本文關(guān)鍵詞：黃芩素對TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:研究黃芩素(Baicalein,BAE)對TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的影響，并初步探討其作用機(jī)制。 方法:體外培養(yǎng)人胚肺二倍體成纖維細(xì)胞WI-38，制備TGF-β_1誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞WI-38向肌成纖維細(xì)胞分化的細(xì)胞模型。采用MTT法檢測WI-38細(xì)胞的增殖率，WesternBlot法檢測細(xì)胞內(nèi)α-平滑肌肌動蛋白(α-smoothmuscleactin,α-SMA)、I型膠原蛋(CollagenI,ColI)及相關(guān)蛋白表達(dá)的變化，光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，免疫組化檢測細(xì)胞內(nèi)α-SMA蛋白表達(dá)。隨后在TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞WI-38向肌成纖維細(xì)胞分化的細(xì)胞模型上，給予不同劑量的BAE干預(yù)，用MTT法檢測BAE對WI-38細(xì)胞的增殖的影響，免疫組化法觀察WI-38細(xì)胞內(nèi)α-SMA、Smad2蛋白的表達(dá)，透射電鏡觀察WI-38細(xì)胞中細(xì)胞器的結(jié)構(gòu)改變，掃描電鏡觀察WI-38細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)改變。WestornBlot檢測WI-38細(xì)胞分化過程中相關(guān)蛋白α-SMA、ColI、Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3、Smad7蛋白的表達(dá)，以ReverseTranscriptionPCR法檢測BAE對TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞WI-38細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化過程中α-SMA、ColI、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表達(dá)的影響。 結(jié)果：MTT法檢測表明：與正常WI-38細(xì)胞組相比，5~40μg·L-1TGF-β_1作用WI-38細(xì)胞4d后，細(xì)胞增殖率上升(P0.05,P0.01)，呈劑量依賴性；光學(xué)顯微鏡下可見：細(xì)胞增殖顯著，細(xì)胞形態(tài)改變，從較大的紡錘形或星形結(jié)構(gòu)的成纖維細(xì)胞分化為扁平狀纖維結(jié)構(gòu)的肌成纖維細(xì)胞，分化明顯；免疫組化熒光檢測顯示：正常WI-38細(xì)胞組α-SMA蛋白僅在細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)，模型組α-SMA蛋白在細(xì)胞核與胞漿內(nèi)均表達(dá)；WesternBlot結(jié)果：TGF-β_1體外誘導(dǎo)4d后，WI-38細(xì)胞內(nèi)α-SMA、ColI蛋白的表達(dá)均上調(diào)，這一結(jié)果與免疫組化結(jié)果一致；與TGF/Smads信號通路相關(guān)的Smad2、Smad3蛋白表達(dá)均上調(diào)，并使其磷酸化(P0.01,P0.05)。由此表明在本實驗條件下，TGF-β_1體外誘導(dǎo)WI-38成纖維細(xì)胞能分化為肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞模型，該作用可以維持3d。BAE干預(yù)下，光學(xué)顯微鏡觀察結(jié)果：TGF-β_1誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞分化過程中細(xì)胞增殖作用被明顯抑制；免疫組化顯示：α-SMA蛋白在WI-38細(xì)胞包漿內(nèi)表達(dá)減少，Smad2蛋白在WI-38細(xì)胞核內(nèi)表達(dá)減少；透射電鏡觀察表明：WI-38細(xì)胞線粒體腫脹減少，髓鞘樣變改善；掃描電鏡觀察顯示：WI-38細(xì)胞表面微絨毛減少，褶皺較少出現(xiàn)；WesternBlot結(jié)果：WI-38細(xì)胞中α-SMA、ColI蛋白的表達(dá)下調(diào)(P0.01,P0.05)，同時與TGF-β/Smads信號通路相關(guān)的Smad2、p-Smad2、Smad3、p-Smad3蛋白的表達(dá)下調(diào)(P0.01,P0.05)，而Smad7蛋白表達(dá)上調(diào)(P0.05)；RT-PCR結(jié)果：TGF-β_1體外誘導(dǎo)WI-38細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化α-SMA、ColI、Smad2、Smad3mRNA的表達(dá)下調(diào)(P0.01,P0.05)，Smad7mRNA的表達(dá)上調(diào)(P0.05)，由此提示BAE可抑制WI-38細(xì)胞分化。 結(jié)論：BAE對TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的在分化過程有一定的抑制作用，，該作用與抑制Smad2/3磷酸化及其細(xì)胞核轉(zhuǎn)位，上調(diào)Smad7，從而下調(diào)α-SMA、抑制細(xì)胞內(nèi)膠原合成并干預(yù)TGF-β/Smads信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：黃芩素 成纖維細(xì)胞 肌成纖維細(xì)胞 肺纖維化 α-SMA WI-38 TGF-β_1 膠原蛋白 TGF-β/Smads信號通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R563;R96
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-17
• 第一部分 TGF-β1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的分化17-32
• 一 材料17-19
• 二 方法19-22
• 三 結(jié)果22-31
• 四 小結(jié)31-32
• 第二部分 黃芩素對TGF-β1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞的分化機(jī)制的研究32-47
• 一 材料32-33
• 二 方法33-37
• 三 統(tǒng)計學(xué)處理37
• 四 結(jié)果37-46
• 五 小結(jié)46-47
• 討論47-52
• 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-62
• 綜述62-72
• 參考文獻(xiàn)69-72
• 附錄72-73
• 中英文縮略詞表73-74
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章74-75
• 致謝75-76

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 林箐;倪蓮芳;任雅麗;劉新民;;PPARγ和NF-κB在肺纖維化中的表達(dá)與意義[J];北京大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2009年05期

2 李理;李偉峰;蔡琳;袁偉鋒;黃文杰;;吉非替尼對博萊霉素致肺纖維化小鼠α平滑肌肌動蛋白的抑制作用[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2010年12期

  本文關(guān)鍵詞：黃芩素對TGF-β_1體外誘導(dǎo)肺成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞分化的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：283810