【摘要】： 研究背景 基因在很大程度上決定了一個(gè)個(gè)體的表型,包括外貌、體重等一些顯而易見(jiàn)的方面。對(duì)于某些疾病來(lái)說(shuō),基因可能影響個(gè)體對(duì)該種疾病的易感性。這在一些遺傳性疾病中就很明顯,如家族性高血壓、紅綠色盲、血友病等。上20世紀(jì)70年代,通過(guò)以家族研究為基礎(chǔ)的連鎖分析和以病例-對(duì)照研究為基礎(chǔ)的相關(guān)分析證實(shí)個(gè)體對(duì)結(jié)核病易感性的差異部分是由宿主基因決定的。隨著研究深入,人們已發(fā)現(xiàn)自然抵抗相關(guān)(NRAMP1)基因、維生素D受體(VDR)基因、甘露糖結(jié)合植物凝集素基因(MBL)等可能與結(jié)核病易感性相關(guān)。本研究擬進(jìn)一步探討在結(jié)核分支桿菌感染(MTB)中具重要免疫作用的多種Th1/Th2相關(guān)細(xì)胞因子的基因多態(tài)性與肺結(jié)核的關(guān)系。 目的 通過(guò)病例-對(duì)照研究,檢測(cè)白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、白介素-18(IL-18)、干擾素-γ(IFN-γ)及腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等細(xì)胞因子的基因多態(tài)性在肺結(jié)核患者及健康人群中的分布狀況,分析Th1/Th2細(xì)胞因子基因多態(tài)性與肺結(jié)核易感性的關(guān)系。 方法 (1)采用序列特異性引物多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)( PCR - SSP)及基因測(cè)序技術(shù)對(duì)肺結(jié)核患者及健康對(duì)照者兩組人群的細(xì)胞因子IL-4、IL-10、IL-18、IFN-γ、TNF-α基因多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè),并分析其基因型頻率、等位基因頻率及單倍型頻率在兩組人群中的分布狀況。 (2)通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)樣本血清中細(xì)胞因子(IL-10)濃度,分析各基因型與細(xì)胞因子血清中濃度的關(guān)系。 結(jié)果 (1)肺結(jié)核患者IL-10(-1082)位點(diǎn)A/A純合子、A/G雜合子、G/G純合子基因型頻率分別為85.4%、13.1%、1.5%;A、G等位基因頻率分別為91.9%、8.1%。健康對(duì)照者A/A純合子、A/G雜合子、G/G純合子基因型頻率分別為77.5%、22.0%、0.5%;A、G等位基因頻率分別為88.5%、11.5%。兩組間基因型分布差別有統(tǒng)計(jì)意義(P0.05)。患者組A/A基因型高于對(duì)照組,G/A基因型低于對(duì)照組(P0.05)。但兩組的A、G等位基因頻率分布差別沒(méi)有統(tǒng)計(jì)意義。IL-4(-590)位點(diǎn)、IL-18(-607、-137)位點(diǎn)、IFN-γ(+874)位點(diǎn)及TNF-α(-308、-238)位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率在肺結(jié)核患者和健康對(duì)照者中分布無(wú)明顯差異(P0.05)。 (2)對(duì)TNF-α和IL-18兩種細(xì)胞因子啟動(dòng)子區(qū)內(nèi)的兩位點(diǎn)進(jìn)行單倍型分析。TNF-α兩位點(diǎn)各種單倍型在兩組間分布沒(méi)有差異(P0.05)。但肺結(jié)核組IL-18啟動(dòng)子區(qū)-607、-137多態(tài)性位點(diǎn)CC單倍型顯著低于對(duì)照組(P0.05)。 (3)血清中細(xì)胞因子IL-10濃度在兩組中均很低,168份樣本中僅有12份樣本IL-10濃度在檢測(cè)限之上。其中肺結(jié)核組7份,健康對(duì)照組5份,平均值分別為30.04pg/ml和5.51pg/ml。 結(jié)論 (1)在中國(guó)漢族人群中細(xì)胞因子IFN-γ(+874)、TNF-α(-308、-238)、IL-4(-590)基因位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性(SNP)與肺結(jié)核易感性無(wú)關(guān)。 (2)在中國(guó)漢族人群中細(xì)胞因子IL-10(-1082)基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)與肺結(jié)核易感性相關(guān)。A/A基因型可能是一個(gè)肺結(jié)核易感的風(fēng)險(xiǎn)因素。 (3)在中國(guó)漢族人群中細(xì)胞因子IL-18(-607、-137)位點(diǎn)等位基因及基因型多態(tài)性與肺結(jié)核易感性無(wú)關(guān),但CC單倍型可能是肺結(jié)核的耐受基因。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R521
【圖文】：

棄下液。(9) 加入 Buffer HB500μL 到柱子上，8000rpm 離心 1min，棄下液。(10) 加入 1×DNA Wash Buffer 650μL 到柱子上，8000rpm 離心 1mi（重復(fù)一次）。(11) 最大轉(zhuǎn)速度離心 2min，使柱子干燥。(12) 將柱子轉(zhuǎn)移到一新的無(wú)核酸酶的 2mL 小 EP 管上，加入 50-100μ預(yù)熱的洗脫 Buffer，60℃孵育 5min，后 10000rpm 離心 1min，洗脫柱NA（重復(fù)離心一次提高產(chǎn)量）。DNA 樣品放-20℃保存?zhèn)溆谩?13) 電泳: 隨機(jī)抽取提取的 DNA 樣品 6 份，每份吸 6μL 及 2μL 的 Loffer 混勻，加入到含有 Goldview 核酸染料的 0.8 %瓊脂糖凝膠中,1×T,80V 恒壓電泳 45min,凝膠成像儀下觀察結(jié)果及拍照（見(jiàn)圖 2.4.1）。

對(duì)于IL-10(-1082G/A)位點(diǎn)、IL-18(-137G/C)位點(diǎn)及IFN-γ(874 A/T)位點(diǎn)，兩條特異性正向引物和通用的反向引物擴(kuò)增的產(chǎn)物分別是2563bp、 248bp和1414bp，內(nèi)參正向引物和通用的反向引物擴(kuò)增996bp的產(chǎn)物（圖3.1.1）。第二組,對(duì)于IL-18(-607C/A)位點(diǎn)、TNF-α(-308 G/A、-238G/A) 位點(diǎn)，兩條特異性正向引物和通用的反向引物擴(kuò)增的產(chǎn)物分別為721bp、275bp和204bp，內(nèi)參正向引物和通用的反向引物擴(kuò)增996bp的產(chǎn)物（圖3.1.2）。第三組，對(duì)于IL-4(-590C/T)位點(diǎn)，兩條特異性正向引物和通用的反向引物擴(kuò)增458bp的產(chǎn)物，內(nèi)參正向引物和反向引物擴(kuò)增366bp的產(chǎn)物（圖3.1.3.）。根據(jù)PCR-SSP結(jié)果選取各種基因型，用測(cè)序引物的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，分別測(cè)出野生型和突變型純合子和雜合子，與PCR-SSP方法結(jié)果一致（圖3.1.4）

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 董琳;黃志英;陳小芳;周曉聰;李錦燕;林劍;;INF-γ/A+874T位點(diǎn)基因多態(tài)性與呼吸道合胞病毒毛細(xì)支氣管炎的相關(guān)性[J];中國(guó)當(dāng)代兒科雜志;2009年01期

2 石蓮;;我國(guó)結(jié)核病現(xiàn)狀及對(duì)策[J];中國(guó)實(shí)用鄉(xiāng)村醫(yī)生雜志;2008年03期

3 羅敏;申?yáng)|翔;張宏斌;王捷;何援利;;TNF-α和TNF-β基因變異對(duì)子宮內(nèi)膜異位癥易感性的聯(lián)合效應(yīng)[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年04期

4 馬志明;肖唐;林國(guó);劉健雄;譚耀駒;王云南;鄺浩斌;譚守勇;;白介素-10基因多態(tài)性與肺結(jié)核病易感性的研究[J];廣東醫(yī)學(xué);2007年08期

5 陳秉樸;韋葉生;解繼勝;黃海玲;;廣西地區(qū)漢族人群TNF-α基因啟動(dòng)子-238G/A多態(tài)性分布的研究[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2005年05期

6 任濤,金美玲,蔡映云,梅建;結(jié)核分枝桿菌感染與Th1/Th2免疫應(yīng)答的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊(cè));2003年09期

7 蒲杰;曾蔚越;;TNF-α基因啟動(dòng)子-308位點(diǎn)多態(tài)性與中國(guó)成都地區(qū)漢族早產(chǎn)的相關(guān)性研究[J];四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年06期

8 李亞斐;郭波濤;韓家信;朱才眾;張耀;馬翔宇;張路;熊鴻燕;;Association between interleukin-4 polymorphisms and asthma[J];Journal of Medical Colleges of PLA;2007年05期

9 郭紅梅;王曉紅;朱啟昒;;嬰兒巨細(xì)胞病毒肝炎IFN-γ+874單核苷酸多態(tài)性研究[J];臨床兒科雜志;2007年07期

10 黃憲章;任燕歌;莊俊華;周強(qiáng);丁海明;;廣東漢族人群類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者IL-18啟動(dòng)子基因多態(tài)性的研究[J];臨床檢驗(yàn)雜志;2007年04期

本文編號(hào)：2740166