目的 支氣管哮喘是一組伴有氣道炎癥和氣道阻塞的復(fù)雜疾病,現(xiàn)已公認(rèn)有多種炎性細(xì)胞和炎性介質(zhì)參與其中,這種氣道慢性炎癥又導(dǎo)致了氣道反應(yīng)性的增加,這兩者被廣泛認(rèn)為是支氣管哮喘的基本特征。在氣道慢性炎癥的發(fā)生、發(fā)展與持續(xù)的過程中,T細(xì)胞又被認(rèn)為是關(guān)鍵性因素,因此,研究T細(xì)胞在支氣管哮喘發(fā)病過程中的作用已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。 在T細(xì)胞的分化、活化、增殖、存活與抗凋亡等一系列細(xì)胞效應(yīng)過程中,多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與其中,主要包括Ras/MAPK途徑、PLC-γ途徑、PI3K/Akt途徑、PKC/NF-κB途徑、JAK/STAT途徑等等。這些信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑彼此之間又存在這樣或那樣的聯(lián)系,從而共同影響了T細(xì)胞的一系列細(xì)胞效應(yīng),并且不同的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑在不同的T細(xì)胞亞型也有著不同的作用。 磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)是細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中的一種關(guān)鍵酶,是T細(xì)胞最為重要的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一,與T細(xì)胞的增殖、分化、活化和抗病毒能力等密切相關(guān),其功能主要表現(xiàn)為與CD28協(xié)同刺激信號一道促進(jìn)T細(xì)胞活化;調(diào)節(jié)周期蛋白和促T細(xì)胞增殖因子等表達(dá)使T細(xì)胞周期正常進(jìn)行;通過調(diào)控凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)激酶活性和凋亡調(diào)控因子表達(dá)以拮抗P53、Fas等誘導(dǎo)的T細(xì)胞凋亡以及增強(qiáng)T細(xì)胞的抗病毒能力等等。已有報道證實(shí)PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對Th2細(xì)胞亞型的活化、細(xì)胞因子的合成與分泌、細(xì)胞生存與抗凋亡具有重要作用。 有研究顯示PI3K途徑介導(dǎo)了生理情況下IL-4受體所誘導(dǎo)的T細(xì)胞的增殖,而且在B細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、髓樣祖細(xì)胞中,IL-4都表現(xiàn)出對PI3K活性以及該通路的影響,從而促進(jìn)了細(xì)胞的增殖與生存。在哮喘T細(xì)胞中,IL-4是否也通過對PI3K通路的影響,從而影響了T細(xì)胞的增殖目前尚不清楚。我們通過對IL-4處理的不同組之間的T細(xì)胞PI3K的表達(dá)的研究,探討哮喘T細(xì)胞中IL-4對PI3K的影響。 方法 雄性Wistar大鼠40只,隨機(jī)分為正常組和哮喘組,每組各20只。 哮喘模型的制作按我們實(shí)驗(yàn)室以往成熟的方法進(jìn)行。大鼠于末次激發(fā)6小時后行下腔靜脈穿刺無菌采血并分離出T細(xì)胞。體外培養(yǎng)8小時后,將正常細(xì)胞分為1)正常對照組(A組)、2)正常+IL-4組(B組),哮喘組細(xì)胞分為1)哮喘組(C組)、2)哮喘+IL-4組(D組)、3)哮喘+IL-4+IL-4抑制劑組(E組),分別按設(shè)計要求加入相應(yīng)的試劑,繼續(xù)5%CO2、370C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48小時。然后培養(yǎng)細(xì)胞應(yīng)用Westernblotting法檢測PI3K的表達(dá)。在凝膠成像分析系統(tǒng)上行攝像分析并計算出A值(即檢測蛋白灰度值與β-action灰度值的比值)用SPSS12.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析,多重組數(shù)比較之間差異顯著性檢驗(yàn)采用F檢驗(yàn),其中兩兩組間比較采用q檢驗(yàn)。以p0.05為統(tǒng)計學(xué)上差異有顯著性。 結(jié)果 結(jié)果表明正常+IL-4組與正常對照組相比PI3K的表達(dá)無顯著差異性(P0.05)。哮喘大鼠T細(xì)胞中的PI3K的表達(dá)上調(diào),明顯高于正常對照組,差異有顯著性(P0.05)。哮喘組與哮喘+IL-4組之間以及哮喘+IL-4+抗IL-4α抗體之間也具有明顯的差異性(P均0.05),其中哮喘+IL-4組的T細(xì)胞中的PI3K的表達(dá)最為明顯,而哮喘組與哮喘+IL-4+IL-4α抗體組之間T細(xì)胞中的PI3K的表達(dá)沒有顯著差異性(P0.05),哮喘+IL-4與哮喘+IL-4+IL-4α抗體組之間比較差異有顯著性(P0.05)。 結(jié)論 正常大鼠組與正常大鼠+IL-4組之間未見明顯的差異顯著性,提示IL-4對T細(xì)胞的作用可能通過多方面的途徑實(shí)現(xiàn),不僅僅通過PI3K信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,因此在正常T細(xì)胞中它的單獨(dú)作用并未使得PI3K的表達(dá)出現(xiàn)明顯上調(diào),它的作用可能需要其他因素和信號途徑的共同作用才能顯現(xiàn)。哮喘組與哮喘+IL-4組之間有明顯的差異性,其中哮喘+IL-4組的T細(xì)胞內(nèi)PI3K的表達(dá)明顯上調(diào),這可能是由于哮喘大鼠的T細(xì)胞經(jīng)過相當(dāng)長一段時間的刺激,胞內(nèi)各種因素導(dǎo)致了PI3K的表達(dá)增加,其中可能也包括IL-4等細(xì)胞因子的作用。與之相對照的是哮喘+IL-4+抑制劑組與哮喘組之間T細(xì)胞內(nèi)PI3K的表達(dá)沒有差異的顯著性,提示IL-4抑制劑可以抑制IL-4對PI3K的作用,進(jìn)一步說明了IL-4對PI3K的表達(dá)有增強(qiáng)的作用。 綜上所述,我們的實(shí)驗(yàn)研究顯示,PI3K在哮喘T細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)有明顯的上調(diào),同時IL-4對這種上調(diào)有著一定的加強(qiáng)作用,至于IL-4對PI3K的作用是通過哪些具體的環(huán)節(jié)還有待進(jìn)一步的研究。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2007
【中圖分類】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2814755