【摘要】：目的:克隆害嗜鱗螨2類變應(yīng)原Lep d2全長(zhǎng)基因,構(gòu)建其原核表達(dá)載體并表達(dá)純化,以此為疫苗對(duì)過(guò)敏性哮喘小鼠模型進(jìn)行特異性免疫治療并評(píng)價(jià)其治療效果。方法:根據(jù)Genbank公布的Lep d2全長(zhǎng)核苷酸序列(AY288150.1)合成Lep d2全長(zhǎng)基因,將其插入到表達(dá)載體p ET28a(+)質(zhì)粒中,得到重組質(zhì)粒p ET28a(+)-Lep d2。重組質(zhì)粒經(jīng)限制性內(nèi)切酶雙酶切鑒定后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta菌株中。用IPTG誘導(dǎo)表達(dá),篩選出最適表達(dá)條件(IPTG濃度、溫度、時(shí)間)后對(duì)重組蛋白進(jìn)行大規(guī)模表達(dá)、純化和濃縮。用塵螨提取液致敏BALB/c小鼠建立急性哮喘小鼠模型,用制備的重組蛋白Lep d2對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行特異性免疫治療,觀察小鼠癥狀及肺組織病理變化,并以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測(cè)定BALF和脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清中細(xì)胞因子IL-5、IL-13、IFN-γ的水平及血清中特異性Ig E(s Ig E)、s Ig G2a抗體水平。結(jié)果:雙酶切鑒定結(jié)果顯示:成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒p ET28a(+)-Lep d2,菌落PCR結(jié)果說(shuō)明:重組質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)化Rosetta(DE3),用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,經(jīng)SDS-PAGE電泳和Western blot分析結(jié)果表明:成功表達(dá)并純化了重組變應(yīng)原Lep d2。哮喘小鼠經(jīng)變應(yīng)原Lep d2特異性免疫治療后,小鼠血清中s Ig E抗體水平較哮喘組明顯降低(P0.01);血清中s Ig G2a抗體水平較哮喘組顯著增高(P0.01),Lep d2治療組BALF和脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IFN-γ濃度均高于哮喘組升高(P0.01)。而Lep d2組BALF和脾細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-5和IL-13則低于哮喘組(P0.01)。說(shuō)明害嗜鱗螨Ⅱ類變應(yīng)原Lep d2疫苗可對(duì)哮喘小鼠進(jìn)行有效SIT。結(jié)論:害嗜鱗螨Ⅱ類變應(yīng)原Lep d2大規(guī)模原核表達(dá)成功,且害嗜鱗螨Ⅱ類變應(yīng)原Lep d2疫苗可有效控制小鼠過(guò)敏癥狀并減輕氣道炎癥。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R562.25

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1 陸維;害嗜鱗螨Ⅱ類變應(yīng)原Lep d2特異性免疫治療效果分析[D];皖南醫(yī)學(xué)院;2015年

本文編號(hào)：2760995