種進化過程中高度保守的分泌性多功能非類固醇類激素蛋白,具有抗炎、抗氧化、免疫調節(jié)、腫瘤抑制及刺激胚胎生長的作用。AF-1 (Antiflammin-1, AF-1)是來源于子宮珠蛋白C末端第三個α螺旋的九肽,已有的研究證明AF-1具有明顯的抗炎作用。但關于AF-1的抗炎作用是否與IL-10有關卻未見報道。 目的： 1.觀察AF-1對LPS誘導的巨噬細胞IL-10分泌及表達的影響。 2.檢測巨噬細胞子宮珠蛋白結合蛋白(uteroglobin-binding protein, UGBP)的表達。 3.探討UGBP在介導AF-1對LPS誘導的巨噬細胞IL-10分泌及表達影響中的作用,初步揭示AF-1的抗炎機制,為急性肺損傷的治療提供新的線索和思路。 方法： 1.應用ELISA和RT-PCR法分別檢測巨噬細胞培養(yǎng)上清液中IL-10蛋白含量和細胞IL-10mRNA表達,觀察AF-1對LPS誘導的巨噬細胞IL-10表達的影響。 2.應用細胞免疫熒光技術及RT-PCR法檢測UGBP在巨噬細胞的表達。 3.通過應用抗-UGBP抗體預處理巨噬細胞,觀察抗-UGBP多抗對于AF-1引起的LPS誘導的巨噬細胞IL-10分泌及表達的影響。 結果： 1.LPS可誘導巨噬細胞IL-10的分泌和表達增加。AF-1對正常巨噬細胞IL-10的分泌和mRNA表達無影響,但可有效促進內(nèi)毒素誘導的巨噬細胞IL-10的分泌和mRNA表達,并具有一定的時間、劑量依賴性。 2.免疫熒光及RT-PCR實驗均證實在巨噬細胞上有UGBP的表達。 3.抗-UGBP抗體預處理可抑制AF-1促進內(nèi)毒素誘導的巨噬細胞IL-10的分泌及mRNA表達增加的作用。 結論： 1.AF-1對正常巨噬細胞IL-10的分泌和mRNA表達無影響,但可有效促進內(nèi)毒素誘導的巨噬細胞IL-10的分泌和mRNA表達,并具有一定的時間、劑量依賴性,提示AF-1抗炎作用的產(chǎn)生與調節(jié)IL-10的分泌和mRNA表達有關。 2.本實驗首次證實巨噬細胞上有UGBP的表達。 3.本實驗首次證實AF-1促進內(nèi)毒素誘導的巨噬細胞IL-10的分泌及mRNA表達的效應有賴于UGBP的介導。
【學位單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2009
【中圖分類】：R563
【部分圖文】：

總R獄在1.2%瓊脂糖凝膠電泳圖

LPS作用不同時間對巨噬細胞IL10mRNA表達的影響

4加bp.困曰IL-10367bPGAPDH580bPIL10367bpGAPDH580bPMarkCrohZh4hsh12h24h圖6LPS作用不同時間對巨噬細胞IL10mRNA表達的影響上圖是對照組，下圖是LPS組
【參考文獻】

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本文編號：2870753