【摘要】： 目的:研究阿奇霉素對結(jié)核性胸腔積液中淋巴細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子(IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12)功能的影響,探討阿奇霉素在結(jié)核病中可能的免疫糾偏作用。方法:以診斷明確的結(jié)核性胸膜炎患者為研究對象;無菌術(shù)收集胸腔積液,上清液凍存?zhèn)溆?以人淋巴細(xì)胞分離液及貼壁培養(yǎng)方法分離其中細(xì)胞;CD4單克隆抗體孵育提純細(xì)胞后經(jīng)免疫細(xì)胞化學(xué)染色驗證所得細(xì)胞類型;并將分離細(xì)胞以0.1%臺盼藍(lán)染色活細(xì)胞計數(shù),調(diào)細(xì)胞濃度為1×10~6/ml,設(shè)陰性對照組(不施加藥物干預(yù))、陽性對照組(給予不同濃度多抗甲素干預(yù))、試驗組(以不同濃度阿奇霉素干預(yù)),接種于12孔板(含10%胎牛血清、100mg/L植物血凝素的完整RPMI 1640培養(yǎng)基),其中,陰性對照組設(shè)5個復(fù)孔,陽性對照組和試驗組分別按同一濃度組設(shè)5個復(fù)孔,置37℃、5%CO_2孵箱中培養(yǎng);各培養(yǎng)孔內(nèi)均不更換培養(yǎng)基,分別于12、24、48、72小時離心,取培養(yǎng)液及細(xì)胞沉渣備用;抽提總RNA,用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法(reverse transcription -polymerase chainreaction,RT-PCR)觀察不同干預(yù)下各階段γ-干擾素(interferon-gamma,IFN-γ)、細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor-beta,TGF-β)、白細(xì)胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白細(xì)胞介素-12(interleukin-12,IL-12)mRNA表達(dá)水平;同步用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)檢測不同階段各組上清液及培養(yǎng)液內(nèi)IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12濃度。結(jié)果:以CD4單克隆抗體孵育結(jié)核性胸腔積液中分離細(xì)胞經(jīng)免疫化學(xué)染色,明顯呈棕色反應(yīng),提示CD_4+T淋巴細(xì)胞陽性率為74.73%。目的基因擴(kuò)增電泳條帶灰度掃描結(jié)果顯示,試驗組IFN-γ、IL-12 mRNA表達(dá)上調(diào),TGF-β、IL-4mRNA表達(dá)下調(diào),與陰性對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),與陽性對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。ELISA檢測結(jié)果與RT-PCR分析結(jié)果基本一致,呈同向變化,即試驗組IFN-γ、IL-12濃度增加,TGF-β、IL-4濃度減少,與陰性對照組有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05),與陽性對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。并且,前述結(jié)果呈現(xiàn)一定時間以及劑量依賴性,即隨阿奇霉素濃度增加、作用時間延長,IFN-γ、IL-12表達(dá)上調(diào),及TGF-β、IL-4表達(dá)下調(diào)逐漸顯著;以80μg/ml組孵育細(xì)胞、作用48小時,效果最為明顯。結(jié)論:阿奇霉素體外干預(yù)結(jié)核性胸腔積液中CD4+T淋巴細(xì)胞可上調(diào)IFN-γ、IL-12表達(dá)以及下調(diào)TGF-β、IL-4表達(dá),其作用與多抗甲素相當(dāng)(P＞0.05),并與時間及濃度有一定關(guān)系。
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R521.7

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本文編號：2704702