第一部分不同激發(fā)方法制作大鼠哮喘模型的比較 目的:探討制作大鼠哮喘模型新的激發(fā)方法。 方法:取4周齡雄性SD大鼠30只,隨機取其中10只設為對照(Control)組,在致敏階段以等量生理鹽水替代10%卵清蛋白(Ovalbumin,OVA)混合液腹腔注射,激發(fā)階段以生理鹽水替代2%OVA超聲霧化吸入。其余20只于第1天腹腔注射含氫氧化鋁、滅活百日咳桿菌的10%OVA 1ml致敏,2周后隨機分為兩組,各10只,分別泵霧化(Pump)和超聲霧化(Ultrasonic)吸入2%OVA激發(fā),復制動物哮喘模型;比較兩種激發(fā)方式優(yōu)缺點。 結果: 1.哮喘模型的建立:與Control組相比,Pump組及Ultrasonic組大鼠在經(jīng)過致敏和激發(fā)階段后出現(xiàn)了明顯的呼吸窘迫癥狀:煩躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、青紫等表現(xiàn);肺組織病理學顯示氣道周圍明顯炎癥改變;肺泡灌洗液(BALF)中細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞(EOS)和中性粒細胞百分比的改變提示大鼠哮喘模型復制成功。 2.通過兩種霧化激發(fā)方式制作哮喘的模型,均出現(xiàn)了典型的哮喘樣癥狀,但Pump組首次開始出現(xiàn)哮喘樣癥狀的天數(shù)明顯早于Ultrasonic組(P＜0.01);在激發(fā)天數(shù)相同時,Pump組發(fā)生哮喘樣癥狀的大鼠數(shù)明顯多于Ultrasonic組(P＜0.05)。但兩組在肺組織病理學及BALF中細胞總數(shù)及嗜酸性粒細胞(EOS)和中性粒細胞百分比無明顯差異。 結論: 1.采用卵蛋白(OVA)與免疫佐劑氫氧化鋁、滅活百日咳桿菌致敏、OVA泵霧化和超聲霧化激發(fā)均能夠成功復制大鼠哮喘模型。 2.泵霧化激發(fā)方式優(yōu)于傳統(tǒng)的超聲霧化激發(fā)方式。 第二部分布地奈德混懸液對大鼠哮喘模型氣道炎癥的保護作用 目的:探討吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德混懸液(Budesonide,BUD)對大鼠哮喘模型氣道炎癥的保護作用。 方法:取4周齡雄性SD大鼠40只,隨機設為對照組(Control)、哮喘模型(Model)組、布地奈德(BUD)組和地塞米松(DexamethasoneDXM)組四組,每組各10只。Control組使用泵霧化激發(fā),余制作同第一部分。Model組制作同第一部分Pump組;BUD組和DXM組除在每次激發(fā)前分別用BUD混懸液吸入,DXM腹腔注射等干預處理,余致敏及激發(fā)步驟同Model組。末次激發(fā)24小時后麻醉處死大鼠,取激發(fā)后各組大鼠BALF液及肺組織分別測定BALF液細胞總數(shù)和各組細胞所占百分比,結合肺組織病理學檢測分析氣道炎癥狀況。 結果: 1.BUD、DXM組激發(fā)后仍出現(xiàn)哮喘癥狀,但較Model組明顯減輕。兩組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分及支氣管管壁周圍EOS數(shù)較Control組顯著增高(P均＜0.01),但較Model組顯著降低,分別為P均＜0.05和P均＜0.01,而兩組間支氣管周圍炎性細胞浸潤評分及支氣管管壁周圍EOS數(shù)無明顯差異(P均＞0.05)。 2.相對于Control組,Model組、BUD組、DXM組三組的BALF中細胞總數(shù)顯著增高(P均＜0.01);EOS、中性粒細胞百分比顯著增高,巨噬細胞顯著降低(P均＜0.01)。與Model組相比,BUD組和DXM組EOS、中性粒細胞百分比顯著降低,巨噬細胞明顯增高(P＜0.05);差異有顯著性;BUD組和DXM組兩組間無顯著差異(P＞0.05)。 結論: 布地奈德混懸液泵霧化能顯著改善大鼠哮喘模型氣道炎癥且與全身使用地塞米松有相似的作用。 第三部分布地奈德混懸液對哮喘大鼠模型肺組織血紅素氧合酶-1的調(diào)控機制 目的:研究大鼠哮喘模型肺組織血紅素氧合酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)蛋白及基因表達特點,以及BUD對HO-1蛋白及基因表達的影響,為闡明BUD治療哮喘的作用機制提供實驗室數(shù)據(jù)。 方法:取4周齡雄性SD大鼠50只,隨機設為對照Control組、Model組、血晶素(Hemin)組、BUD組和DXM組5組,每組各10只;Control組、Model組制作同前第二部分;Hemin組、BUD組和DXM組除在每次激發(fā)前分別用Hemin、BUD、DXM等干預處理外,其余處理同Model組。末次激發(fā)24小時后麻醉處死大鼠,取激發(fā)后各組動物動脈血,BALF及肺組織,分別測定碳氧血紅蛋白(COHb)含量和BALF細胞總數(shù)和各組細胞分類百分比,用免疫組織化學法測定肺組織HO-1的蛋白表達變化、RT-PCR法測定HO-1基因表達的變化;結合肺組織病理學檢測分析氣道炎癥狀況。 結果: 1.BUD、DXM、Hemin組激發(fā)后亦出現(xiàn)哮喘樣癥狀,但較Model組明顯緩解。相對于Control組,Model組、Hemin組、BUD組及DXM組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分顯著增高(P均＜0.01);而相對于Model組,Hemin組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分顯著減低(P＜0.05)、BUD組及DXM組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分亦顯著減低(P均＜0.01),三組之間無顯著差異(P均＞0.05);相對于Control組,Model組、Hemin組、BUD及DXM組支氣管管壁周圍EOS顯著增高(P均＜0.01);而相對于Model組、Hemin組、BUD組及DXM組支氣管管壁周圍EOS顯著減低(P均＜0.01),三組之間無顯著差異(P均＞0.05)。 2.與Control組相比,Model組、Hemin組、BUD組和DXM組BALF中細胞總數(shù)顯著增高(P＜0.01);與Model組相比,Hemin組、BUD組和DXM組細胞總數(shù)顯著下降(P＜0.01),三組間無顯著差異(P均＞0.05);與Control組相比,Model組、Hemin組、BUD組和DXM組EOS、中性粒細胞百分比顯著增高,巨噬細胞百分比顯著降低,(P均＜0.01)差異有顯著性;與Model組相比,Hemin組、BUD組和DXM組EOS、中性粒細胞百分比顯著減低;巨噬細胞百分比顯著增高,(P＜0.05)差異有顯著性,而Hemin、BUD和DXM組三組間無顯著差異(P均＞0.05)。 3.免疫組織化學顯示:與Control相比,Model組、Hemin組、BUD組及DXM組HO-1蛋白表達顯著增強(P＜0.01);與Model組相比,Hemin組、BUD組及DXM組HO-1表達亦顯著增強(P均＜0.01),而三組間HO-1表達相比無顯著性差異(P均＞0.05)。高倍鏡下見HO-1陽性細胞主要定位于支氣管上皮細胞、粘膜下巨噬細胞,氣道平滑肌細胞偶有表達。 4.RT-PCR結果分析:與Control組相比,Hemin組、BUD組和DXM組檢測結果顯示HO-1mRNA表達顯著增高,(P均＜0.01);而Model組明顯增高(P＜0.05);與Model組相比,Hemin組、BUD組和DXM組明顯增高(P均＜0.05)。 5.相對于Control組,Model組、BUD組、DXM組和Hemin組的COHb含量均顯著增高(P均＜0.01)。而相對于Model組,BUD組COHb含量無顯著差異(P＞0.05);但DXM和Hemin組COHb含量均顯著增高(P均＜0.05),而后兩組組之間無明顯差異(P均＞0.05)。 結論: 1.HO-1對大鼠哮喘模型氣道炎癥有保護作用。 2.布地奈德混懸液及DXM均可上調(diào)大鼠哮喘模型HO-1蛋白,基因的表達,增強其活性。 3.布地奈德混懸液及DXM對氣道炎癥的保護可能與其上調(diào)HO-1表達有關。
【學位單位】：中南大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2007
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

層及粘膜外層、肺泡壁和小血管周圍等處浸潤，肺間質(zhì)及肺泡腔內(nèi)可見EOS，支氣管內(nèi)可見粘液栓，氣道上皮有損傷、斷裂，基底膜稍增厚且形態(tài)不規(guī)則，平滑肌有輕度的增生。(見圖1一2)。2.3.2各組肺組織病理學的比較:

(l)支氣管周圍炎性細胞浸潤評分:與Control組相比較，Pump組及ultrasonic組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分顯著增高(尸均<0.01);Pump組與ultrasonic組支氣管周圍炎性細胞浸潤評分無顯著差異(P>0.05)(見表1一2，圖1一D)。(2)支氣管管壁周圍EOS變化:與Control組比較，Pump組及Ultrasonic組支氣管管壁周圍Eos顯著增高(尸均<0.01);pump組與ultrasoni。組支氣管管壁周圍EOS無顯著差異(P>0.05)(見表l一2，圖l一E)。表1一2各組肺組織病理學檢查比較組別ControPumPN支氣管周圍炎性細胞浸潤評分(分)支氣管管壁周圍E0s(個/~2) 100.10士 0.067.01士2.42 2.86士0.34**1011.02士119.13**Ultrasonie 2.77士0.21**注:**與Cofitrol組相比 P<0.011006.73士71.25**3…2’5…2…‘’5…‘…O’5…0一率州則側記雙令畫國冷襄聳篇ControlPllmPultrasonie圖1一D:各組肺組織支氣管周圍炎性細胞比較注:**與Control組相比P<0.01。

(l)BALF細胞細胞總數(shù)分析:與Control組相比，pu哪組、Ultrasonie組BALF細胞細胞總數(shù)顯著增高(尸均<0.01);但Pump組和Ultrasonic兩組間無顯著差異(P>0.05)(見表l一3，圖1一3、l一F)。(2)各細胞分類百分比較:與Control組相比，pu呷組Ultrasonie組各細胞分類百分比中EOS，淋巴細胞、顯著增高，尤以EOS為主(尸均<0.01);巨噬細胞顯著降低(p均<0.01);但pump組和Ultrasonie兩組間無顯著差異(P>o.os)(見表l一3，圖l一4、l一G)。表1一3兩組哮喘模型與正常對照大鼠BALF白細胞總數(shù)(義 104/ml)組別細胞總數(shù)(x一04/m一)嗜酸粒細胞數(shù)%淋巴細胞%巨噬細胞%中性粒細胞%其它%Contf01U!trasoniePumPl0l017.1土1.30 117.1士8一5**121.3士10.4** 4.3以).6424.9場.1**26.2土8.34** 8.3士0.04 3.7功.422士習.049妊 2.0110.肚1.1284.7士2.31 51.6士5.31**50.4士2.25**12一4士 1.35**2.5均.02 11.2士1.01** 2.4士0.05注:**與eontrol組相比P<0.ol

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