目的 支氣管哮喘是嗜酸性粒細(xì)胞，肥大細(xì)胞，淋巴細(xì)胞等多種炎性細(xì)胞參與的呼吸道慢性炎癥。外界變應(yīng)原通過變態(tài)反應(yīng)，激活一系列免疫反應(yīng)細(xì)胞，釋放炎性介質(zhì)，形成哮喘的炎癥反應(yīng)和氣道高反應(yīng)性。此外，神經(jīng)系統(tǒng)也能通過產(chǎn)生神經(jīng)因子促進(jìn)炎癥形成，參與哮喘發(fā)作。 NF-κB(核因子κB)是一組重要的核轉(zhuǎn)錄因子，它調(diào)節(jié)許多細(xì)胞因子的基因表達(dá)，增加這些基因的產(chǎn)物數(shù)量。正常情況下，NF-κB與抑制因子IκB結(jié)合以無活性的形式存在于細(xì)胞漿中，當(dāng)受到外界刺激(包括炎性介質(zhì)、病毒及抗原等)后被激活，轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，與相應(yīng)的炎性介質(zhì)基因的啟動(dòng)子/增強(qiáng)子結(jié)合，促進(jìn)這些介質(zhì)的基因表達(dá)。目前，臨床多應(yīng)用激素治療哮喘，但其機(jī)制是否與激素對(duì)NF-κB的抑制作用有關(guān)還需進(jìn)一步的證實(shí)。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)哮喘后和激素治療后豚鼠小氣道壁內(nèi)淋巴細(xì)胞和C_7-T_5脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元NF-κB活性的研究，探討NF-κB在哮喘發(fā)作過程中的作用及激素治療哮喘的作用機(jī)制。 方法 1．哮喘模型的建立 將24只豚鼠(200-220克，均為雌性)隨機(jī)分為4組。生理鹽水組(4只)腹腔注射1ml生理鹽水，10日后霧化吸入生理鹽水；單純致敏組(4只)腹腔注射1ml10％OVA(OVA與Al(OH)_3為1：1)，10日后霧化吸入生理鹽水(上述兩組作為對(duì)照組)；哮喘 組門只）腹腔注射lrnl 10％的OVA溶液，10日后霧化吸人1％ OVA（不含川（OH入人待豚鼠出現(xiàn)哮喘反應(yīng)后立即終止吸人，待 自然緩解；激素組難只）操作同哮喘組，在哮喘后腹腔注射地塞米 松p 人各組豚鼠霧化吸人每日一次，川日后處死。 2．取材，包埋，切片 常規(guī)灌流固定后，取下 C，－Ts脊神經(jīng)節(jié)及肺組織，放人 4％ PFA中后固定24小時(shí)后，移人30％的蔗糖緩沖液中至標(biāo)本沉降 后，取出標(biāo)本進(jìn)行修剪。OCT包埋后冰凍切片機(jī)切片，片厚 12卜m。切片干燥后進(jìn)行免疫組化染色。 3．免疫組化染色 應(yīng)用免抗鼠 NF－KB抗體（抗 P65抗體，用 0．5％TritonX－ 100稀釋為 1：200）和 SABC試劑盒及 DAB進(jìn)行免疫組化染色。 4．統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用Luzex－F實(shí)時(shí)圖象分析系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行灰度值測(cè)量， 用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理分析。 結(jié) 果 1．生理鹽水組 小氣道的上皮完整，管壁內(nèi)有少數(shù)散在的淋 巴細(xì)胞，分布于淋巴細(xì)胞胞漿內(nèi)的NF—KB免疫陽性反應(yīng)物質(zhì)多 于胞核。C，－T。脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元NF－KB免疫陽性反應(yīng)物質(zhì)幾乎 全都分布于胞漿中，而胞核中的陽性物質(zhì)很少甚至沒有。經(jīng)統(tǒng)計(jì) 該組淋巴細(xì)胞和神經(jīng)元核與漿染色程度差異顯著河＜O．05人 2．單純致敏組 小氣道的上皮比較完整，有少量淋巴細(xì)胞分 布在管壁內(nèi)，淋巴細(xì)胞胞漿中的NF－KB免疫陽性反應(yīng)物質(zhì)多于 胞核。C，－Ts脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的NF－KB免疫陽性反應(yīng)物質(zhì)幾乎 全都分布于胞漿中，而胞核中的陽性物質(zhì)很少甚至沒有。經(jīng)統(tǒng)計(jì) 該組淋巴細(xì)胞和神經(jīng)元核與漿染色程度有顯著性差異（P＜0． ·2· 05）。 3．哮喘組 小氣道的上皮不完整，管壁內(nèi)乃至氣道周圍有大 量淋巴細(xì)胞，NF－KB陽性反應(yīng)物質(zhì)不均勻地分布于淋巴細(xì)胞內(nèi)， 胞核的陽性染色深于胞漿。分布于C，－Ts脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元胞核 內(nèi)的NF－KB免疫陽性反應(yīng)物質(zhì)多于胞漿。經(jīng)統(tǒng)計(jì)該組淋巴細(xì)胞 和神經(jīng)元的核與漿染色程度差異顯著什＜0．05人此外，該組小 氣道壁內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)明顯高于對(duì)照組（P＜0．05人 4．激素組小氣道上皮不完整，管壁內(nèi)有少量的淋巴細(xì)胞，淋 巴細(xì)胞內(nèi)NF－KB陽性反應(yīng)物質(zhì)分布不均勻，胞漿陽性染色深于 胞核。另外，分布于C，－T。脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元胞漿內(nèi)的NF－KB免 疫陽性反應(yīng)物質(zhì)多于胞核。經(jīng)統(tǒng)計(jì)該組淋巴細(xì)胞和神經(jīng)元的核與 漿染色程度差異顯著神＜0．05人此外，該組小氣道壁內(nèi)淋巴細(xì) 胞總數(shù)明顯少于哮喘組（P＜O．05人但與對(duì)照組比較則無顯著性 差異（P＞0．05）。 結(jié) 論 ＊哮喘豚鼠肺內(nèi)小氣道壁中的淋巴細(xì)胞和C，－T。脊神經(jīng)節(jié) 神經(jīng)元內(nèi)NF—KB會(huì)產(chǎn)生由細(xì)胞漿向細(xì)胞核的移位，核內(nèi)的NF一 KB可以促進(jìn)炎癥因子基因的轉(zhuǎn)錄，參與哮喘的發(fā)病機(jī)制。 2．抑制 NF一陽的活性可能是激素治療哮喘的作用機(jī)制之 3．哮喘豚鼠C，－TS脊神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元內(nèi)NF－KB的過度激活 可能會(huì)促進(jìn)某些神經(jīng)肽類物質(zhì)的合成，從而參與哮喘的發(fā)病機(jī)制。
【學(xué)位單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2003
【中圖分類】：R562.25
【部分圖文】：

各組小氣道壁內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)目比率

各組小氣道壁內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)目比率

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2830702