【摘要】： 目的:研究阿奇霉素對結核性胸腔積液中淋巴細胞表達細胞因子(IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12)功能的影響,探討阿奇霉素在結核病中可能的免疫糾偏作用。方法:以診斷明確的結核性胸膜炎患者為研究對象;無菌術收集胸腔積液,上清液凍存?zhèn)溆?以人淋巴細胞分離液及貼壁培養(yǎng)方法分離其中細胞;CD4單克隆抗體孵育提純細胞后經(jīng)免疫細胞化學染色驗證所得細胞類型;并將分離細胞以0.1%臺盼藍染色活細胞計數(shù),調細胞濃度為1×10~6/ml,設陰性對照組(不施加藥物干預)、陽性對照組(給予不同濃度多抗甲素干預)、試驗組(以不同濃度阿奇霉素干預),接種于12孔板(含10%胎牛血清、100mg/L植物血凝素的完整RPMI 1640培養(yǎng)基),其中,陰性對照組設5個復孔,陽性對照組和試驗組分別按同一濃度組設5個復孔,置37℃、5%CO_2孵箱中培養(yǎng);各培養(yǎng)孔內均不更換培養(yǎng)基,分別于12、24、48、72小時離心,取培養(yǎng)液及細胞沉渣備用;抽提總RNA,用逆轉錄-聚合酶鏈式反應法(reverse transcription -polymerase chainreaction,RT-PCR)觀察不同干預下各階段γ-干擾素(interferon-gamma,IFN-γ)、細胞轉化生長因子(transforming growth factor-beta,TGF-β)、白細胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白細胞介素-12(interleukin-12,IL-12)mRNA表達水平;同步用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)檢測不同階段各組上清液及培養(yǎng)液內IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12濃度。結果:以CD4單克隆抗體孵育結核性胸腔積液中分離細胞經(jīng)免疫化學染色,明顯呈棕色反應,提示CD_4+T淋巴細胞陽性率為74.73%。目的基因擴增電泳條帶灰度掃描結果顯示,試驗組IFN-γ、IL-12 mRNA表達上調,TGF-β、IL-4mRNA表達下調,與陰性對照組相比有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),與陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。ELISA檢測結果與RT-PCR分析結果基本一致,呈同向變化,即試驗組IFN-γ、IL-12濃度增加,TGF-β、IL-4濃度減少,與陰性對照組有統(tǒng)計學差異(P＜0.05),與陽性對照組差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。并且,前述結果呈現(xiàn)一定時間以及劑量依賴性,即隨阿奇霉素濃度增加、作用時間延長,IFN-γ、IL-12表達上調,及TGF-β、IL-4表達下調逐漸顯著;以80μg/ml組孵育細胞、作用48小時,效果最為明顯。結論:阿奇霉素體外干預結核性胸腔積液中CD4+T淋巴細胞可上調IFN-γ、IL-12表達以及下調TGF-β、IL-4表達,其作用與多抗甲素相當(P＞0.05),并與時間及濃度有一定關系。
【學位授予單位】：瀘州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R521.7

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本文編號：2704702