【摘要】：目的:1.明確地塞米松對AQPs表達的影響。2.探索地塞米松對SUMOs表達的影響。3.探究SUMO化修飾與AQPs之間的調(diào)控關(guān)系。方法:1.地塞米松對A549細胞生長的影響及對AQPs表達的影響。選取A549細胞作為研究對象,代替人肺泡II型上皮細胞,加入不同濃度的地塞米松后培養(yǎng)不同時間,顯微鏡下觀察細胞的圖像,CCK-8實驗檢測A549細胞的活力,TUNNEL實驗檢測細胞凋亡情況。Western Blot分別檢測GR、AQP1、AQP4、AQP5蛋白在A549細胞中的表達水平。2.地塞米松對SUMO1、SUMO2/3及UBC9表達的影響。不同濃度的地塞米松作用于A549細胞不同時間,通過Western Blot分別檢測SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549細胞中的表達水平。3.地塞米松作用于A549細胞后,檢測SUMOs及AQPs的時空分布;敲低A549細胞中SUMO2/3后檢測AQPs的表達。地塞米松作用A549細胞不同時間后,免疫熒光染色檢測SUMO1、SUMO2/3、GR、AQP1、AQP4、AQP5的時空分布。構(gòu)建SUMO2/3干涉質(zhì)粒,轉(zhuǎn)染A549細胞,PCR檢測SUMO2和SUMO3的干涉效果,Western Blot檢測SUMO2/3、UBC9、AQP1、AQP4、AQP5的表達水平。結(jié)果:1.顯微鏡下發(fā)現(xiàn),高濃度的地塞米松作用后,A549細胞的形態(tài)無明顯改變,排列稀疏,數(shù)量減少,而低濃度的地塞米松作用后A549細胞變化不明顯;CCK-8及TUNNEL實驗結(jié)果顯示,低濃度的地塞米松對A549細胞的生長沒有明顯的抑制作用。地塞米松作用A549細胞后,GR的表達逐漸上升在36小時達到峰值。AQP1的表達無明顯變化。AQP4的表達逐漸上升,在48小時達到峰值。AQP5的表達逐漸上升,24小時達峰值,后下降至正常水平。2.Western Blot結(jié)果顯示,地塞米松作用A549細胞后,結(jié)合狀態(tài)的SUMO1沒有明顯變化,游離狀態(tài)的SUMO1輕微上升,結(jié)合狀態(tài)的SUOMO2/3明顯增加,在10~(-7)、5x10~(-7)、10~(-8)M濃度時均具有統(tǒng)計學(xué)意義,游離的SUOMO2/3無明顯變化。選取10~(-7)M濃度的地塞米松作為后續(xù)實驗的作用濃度。再次檢測SUMO1、SUMO2/3及UBC9蛋白在A549細胞中的表達水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)地塞米松對SUMO1的表達無明顯影響,SUMO2/3的表達增加,對UBC9的表達無明顯影響。3.免疫熒光染色結(jié)果顯示,地塞米松作用A549細胞后,SUMO1、SUMO2/3發(fā)生漿核移位,AQP1、AQP4的表達增加,AQP5的表達在24小時增加在48小時下降,GR遵循與AQP5相似的規(guī)律。PCR結(jié)果證實,SUMO2/3干涉質(zhì)粒轉(zhuǎn)染A549細胞后,SUMO2和SUMO3的表達降低。Western Blot結(jié)果顯示,敲低SUMO2/3轉(zhuǎn)染A549細胞后,在SUMO2/3表達下降的同時AQP4的表達也下降。結(jié)論:低濃度的地塞米松對細胞生長無明顯抑制作用,可以促進AQP4蛋白表達,同時也可以促進細胞內(nèi)蛋白的SUMO化修飾,當敲低SUMO2/3時,AQP4蛋白的表達量也下降。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R563

【參考文獻】

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1 朱s，

本文編號：2710269