目的:探究白細(xì)胞介素-1(IL-1)在人外周血祖細(xì)胞源性肥大細(xì)胞參與支氣管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用。方法:從人外周血分離純化祖細(xì)胞(肥大細(xì)胞前體細(xì)胞),在體外誘導(dǎo)分化發(fā)育為成熟肥大細(xì)胞,將人支氣管上皮細(xì)胞株(16HBE細(xì)胞株)分別與IL-1、肥大細(xì)胞或者共同加入IL-1及成熟肥大細(xì)胞培養(yǎng)3天后,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;用免疫細(xì)胞化學(xué)法及Western Blot法檢測16HBE細(xì)胞中E-鈣黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表達(dá);細(xì)胞劃痕試驗(yàn)檢測肥大細(xì)胞與IL-1對(duì)16HBE遷移及侵襲能力的影響;酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)檢測不同時(shí)間段細(xì)胞上清中TGF-β1的釋放量;CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測16HBE細(xì)胞的增殖能力。加入TGF-β1中和抗體后,用Western Blot法檢測16HBE細(xì)胞中E-鈣黏蛋白(E-Cadherin)及波形蛋白(Vimentin)的表達(dá)。結(jié)果:1.免疫細(xì)胞化學(xué)及May-Grunwald Giemsa染色法鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞為肥大細(xì)胞。2.免疫細(xì)胞化學(xué)法結(jié)果顯示:IL-1或肥大細(xì)胞可分別降低16HBE細(xì)胞E-Cadherin的表達(dá),增強(qiáng)Vimentin的表達(dá)。3.Western Blot法結(jié)果顯示:IL-1或肥大細(xì)胞可分別減少16HBE細(xì)胞E-Cadherin的表達(dá),增加Vimentin的表達(dá)。加入IL-1后,肥大細(xì)胞減少16HBE細(xì)胞E-Cadherin表達(dá)量及增加Vimentin表達(dá)量的能力得到增強(qiáng)。4.細(xì)胞劃痕試驗(yàn)結(jié)果顯示:IL-1或肥大細(xì)胞可分別增強(qiáng)16HBE的遷移能力,加入IL-1后,肥大細(xì)胞促進(jìn)16HBE遷移的能力增強(qiáng)。5.ELISA結(jié)果顯示:IL-1或肥大細(xì)胞可分別刺激16HBE釋放TGF-β1,且隨著刺激時(shí)間延長,16HBE釋放TGF-β1增加,IL-1對(duì)肥大細(xì)胞刺激16HBE釋放TGF-β1的能力有增強(qiáng)作用。IL-1可以刺激肥大細(xì)胞釋放TGF-β1,且隨著刺激時(shí)間延長,肥大細(xì)胞釋放TGF-β1增加。6.CCK-8結(jié)果顯示:IL-1或肥大細(xì)胞可分別促進(jìn)16HBE的增殖,加入IL-1后,肥大細(xì)胞促進(jìn)16HBE增殖的能力增強(qiáng)。7.加入TGF-β1中和抗體后,Western Blot結(jié)果顯示由IL-1或肥大細(xì)胞分別誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞E-Cadherin蛋白表達(dá)減少,Vimentin蛋白表達(dá)量增加的作用受到抑制。結(jié)論:IL-1或人外周血源性肥大細(xì)胞可以分別增強(qiáng)16HBE細(xì)胞Vimentin蛋白的表達(dá),降低E-Cadherin蛋白表達(dá),并能促進(jìn)上皮的增殖和遷移,刺激16HBE釋放TGF-β1。結(jié)果提示:IL-1及肥大細(xì)胞均有可能參與人支氣管上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT),這可能與TGF-β1有關(guān),且IL-1可能會(huì)增強(qiáng)肥大細(xì)胞促進(jìn)人支氣管上皮細(xì)胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的能力。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R56
【部分圖文】：

中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 結(jié) 果細(xì)胞邁格林華-吉姆薩染色法和免疫細(xì)胞化學(xué)實(shí)養(yǎng) 7 周的肥大細(xì)胞固定后，進(jìn)行邁格林華-吉姆顆粒樣物（圖 1-A）。經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)計(jì)數(shù)，人率大于 90%（圖 1 -B），抗胃促胰酶抗體表達(dá)率

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文16HBE 細(xì)胞形態(tài)的變化在倒置相差顯微鏡下觀察不同培養(yǎng)條件下，16HBE 細(xì)胞培養(yǎng) 72h 后組（16HBE 單獨(dú)培養(yǎng)）細(xì)胞呈典型的上皮細(xì)胞鋪路石樣改變，細(xì)胞。加入 IL-1 培養(yǎng)（+IL-1）、與肥大細(xì)胞共培養(yǎng)（+MC）、與肥大細(xì)養(yǎng)（+MC+IL-1）72h 后，細(xì)胞伴不同程度的肥大、伸長呈梭形，且大、喪失其原有的鋪路石樣生長方式。說明 IL-1 或者肥大細(xì)胞可以6HBE 細(xì)胞，使其發(fā)生形態(tài)學(xué)上的改變，且肥大細(xì)胞與 16HBE 共培養(yǎng)，也會(huì)使 16HBE 發(fā)生形態(tài)學(xué)上的改變。

華 中 科 技 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文細(xì)胞化學(xué)法分別檢測 16HBE 細(xì)胞 E-Cadherin、 Vimentin 表大細(xì)胞及 IL-1 對(duì) 16HBE 細(xì)胞 E-Cadherin 表達(dá)的影響免疫細(xì)胞化學(xué)方法結(jié)果如圖 3 所示，72h 后，與對(duì)照組（16HB，加入 IL-1 培養(yǎng)組（+IL-1）、與肥大細(xì)胞共培養(yǎng)組（+MC）IL-1 共培養(yǎng)組（+MC+IL-1），三組的 E-Cadherin 表達(dá)于胞漿內(nèi)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 許召良;馬志方;岳亮;王東文;;肥大細(xì)胞對(duì)前列腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用[J];中國藥物與臨床;2015年09期

2 岳喜磊;成瑩;許繼德;鐘長江;楊春濤;汪鵬;;TRPC1在TGF-β1誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用[J];中國病理生理雜志;2015年03期

3 肖淑華;劉陽陽;魏連海;郭義;;肥大細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2011年02期

4 謝華;肥大細(xì)胞在支氣管哮喘中的研究進(jìn)展[J];免疫學(xué)雜志;2003年S1期

本文編號(hào)：2823604