本文關(guān)鍵詞：IL-17A對(duì)肺纖維化大鼠肺組織炎癥的調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：通過觀察經(jīng)博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化大鼠肺組織和肺泡巨噬細(xì)胞（Alveolar macrophage，AM）中IL-17A的表達(dá)，探討IL-17A在肺纖維化發(fā)病機(jī)制中的作用和意義。方法：1.取20只Wistar雌性大鼠（體重為180~200g）隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（NS組）和博萊霉素致肺纖維化模型實(shí)驗(yàn)組（BLM組），每組10只；2.BLM組：氣管內(nèi)一次性注入經(jīng)生理鹽水稀釋的博萊霉素溶液0.2ml（5mg/kg體重，BLM溶液濃度為5mg/ml），用以誘導(dǎo)大鼠復(fù)制肺纖維化模型；NS組：氣管內(nèi)一次性注入0.2ml生理鹽水（1ml／kg體重）；3.然后各組分別于氣管內(nèi)灌注后第7天和第28天各隨機(jī)處死大鼠5只，無菌操作下行支氣管肺泡灌洗，回收支氣管肺泡灌洗液（Bronchial Alveolar Lavage Fluid，BALF），取出肺組織，病理學(xué)方法觀察各階段肺內(nèi)炎癥和纖維化程度，免疫組化檢測肺組織IL-17A表達(dá)。收集BALF分為兩組，一組用作細(xì)胞總、分?jǐn)?shù)測定，以及用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)法（ELISA法）測定BALF中TNF-、IL-17A的含量；一組用作AM的分離與純化、培養(yǎng)，培養(yǎng)上清液用ELISA法測定IL-17A的含量，提取AM總RNA后用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase ChainReaction，RT-PCR）測定肺泡巨噬細(xì)胞IL-17A的mRNA表達(dá)。結(jié)果：1.肺組織病理切片觀察：NS組第7天及第28天均無肺泡炎及肺纖維化表現(xiàn)，肺組織結(jié)構(gòu)正常；BLM組第7天時(shí)主要表現(xiàn)為肺泡炎，BLM組第28天時(shí)主要表現(xiàn)為肺纖維化，但肺泡炎仍存在；2.BALF細(xì)胞總、分?jǐn)?shù)的測定結(jié)果分析：NS組BALF細(xì)胞總數(shù)無明顯變化，而BLM組BALF細(xì)胞總數(shù)第7天明顯增高，與NS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，第28天BALF細(xì)胞總數(shù)恢復(fù)至正常水平，與NS組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；3.肺泡炎和肺纖維化分級(jí)計(jì)分的定量分析：NS組各時(shí)間點(diǎn)均未表現(xiàn)肺泡炎及肺纖維化。BLM組肺泡炎程度在第7天表現(xiàn)顯著，與NS組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)，第28天時(shí)肺泡炎仍存在，但程度明顯減輕，與NS組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。BLM組肺纖維化程度在第7天表現(xiàn)中度，在第28天表現(xiàn)顯著，與NS組比較肺纖維化均加重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4.免疫組化肺組織IL-17A蛋白的分析：NS組大鼠肺組織中IL-17A表達(dá)弱，第7天及第28天均無明顯變化，而BLM組第7天及第28天IL-17A表達(dá)較NS組比較明顯增強(qiáng)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），第28天表達(dá)較第7天有所降低。5.ELISA檢測BALF中TNF-、IL-17A顯示NS組大鼠BALF中的TNF-、IL-17A含量無明顯變化，，而BLM組第7天及第28天TNF-、IL-17A含量明顯增高，與NS組比較，差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)，但第28天時(shí)TNF-、IL-17A含量較第7天降低。6.ELISA檢測AM培養(yǎng)上清液中IL-17A顯示NS組7天、28天AM各時(shí)期培養(yǎng)中呈弱表達(dá)，各時(shí)期之間相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；BLM組7天、28天AM培養(yǎng)第12小時(shí)、第24小時(shí)、第48小時(shí)上清液中IL-17A的表達(dá)與NS組比較均明顯增高，差異顯著有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01）。7.RT-PCR檢測顯示IL-17A在NS組AM各時(shí)期培養(yǎng)中有微弱表達(dá)，各時(shí)期之間相比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）；BLM組7天、28天各時(shí)期的表達(dá)明顯高于NS組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05），尤以第12h顯著，24h、48h表達(dá)逐漸減弱。8.相關(guān)分析：BALF中細(xì)胞總數(shù)、BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺組織IL-17A蛋白的表達(dá)與肺泡炎程度積分呈正相關(guān)。 BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺組織IL-17A蛋白的表達(dá)三者之間呈正相關(guān)。第7天時(shí)BALF中TNF-含量、BALF中IL-17A含量、肺組織IL-17A蛋白的表達(dá)分別與BALF中性粒細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)；而第28天時(shí)它們之間的相關(guān)性較差。結(jié)論：1.本實(shí)驗(yàn)通過博萊霉素誘導(dǎo)成功建立了大鼠肺纖維化模型。2.肺纖維化的發(fā)展中，肺泡巨噬細(xì)胞和肺組織中IL-17A表達(dá)及分泌均升高，在肺泡炎階段尤為明顯。3. IL-17A可能促進(jìn)了肺泡炎的發(fā)展，并且在肺纖維化的發(fā)生、發(fā)展病理過程中可能參與了作用。
【關(guān)鍵詞】：肺泡巨噬細(xì)胞 IL-17A 博萊霉素 肺纖維化
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 材料與方法13-23
• 結(jié)果23-37
• 討論37-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 英漢縮略詞對(duì)照表50-51
• 致謝51-52
• 綜述52-65
• 參考文獻(xiàn)59-65

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：IL-17A對(duì)肺纖維化大鼠肺組織炎癥的調(diào)控研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：285641