【摘要】： 前言 哮喘是以氣道阻塞和氣道高反應(yīng)為主要特征的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制還不完全清楚。今年來，免疫性炎癥學(xué)說和神經(jīng)源性炎癥學(xué)說越來越受到關(guān)注。 隨著有關(guān)哮喘的研究日益增加，哮喘豚鼠模型被廣泛應(yīng)用，但我們在工作中發(fā)現(xiàn)許多問題，諸如豚鼠對卵蛋白反應(yīng)的個體差異性以及觀察氣道炎癥和氣道重塑的最佳時間等。本實(shí)驗(yàn)擬通過探討哮喘豚鼠模型制備中的問題，為使用動物模型研究哮喘的研究者提供更為理想的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)是含有37個氨基酸的多肽，廣泛分布于中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)。有研究表明，CGRP具有強(qiáng)烈的收縮呼吸道平滑肌、促進(jìn)血漿滲出和粘液分泌的作用，這提示CGRP可能參與哮喘發(fā)病的病理生理機(jī)制。下呼吸道感覺神經(jīng)纖維的胞體位于結(jié)狀神經(jīng)節(jié)和C_7～T_5段脊神經(jīng)節(jié)，中樞突進(jìn)入脊髓背角和孤束核。哮喘時，這些部位的CGRP是否有變化是值得探討的問題。 神經(jīng)生長因子(nerve growth factor，NGF)屬于神經(jīng)營養(yǎng)因子基因家族，是一種影響神經(jīng)細(xì)胞生長、發(fā)育、存活的多功能神經(jīng)營養(yǎng)因子。新近的研究表明，NGF具有更廣泛的生物學(xué)活性，特別是它在調(diào)節(jié)免疫及炎癥網(wǎng)絡(luò)方面的作用正引起人們的普遍關(guān)注，被認(rèn)為是連接神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的紐帶。哮喘豚鼠下呼吸道和內(nèi)臟傳入系統(tǒng)神經(jīng)生長因子是否參與哮喘的發(fā)病過程是值得探討的問題。 實(shí)驗(yàn)方法 觀察哮喘豚鼠反復(fù)吸入卵蛋白時間、對卵蛋白的敏感程度、哮喘嚴(yán)重程度及咳嗽程度與氣道炎癥和氣道重塑的關(guān)系；采用免疫組織化學(xué)方法結(jié)合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠下呼吸道和內(nèi)臟傳入系統(tǒng)CGRP表達(dá)的變化；采用免疫組織化學(xué)方法結(jié)合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中NGF表達(dá)的變化以及甲潑尼龍琥珀酸鈉對NGF表達(dá)的影響； 采用免疫組織化學(xué)方法和原位雜交結(jié)合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠下呼 吸道和內(nèi)臟傳人系統(tǒng)NGF表達(dá)的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1．與對照組相比哮喘各組支氣管肺泡灌洗液中均有明顯的嗜酸細(xì)胞浸 潤，并隨吸人卵蛋白時間的延長，嗜酸細(xì)胞數(shù)量明顯增加河＜隊05八2周 和4周組氣道重塑不明顯，而8周和12周組有明顯的氣道重塑。對卵蛋 白不同敏感程度豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞數(shù)量無明顯差異（P＞ 0．05人哮喘豚鼠隨著哮喘嚴(yán)重程度的增加，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì) 胞數(shù)量也明顯增加什＜O．05人與不咳嗽和輕度咳嗽豚鼠相比，重度咳嗽 豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞數(shù)量明顯增加河＜0＊門。 2．CGRP在對照組豚鼠嗜酸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中少量表 達(dá)；下呼吸道CGRP免疫反應(yīng)纖維呈棕色點(diǎn)狀或串珠狀，，彎曲走行于氣道上 皮和支氣管平滑�。唤Y(jié)狀神經(jīng)節(jié)和 C，－Ts段脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)存在 CGgy免疫反 應(yīng)陽性細(xì)胞，陽性反應(yīng)位于胞漿，其內(nèi)充滿棕色顆粒；CGRP免疫反應(yīng)見于 脊髓背角的各個板層，其中以板層＊的密度最大，呈點(diǎn)狀分布；CGRP免疫 反應(yīng)呈點(diǎn)狀分布于孤束核。 哮喘豚鼠肺泡巨噬細(xì)胞中C＊RP含量較對照組明顯增加（P＜0．01八 下呼吸道C＊RP免疫反應(yīng)纖維明顯多于對照組門＜O，05入呈線狀或樹枝 狀分布；結(jié)狀神經(jīng)節(jié)和C，－Ts段脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)CGny免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞較對 照組明顯增多，反應(yīng)也明顯增強(qiáng)（P＜O．05X脊髓背角和孤束核內(nèi)C＊RP免 疫反應(yīng)也較對照組明顯增強(qiáng)k＜0．05人 3．對照組豚鼠支氣管肺泡灌洗液中主要為肺泡巨噬細(xì)胞（約占 80％以 上人還含有少量的嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞。 與對照組相比，哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù) 量明顯增加（P＜O．01，P＜0．05入雖然肺泡巨噬細(xì)胞百分率相對下降，但肺 泡巨噬細(xì)胞絕對數(shù)量卻增加河＜0．01人與哮喘組相比，甲潑尼龍組支氣 管肺泡灌洗液中嗜酸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少汗＜O．01，P＜O．05X肺 泡巨噬細(xì)胞絕對數(shù)量未見明顯改變沖＞O．05人 4．對照組豚鼠嗜酸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞中，可見NGF少量 ·二· 表達(dá)。 與對照組相比，哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液中NGF陽性嗜酸細(xì)胞和淋 巴細(xì)胞明顯增多（P＜o(jì)．01，P＜O．05人肺泡巨噬細(xì)胞中＊＊F過表達(dá)（P＜ 0．of人且呈 NGF陽性反應(yīng)的小型肺泡巨噬細(xì)胞數(shù)量大大多于大型肺泡巨 噬細(xì)胞。與哮喘組相比，甲潑尼龍組NGF陽性嗜酸細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)量明 顯減少汗＜o(jì)．01，P＜o(jì)．05人肺泡巨噬細(xì)胞中＊辭表達(dá)也明顯減少u＜0． of）。 5．對照組豚鼠氣道上皮內(nèi)可見到含有NGF免疫反應(yīng)陽性顆粒的上皮 細(xì)胞，陽性反應(yīng)物位于胞漿，呈棕褐色。C，－Ts段脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)，NGF免疫反 應(yīng)陽性細(xì)胞遍布整個神經(jīng)節(jié)，多呈大圓形或多角形。脊髓背角的NGF免疫 反應(yīng)陽性細(xì)胞多呈小圓形，遍布整個背角。原位雜交顯示，對照組豚鼠氣道 上皮細(xì)胞人，－T。段脊神經(jīng)節(jié)及脊髓背角內(nèi)有NGF mRNA表達(dá)。 哮喘豚鼠氣
【圖文】：

哮咱組A9}I中CGRP免疫反應(yīng)(xlOQO)

哮暇組q一幾段脊神經(jīng)節(jié)內(nèi)的C
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2709942