【摘要】： 前言 哮喘是以氣道阻塞和氣道高反應為主要特征的慢性氣道炎癥性疾病，其發(fā)病機制還不完全清楚。今年來，免疫性炎癥學說和神經源性炎癥學說越來越受到關注。 隨著有關哮喘的研究日益增加，哮喘豚鼠模型被廣泛應用，但我們在工作中發(fā)現(xiàn)許多問題，諸如豚鼠對卵蛋白反應的個體差異性以及觀察氣道炎癥和氣道重塑的最佳時間等。本實驗擬通過探討哮喘豚鼠模型制備中的問題，為使用動物模型研究哮喘的研究者提供更為理想的實驗模型。 降鈣素基因相關肽(calcitonin gene related peptide，CGRP)是含有37個氨基酸的多肽，廣泛分布于中樞和周圍神經系統(tǒng)。有研究表明，CGRP具有強烈的收縮呼吸道平滑肌、促進血漿滲出和粘液分泌的作用，這提示CGRP可能參與哮喘發(fā)病的病理生理機制。下呼吸道感覺神經纖維的胞體位于結狀神經節(jié)和C_7～T_5段脊神經節(jié)，中樞突進入脊髓背角和孤束核。哮喘時，這些部位的CGRP是否有變化是值得探討的問題。 神經生長因子(nerve growth factor，NGF)屬于神經營養(yǎng)因子基因家族，是一種影響神經細胞生長、發(fā)育、存活的多功能神經營養(yǎng)因子。新近的研究表明，NGF具有更廣泛的生物學活性，特別是它在調節(jié)免疫及炎癥網絡方面的作用正引起人們的普遍關注，被認為是連接神經系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的紐帶。哮喘豚鼠下呼吸道和內臟傳入系統(tǒng)神經生長因子是否參與哮喘的發(fā)病過程是值得探討的問題。 實驗方法 觀察哮喘豚鼠反復吸入卵蛋白時間、對卵蛋白的敏感程度、哮喘嚴重程度及咳嗽程度與氣道炎癥和氣道重塑的關系；采用免疫組織化學方法結合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠下呼吸道和內臟傳入系統(tǒng)CGRP表達的變化；采用免疫組織化學方法結合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中NGF表達的變化以及甲潑尼龍琥珀酸鈉對NGF表達的影響； 采用免疫組織化學方法和原位雜交結合顯微圖像分析，觀察哮喘豚鼠下呼 吸道和內臟傳人系統(tǒng)NGF表達的變化。 實驗結果 1．與對照組相比哮喘各組支氣管肺泡灌洗液中均有明顯的嗜酸細胞浸 潤，并隨吸人卵蛋白時間的延長，嗜酸細胞數量明顯增加河＜隊05八2周 和4周組氣道重塑不明顯，而8周和12周組有明顯的氣道重塑。對卵蛋 白不同敏感程度豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細胞數量無明顯差異（P＞ 0．05人哮喘豚鼠隨著哮喘嚴重程度的增加，支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細 胞數量也明顯增加什＜O．05人與不咳嗽和輕度咳嗽豚鼠相比，重度咳嗽 豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細胞數量明顯增加河＜0＊門。 2．CGRP在對照組豚鼠嗜酸細胞、淋巴細胞和肺泡巨噬細胞中少量表 達；下呼吸道CGRP免疫反應纖維呈棕色點狀或串珠狀，，彎曲走行于氣道上 皮和支氣管平滑�。唤Y狀神經節(jié)和 C，－Ts段脊神經節(jié)內存在 CGgy免疫反 應陽性細胞，陽性反應位于胞漿，其內充滿棕色顆粒；CGRP免疫反應見于 脊髓背角的各個板層，其中以板層＊的密度最大，呈點狀分布；CGRP免疫 反應呈點狀分布于孤束核。 哮喘豚鼠肺泡巨噬細胞中C＊RP含量較對照組明顯增加（P＜0．01八 下呼吸道C＊RP免疫反應纖維明顯多于對照組門＜O，05入呈線狀或樹枝 狀分布；結狀神經節(jié)和C，－Ts段脊神經節(jié)內CGny免疫反應陽性細胞較對 照組明顯增多，反應也明顯增強（P＜O．05X脊髓背角和孤束核內C＊RP免 疫反應也較對照組明顯增強k＜0．05人 3．對照組豚鼠支氣管肺泡灌洗液中主要為肺泡巨噬細胞（約占 80％以 上人還含有少量的嗜酸細胞和淋巴細胞。 與對照組相比，哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸細胞和淋巴細胞數 量明顯增加（P＜O．01，P＜0．05入雖然肺泡巨噬細胞百分率相對下降，但肺 泡巨噬細胞絕對數量卻增加河＜0．01人與哮喘組相比，甲潑尼龍組支氣 管肺泡灌洗液中嗜酸細胞、淋巴細胞數量明顯減少汗＜O．01，P＜O．05X肺 泡巨噬細胞絕對數量未見明顯改變沖＞O．05人 4．對照組豚鼠嗜酸細胞、淋巴細胞和肺泡巨噬細胞中，可見NGF少量 ·二· 表達。 與對照組相比，哮喘豚鼠支氣管肺泡灌洗液中NGF陽性嗜酸細胞和淋 巴細胞明顯增多（P＜o．01，P＜O．05人肺泡巨噬細胞中＊＊F過表達（P＜ 0．of人且呈 NGF陽性反應的小型肺泡巨噬細胞數量大大多于大型肺泡巨 噬細胞。與哮喘組相比，甲潑尼龍組NGF陽性嗜酸細胞、淋巴細胞數量明 顯減少汗＜o．01，P＜o．05人肺泡巨噬細胞中＊辭表達也明顯減少u＜0． of）。 5．對照組豚鼠氣道上皮內可見到含有NGF免疫反應陽性顆粒的上皮 細胞，陽性反應物位于胞漿，呈棕褐色。C，－Ts段脊神經節(jié)內，NGF免疫反 應陽性細胞遍布整個神經節(jié)，多呈大圓形或多角形。脊髓背角的NGF免疫 反應陽性細胞多呈小圓形，遍布整個背角。原位雜交顯示，對照組豚鼠氣道 上皮細胞人，－T。段脊神經節(jié)及脊髓背角內有NGF mRNA表達。 哮喘豚鼠氣
【圖文】：

哮咱組A9}I中CGRP免疫反應(xlOQO)

哮暇組q一幾段脊神經節(jié)內的C
【學位授予單位】：中國醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2002
【分類號】：R562.25

【參考文獻】

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2 才麗平,方秀斌,高杰,王鐵民,于潤江;實驗性哮喘豚鼠內臟感覺傳入部位SP免疫反應的研究[J];神經解剖學雜志;2001年01期

3 方秀斌,何維為;降鈣素基因相關肽[J];中國醫(yī)科大學學報;1989年S1期

4 章曉初,姚婉貞,何其華,陳月,趙鳴武;哮喘豚鼠氣道重塑與氣道反應性的圖像分析[J];中華結核和呼吸雜志;2001年02期

本文編號：2709942