【摘要】： 目的肺血栓栓塞癥(pulmonary thromboembolism,PTE)由于其發(fā)病隱襲、突然,高致死率和高致殘率逐漸引起臨床醫(yī)師的重視!國內(nèi)雖尚無明確的大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查,但各家報(bào)道的數(shù)據(jù)表明其在國人的發(fā)病率并不低。臨床上未經(jīng)治療的肺栓塞病死率為20-30%,合理治療可降為2-8%。眾所周知,組織因子是傳統(tǒng)學(xué)說認(rèn)為觸發(fā)外源性凝血反應(yīng)的啟動(dòng)因子,也是血管內(nèi)皮損傷的有力證明。新的研究也表明組織因子與血管內(nèi)皮生長因子協(xié)同在栓塞血管再通、新血管形成中發(fā)揮重要作用。目前對(duì)于組織因子的研究報(bào)道不多,尤其是栓塞不同時(shí)期組織因子的動(dòng)態(tài)變化,凝血反應(yīng)的持續(xù)期組織因子是否是必不可少的因素則沒有明確結(jié)論。因此明確肺血栓栓塞的發(fā)病機(jī)制,特別是組織因子的作用,為臨床提供治療理論依據(jù),提高治療技術(shù)和手段顯得尤為重要。本文重點(diǎn)探討組織因子(TF)在肺栓塞不同時(shí)期肺組織內(nèi)表達(dá)的差異性,同時(shí)引入新的定量技術(shù),為臨床探索新的栓塞性疾病監(jiān)測(cè)方法。 方法1運(yùn)用誘導(dǎo)局部血栓形成法制備大鼠不同時(shí)間急性肺血栓栓塞模型。2 SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)建立組織因子(TF)標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線。3采用前述構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)不同時(shí)間栓子栓塞后1、7、14天肺組織TF變化。 結(jié)果肺血栓栓塞模型制備良好,病理證實(shí)肺動(dòng)脈內(nèi)有血栓形成。熒光定量PCR構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)準(zhǔn)曲線,檢測(cè)結(jié)果顯示Total RNA反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA作為標(biāo)準(zhǔn)品可以得到較好的擴(kuò)增曲線、標(biāo)準(zhǔn)曲線和融解曲線,標(biāo)準(zhǔn)曲線顯示線性關(guān)系良好(管家基因GAPDH:R~2=0.998,目的基因TF:R~2=0.998,R20.98),可以在寬廣的范圍內(nèi)進(jìn)行準(zhǔn)確定量;擴(kuò)增效率較好(管家基因GAPDH:E=95%,目的基因TF:E=89.4%,0.8㩳E㩳1.2)。1天和7天栓子栓塞肺組織后,1天組均與各自對(duì)照組和組內(nèi)比較有差異(0.457±0.476,0.88±0.74,p0.05)。7天與14天與各自對(duì)照組及組內(nèi)沒有明顯差異。 結(jié)論通過誘導(dǎo)局部血栓形成法建立肺血栓栓塞動(dòng)物模型,并觀察肺內(nèi)血栓隨著時(shí)間的推移呈現(xiàn)不同的轉(zhuǎn)歸,肺組織呈現(xiàn)應(yīng)激改變。相對(duì)定量方法構(gòu)建的目的基因TF與管家基因GAPDH標(biāo)準(zhǔn)曲線呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系和重復(fù)性。從熒光定量PCR檢測(cè)目的基因TF的相對(duì)值可以看出栓塞1天組與對(duì)照組及組內(nèi)存在較大的差異,說明TF水平在不同的栓塞時(shí)間肺內(nèi)表達(dá)差異較大。熒光定量PCR技術(shù)可以應(yīng)用于肺栓塞臨床監(jiān)測(cè),從而進(jìn)一步指導(dǎo)臨床治療
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.5
【圖文】：

組織結(jié)構(gòu)不清，有時(shí)可見股靜脈鞘周圍有薄纖維板形成，發(fā)生率占全部 7 天 18 只模型 11.1%；血栓剝離困難，呈淡粉色、彈性差易碎裂。DVT 術(shù)后 1 天實(shí)驗(yàn)組患肢明顯腫脹占 30%。PTE 術(shù)后實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)呼吸窘迫、急速，心率加快，持續(xù)約 30-60 分鐘自行緩解。2 肺臟解剖及病理觀察對(duì)照組大鼠肺組織表面呈粉紅色，光滑，無出血、壞死。肺栓塞組可見兩側(cè)肺組織表面點(diǎn)狀，甚至片狀出血。大體上 1 天的 PTE 模型肺組織表面多為新鮮病灶，充血明顯；7 天及 14 天的 PTE 模型肺組織充血較1 天的為輕，同時(shí)病灶陳舊樣改變；對(duì)照組肺血管和肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)無出血及滲出，肺泡間隔內(nèi)未見炎性細(xì)胞浸潤。

組織結(jié)構(gòu)不清，有時(shí)可見股靜脈鞘周圍有薄纖維板形成，發(fā)生率占全部 7 天 18 只模型 11.1%；血栓剝離困難，呈淡粉色、彈性差易碎裂。DVT 術(shù)后 1 天實(shí)驗(yàn)組患肢明顯腫脹占 30%。PTE 術(shù)后實(shí)驗(yàn)組均出現(xiàn)呼吸窘迫、急速，心率加快，持續(xù)約 30-60 分鐘自行緩解。2 肺臟解剖及病理觀察對(duì)照組大鼠肺組織表面呈粉紅色，光滑，無出血、壞死。肺栓塞組可見兩側(cè)肺組織表面點(diǎn)狀，甚至片狀出血。大體上 1 天的 PTE 模型肺組織表面多為新鮮病灶，充血明顯；7 天及 14 天的 PTE 模型肺組織充血較1 天的為輕，同時(shí)病灶陳舊樣改變；對(duì)照組肺血管和肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)無出血及滲出，肺泡間隔內(nèi)未見炎性細(xì)胞浸潤。

% Agarose 1μl Applied M：λ -Hind Ⅲ DN圖 3 樣品 RNA 瓊脂糖凝膠電泳測(cè)定：光光度計(jì)測(cè)定波長為 260nm 和 280nm 的如下（表 1）： 樣品 RNA OD 值測(cè)定果和 OD 值結(jié)果顯示，從樣品中提取出的。A260/A280約 2.0 左右。 Sample A260 A280 A260/A280 1# 0.3982 0.1897 2.1 2# 0.3314 0.1639 2.0 3# 0.8086 0.3902 2.1 4# 0.4030 0.2054 2.0 5# 0.3619 0.1820 2.0

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 李黔寧,應(yīng)大君,戴光明,鄭健;切應(yīng)力對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞組織因子表達(dá)上調(diào)的影響及其作用機(jī)制[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2004年01期

2 崔寶奎,鐘梅,余艷紅,劉寶瑛;孕期家兔肺栓塞模型制備方法的探討[J];天津醫(yī)藥;2002年12期

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4 王維平,李旭,陳錫林,王東平,王永謙;創(chuàng)傷性肺栓塞實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立[J];中華創(chuàng)傷骨科雜志;2003年03期

5 張紀(jì)蔚,張柏根,趙意平,沈桂娟;兔靜脈血栓形成后內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)和功能演變的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華外科雜志;1997年06期

本文編號(hào)：2756430