【摘要】： 目的: EC作為血管基本的結(jié)構(gòu)和功能單位,其重要的生理功能就是發(fā)揮其屏障功能,調(diào)節(jié)血管內(nèi)外的物質(zhì)交換,維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使得鄰近或遠(yuǎn)端的組織器官免受損害。細(xì)胞外基質(zhì)與EC粘附形成完整的內(nèi)皮屏障。在PF的發(fā)病過程中,起始階段的肺泡炎和纖維化形成階段均有血管通透性增高、EC間連接持續(xù)開放。這種內(nèi)皮屏障功能的異常為大分子物質(zhì)跨內(nèi)皮交換提供了旁路途徑,對肺損傷時(shí)炎癥細(xì)胞進(jìn)入肺泡、肺間質(zhì)及激活Fb增殖具有重要意義。EC連接蛋白與肌動(dòng)蛋白相連,與細(xì)胞骨架一起受細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i的影響。本實(shí)驗(yàn)通過電鏡、細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組化、激光共聚焦掃描技術(shù),觀察肺炎及PF大鼠PMVEC形態(tài)學(xué)改變,比較PF及正常大鼠PMVEC內(nèi)[Ca2+]i差異,并分析其負(fù)反饋調(diào)節(jié)因素—中電導(dǎo)鈣激活鉀通道蛋白質(zhì)1(Kca3.1)的表達(dá)特點(diǎn),探討博萊霉素?fù)p傷時(shí)大鼠肺PMVEC屏障功能變化和機(jī)制以及PMVEC在PF發(fā)生中的地位和作用。 方法: SD大鼠20只,體重150±20 g,雌雄不拘(第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。隨機(jī)分為對照組和博萊霉素組(BLM組),每組各10只。博萊霉素A5(天津太河制藥,8mg/支,批號(hào)041103)用生理鹽水稀釋成4 g/L,按5 mg/kg體重氣管內(nèi)滴入0.15~0.2 ml制作PF模型,對照組氣管內(nèi)滴入等量生理鹽水。兩組分別行PMVEC原代培養(yǎng),以100μL Fluo-3 /AM熒光指示劑(美國Molecular Probe公司)負(fù)載,激光掃描共聚焦顯微鏡檢測細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i熒光強(qiáng)度,應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)法及免疫熒光法分別測定Kca3.1在EC的表達(dá)。透射電鏡觀察肺炎、BLM組及對照組PMVEC形態(tài)(電鏡標(biāo)本由第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院放射科殷茜博士提供)。 結(jié)果: 1.肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞透射電鏡觀察 ①.EC緊密連接:對照組EC管腔面光滑,沒有鑭顆粒附著,緊密連接未見開放。肺炎7 d組EC腔面有少量絮狀鑭顆粒,緊密連接開放,EC呈增生狀態(tài)。肺炎14 d組恢復(fù)光滑表面,未見鑭顆粒附著,EC恢復(fù)正常狀態(tài),EC周圍有少量膠原沉積。BLM各組緊密連接持續(xù)開放,EC腔面可見絮狀、線狀鑭顆粒及血小板附著。EC表面不光整,可見指狀突起,EC呈增生狀態(tài),以7d、14 d、21 d組明顯。②.EC吞飲小泡:肺炎7 d組EC內(nèi)吞飲小泡明顯減少,而BLM各組吞飲小泡均較豐富,特別是BLM 7 d組,胞質(zhì)中出現(xiàn)大量吞飲小泡,且體積增大。EC旁可見較多膠原沉積,局部EC與Fb直接接觸。 2.肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)游離Ca2+主要位于細(xì)胞漿。內(nèi)皮細(xì)胞[Ca2+]iBLM組(166.56±24.17)明顯高于對照組(95.79±13.51,p0.01),兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 3.肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞Kca3.1主要表達(dá)在細(xì)胞膜上。間接免疫熒光法BLM組Kca3.1(679.29±206.98)明顯低于對照組(958.75±188.84,p0.01);免疫細(xì)胞化學(xué)法BLM組Kca3.1(169.08±14.81)明顯低于對照組(189.78±13.73,p0.01),兩者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 1.血管通透性增高、EC粘附性增加及EC轉(zhuǎn)運(yùn)功能增強(qiáng)提示BLM組PMVEC的血管屏障功能發(fā)生異常,是炎癥細(xì)胞及血管活性物質(zhì)進(jìn)入組織間的重要因素之一。 2. EC內(nèi)鈣過載是PMVEC屏障功能異常的重要原因,EC[Ca2+]i過載與EC表型轉(zhuǎn)換及EC功能變化密切相關(guān)。 3. PMVEC細(xì)胞膜中電導(dǎo)鈣激活鉀通道蛋白質(zhì)1活性下降是EC鈣過載的原因之一。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R563.9
【圖文】：

肺泡結(jié)構(gòu)模式圖

氣血屏障結(jié)構(gòu)電鏡圖

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本文編號(hào)：2727096