發(fā)布時間：2020-10-01 19:47

　　 目的本研究通過檢測博萊霉素致大鼠肺纖維化不同時間點肺組織蛋白酶B (Cathepsin B,CB )的表達,探討CB在肺纖維化形成中的作用機制;通過檢測大鼠肺纖維化時細胞凋亡及CB的動態(tài)變化,探討細胞凋亡和CB變化在肺間質纖維化中的意義;通過檢測黃芪甲甙干預的大鼠肺纖維化CB的變化,探討黃芪甲甙對CB的影響,從而闡明黃芪甲甙治療肺間質纖維化疾病的作用機制。 方法清潔級健康Sprague Dawley(SD)大鼠48只,適應性飼養(yǎng)一周后,隨機分為對照組(C組);模型組(B組);干預組(T組)。B組按7天、14天、28天、35天4個時間點分為4個亞組,即B7、B14、B28、B35;T組按7天、14天、28天3個時間點分為T7、T14、T28。每個亞組及C組均為6只大鼠。模型組和干預組氣管內注射博來霉素(BLM,5mg/kg)誘導肺纖維化,對照組在相同條件下給予生理鹽水。第二天起干預組大鼠每天經胃管灌服0.1g/L黃芪甲甙2ml,其余兩組相同條件下給予助溶劑羧甲基纖維素鈉。相應時間點處死動物取出肺組織,進行病理學觀察;測定肺組織中羥脯氨酸含量;用免疫組化和RT-PCR觀察各組鼠肺組織CB蛋白及mRNA表達的水平;TUNEL檢測28天各組大鼠肺組織細胞凋亡。 結果 1、肺組織HE染色、Masson染色:對照組大鼠觀察未見明顯病變。模型組大鼠第7天表現為明顯的急性炎癥期,肺泡腔、肺間質內有大量的多核及單核細胞浸潤,伴有水腫和輕度出血,病變嚴重區(qū)肺泡正常結構被炎性肉芽組織破壞。14天肺組織炎較前有所減輕,但仍有出血及水腫,成纖維細胞增多,肺間隔明顯增寬,有膠原沉積及斑片狀的纖維化改變; 28天組,肺組織炎較前略有減輕,肺泡結構破壞,大量膠原沉積在新生的毛細血管周圍,肺泡間隔及部分肺泡腔被膠原和纖維蛋白占據,間質內炎性細胞逐漸向以淋巴細胞浸潤為主過渡。模型組、干預組肺組織炎各期均明顯比對照組重,而肺纖維化僅第14天和第28天與對照組比較差異顯著。干預組與模型組病理變化有同一規(guī)律,但肺組織炎、肺纖維化程度都輕于模型組。說明黃芪甲甙可以減輕肺組織炎和肺纖維化程度。 2羥脯氨酸(HYP)含量:模型組HYP含量均高于對照組及干預組(P0.01),模型組HYP含量隨造模時間的延長逐漸增高,28天達到最高值;干預組HYP含量成低水平增高趨勢,HYP含量均高于對照組而低于模型組(P0.01或P0.05)。 3肺組織細胞凋亡變化:模型組第28天大鼠肺組織中細胞凋亡指數為(13.7±3.4)%,對照組為(1.9±0.3)%和干預組(5.34±1.54)%,差異有統計學意義(F=79.90,P0.01)。 4肺組織CB和CB mRNA在肺纖維化過程中的表達(SABC法和RT-PCR):免疫組化以及RT-PCR結果顯示CB和CB mRNA表達在正常肺組織中表達較弱,在模型組7 d時表達增強,14d進一步增強,28天達到最高值,35天時較28天開始減弱,但仍強于正常組;干預組CB和CB mRNA表達量成低水平增高趨勢,CB和CB mRNA表達量均高于對照組而低于模型組(P0.01或P0.05)。 結論: 1、CB在實驗性大鼠肺纖維化發(fā)病過程中起重要作用,其過度表達可能參與了肺纖維化的發(fā)生發(fā)展過程。 2、博萊霉素致大鼠肺間質纖維化時引起肺組織CB表達上調,啟動肺組織細胞凋亡程序,在肺纖維化發(fā)生、發(fā)展中起到重要的作用。 3、黃芪甲甙可能通過抑制CB的過度表達,對實驗性大鼠肺纖維化具有良好的治療作用。
【學位單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2007
【中圖分類】：R563.9;R285.5
【部分圖文】：

:大鼠 CB 蛋白表達趨勢同模型組，但低于<0.05 或 P<0.01）。（圖 17、19，表 3）組織 CB mRNA 的表達結果見明顯表達或微弱表達，模型組 CB mRNA 35 天有所下降但仍高表達。各干預組表達對照組,且相差顯著（P<0.05 或 P<0.01）。 4 各組大鼠肺組織 CBmRNA 表達的變化.4 CBmRNA expression in rat lungs of differe例數 7 天 14 天 6 42.85±2.00 42.85±2.6 60.07±10.82㥮 67.13±116 44.50±15.77※ 45.57±16與對照組比較 P<0.01；※與模型組比較 P<0.01

第 28 天大鼠肺組織 CBmRNA 電泳圖 圖 4 第 7 天大鼠肺組織 CBmRNA（M：marker;1:對照組;2: 模型組;3:干預組）組織細胞凋亡變化染色陽性細胞的細胞核呈棕黃色，可見細胞核固縮呈圓形，有的呈染色質凝集成團，分布在核的邊緣，符合凋亡細胞的形態(tài)學特點，少凋亡小體。模型組細胞凋亡指數(13.70±3.37)高于對照組(1.90±組(5.34±1.54),差異有統計學意義(F=79.90,P<0.01)。陽性細胞主皮細胞,支氣管黏膜上皮細胞、少數血管內皮細胞和部分炎性細胞(圖表 5)。表 5 實驗大鼠肺組織細胞凋亡指數比較( ±s)b.5 The cell apoptosis index in the lung tissue of the rat

圖 6 對照組大鼠肺組織病理改變 圖 7 模型組第7天大鼠肺組織病理改變（HE 染色，×100） （HE 染色，×100）圖 8 干預組第7天大鼠肺組織病理改變 圖 9 模型組第28天大鼠肺組織病理（HE 染色，×100） 改變（HE 染色，×100）

【引證文獻】

相關博士學位論文 前1條

1 孫曉芳;三七總皂苷防治博萊霉素誘導小鼠肺纖維化的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2011年

本文編號：2831924