目的本研究通過檢測博萊霉素致大鼠肺纖維化不同時(shí)間點(diǎn)肺組織蛋白酶B (Cathepsin B,CB )的表達(dá),探討CB在肺纖維化形成中的作用機(jī)制;通過檢測大鼠肺纖維化時(shí)細(xì)胞凋亡及CB的動態(tài)變化,探討細(xì)胞凋亡和CB變化在肺間質(zhì)纖維化中的意義;通過檢測黃芪甲甙干預(yù)的大鼠肺纖維化CB的變化,探討黃芪甲甙對CB的影響,從而闡明黃芪甲甙治療肺間質(zhì)纖維化疾病的作用機(jī)制。 方法清潔級健康Sprague Dawley(SD)大鼠48只,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,隨機(jī)分為對照組(C組);模型組(B組);干預(yù)組(T組)。B組按7天、14天、28天、35天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為4個(gè)亞組,即B7、B14、B28、B35;T組按7天、14天、28天3個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為T7、T14、T28。每個(gè)亞組及C組均為6只大鼠。模型組和干預(yù)組氣管內(nèi)注射博來霉素(BLM,5mg/kg)誘導(dǎo)肺纖維化,對照組在相同條件下給予生理鹽水。第二天起干預(yù)組大鼠每天經(jīng)胃管灌服0.1g/L黃芪甲甙2ml,其余兩組相同條件下給予助溶劑羧甲基纖維素鈉。相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)處死動物取出肺組織,進(jìn)行病理學(xué)觀察;測定肺組織中羥脯氨酸含量;用免疫組化和RT-PCR觀察各組鼠肺組織CB蛋白及mRNA表達(dá)的水平;TUNEL檢測28天各組大鼠肺組織細(xì)胞凋亡。 結(jié)果 1、肺組織HE染色、Masson染色:對照組大鼠觀察未見明顯病變。模型組大鼠第7天表現(xiàn)為明顯的急性炎癥期,肺泡腔、肺間質(zhì)內(nèi)有大量的多核及單核細(xì)胞浸潤,伴有水腫和輕度出血,病變嚴(yán)重區(qū)肺泡正常結(jié)構(gòu)被炎性肉芽組織破壞。14天肺組織炎較前有所減輕,但仍有出血及水腫,成纖維細(xì)胞增多,肺間隔明顯增寬,有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變; 28天組,肺組織炎較前略有減輕,肺泡結(jié)構(gòu)破壞,大量膠原沉積在新生的毛細(xì)血管周圍,肺泡間隔及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據(jù),間質(zhì)內(nèi)炎性細(xì)胞逐漸向以淋巴細(xì)胞浸潤為主過渡。模型組、干預(yù)組肺組織炎各期均明顯比對照組重,而肺纖維化僅第14天和第28天與對照組比較差異顯著。干預(yù)組與模型組病理變化有同一規(guī)律,但肺組織炎、肺纖維化程度都輕于模型組。說明黃芪甲甙可以減輕肺組織炎和肺纖維化程度。 2羥脯氨酸(HYP)含量:模型組HYP含量均高于對照組及干預(yù)組(P0.01),模型組HYP含量隨造模時(shí)間的延長逐漸增高,28天達(dá)到最高值;干預(yù)組HYP含量成低水平增高趨勢,HYP含量均高于對照組而低于模型組(P0.01或P0.05)。 3肺組織細(xì)胞凋亡變化:模型組第28天大鼠肺組織中細(xì)胞凋亡指數(shù)為(13.7±3.4)%,對照組為(1.9±0.3)%和干預(yù)組(5.34±1.54)%,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=79.90,P0.01)。 4肺組織CB和CB mRNA在肺纖維化過程中的表達(dá)(SABC法和RT-PCR):免疫組化以及RT-PCR結(jié)果顯示CB和CB mRNA表達(dá)在正常肺組織中表達(dá)較弱,在模型組7 d時(shí)表達(dá)增強(qiáng),14d進(jìn)一步增強(qiáng),28天達(dá)到最高值,35天時(shí)較28天開始減弱,但仍強(qiáng)于正常組;干預(yù)組CB和CB mRNA表達(dá)量成低水平增高趨勢,CB和CB mRNA表達(dá)量均高于對照組而低于模型組(P0.01或P0.05)。 結(jié)論: 1、CB在實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維化發(fā)病過程中起重要作用,其過度表達(dá)可能參與了肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。 2、博萊霉素致大鼠肺間質(zhì)纖維化時(shí)引起肺組織CB表達(dá)上調(diào),啟動肺組織細(xì)胞凋亡程序,在肺纖維化發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。 3、黃芪甲甙可能通過抑制CB的過度表達(dá),對實(shí)驗(yàn)性大鼠肺纖維化具有良好的治療作用。
【學(xué)位單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R563.9;R285.5
【部分圖文】：

:大鼠 CB 蛋白表達(dá)趨勢同模型組，但低于<0.05 或 P<0.01）。（圖 17、19，表 3）組織 CB mRNA 的表達(dá)結(jié)果見明顯表達(dá)或微弱表達(dá)，模型組 CB mRNA 35 天有所下降但仍高表達(dá)。各干預(yù)組表達(dá)對照組,且相差顯著（P<0.05 或 P<0.01）。 4 各組大鼠肺組織 CBmRNA 表達(dá)的變化.4 CBmRNA expression in rat lungs of differe例數(shù) 7 天 14 天 6 42.85±2.00 42.85±2.6 60.07±10.82㥮 67.13±116 44.50±15.77※ 45.57±16與對照組比較 P<0.01；※與模型組比較 P<0.01

第 28 天大鼠肺組織 CBmRNA 電泳圖 圖 4 第 7 天大鼠肺組織 CBmRNA（M：marker;1:對照組;2: 模型組;3:干預(yù)組）組織細(xì)胞凋亡變化染色陽性細(xì)胞的細(xì)胞核呈棕黃色，可見細(xì)胞核固縮呈圓形，有的呈染色質(zhì)凝集成團(tuán)，分布在核的邊緣，符合凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，少凋亡小體。模型組細(xì)胞凋亡指數(shù)(13.70±3.37)高于對照組(1.90±組(5.34±1.54),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=79.90,P<0.01)。陽性細(xì)胞主皮細(xì)胞,支氣管黏膜上皮細(xì)胞、少數(shù)血管內(nèi)皮細(xì)胞和部分炎性細(xì)胞(圖表 5)。表 5 實(shí)驗(yàn)大鼠肺組織細(xì)胞凋亡指數(shù)比較( ±s)b.5 The cell apoptosis index in the lung tissue of the rat

圖 6 對照組大鼠肺組織病理改變 圖 7 模型組第7天大鼠肺組織病理改變（HE 染色，×100） （HE 染色，×100）圖 8 干預(yù)組第7天大鼠肺組織病理改變 圖 9 模型組第28天大鼠肺組織病理（HE 染色，×100） 改變（HE 染色，×100）

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫曉芳;三七總皂苷防治博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

本文編號：2831924