【摘要】： 呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus. RSV)是造成世界范圍內(nèi)嬰幼兒及成人呼吸道感染的首位病毒病原,迄今為止尚沒(méi)有針對(duì)RSV感染的可靠疫苗和治療藥物問(wèn)世,RNA干擾(RNA interference ,RNAi)和脫氧核酶(Doxyribozyme,DNAzyme,DZ)技術(shù)是能夠有效抑制目的基因表達(dá)的兩種基因治療策略,已被廣泛用于基因功能、腫瘤及病毒感染的研究。隨著分子生物學(xué)和分子病毒學(xué)的發(fā)展,尤其是對(duì)病毒基因結(jié)構(gòu)和功能的研究取得長(zhǎng)足進(jìn)步,基因水平特別是基因轉(zhuǎn)錄后水平阻斷病毒復(fù)制成為當(dāng)前研究熱點(diǎn)。M2基因在RSV的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制中起著重要作用,為了從基因水平阻斷RSV感染,本研究針對(duì)RSV M2基因mRNA設(shè)計(jì)、構(gòu)建表達(dá)小發(fā)卡結(jié)構(gòu)狀RNA(short hairpin RNA, shRNA)的重組質(zhì)粒(pshRNA),并在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)觀察小發(fā)卡結(jié)構(gòu)狀RNA抗RSV活性以及聯(lián)合脫氧核酶治療對(duì)RSV復(fù)制的抑制效應(yīng),為利用基因治療防治RSV感染的研究奠定基礎(chǔ)。 第一部分小發(fā)卡結(jié)構(gòu)狀RNA作用靶點(diǎn)的選擇及載體質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定 目的:選擇在RSV轉(zhuǎn)錄復(fù)制中起重要作用的M2基因作為shRNA干擾的靶點(diǎn),根據(jù)siRNA的設(shè)計(jì)原則,設(shè)計(jì)和構(gòu)建針對(duì)RSVM2基因
【圖文】：

b價(jià)格昂貴也使其應(yīng)用受到限制[16]。述，目前用于防治 RSV 感染的手段非常有限，探索新的途徑控制解決的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題。隨著分子生物學(xué)和分子病毒學(xué)的發(fā)展，尤其和功能的研究取得長(zhǎng)足進(jìn)步，基因水平特別是基因轉(zhuǎn)錄后水平當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。阻斷技術(shù)主要在阻斷靶基因 DNA 和 RNA 兩個(gè)水平上，前者主ene knockout）及 DNA 誘騙（DNA decoy）技術(shù)，后者主要包括酶、脫氧核酶和最近幾年新發(fā)現(xiàn)的 RNA 干擾技術(shù)等反義基因治反義基因治療技術(shù)是根據(jù)核酸雜交原理設(shè)計(jì)，采用反義核酸分子靶基因的生物學(xué)新技術(shù)。反義基因治療可以 DNA 為靶分子，反形成三鏈 DNA，在基因轉(zhuǎn)錄或復(fù)制水平上調(diào)節(jié)病毒基因表達(dá)，靶分子，反義核酸結(jié)合到 mRNA 分子的特定部位，在剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)或調(diào)節(jié)病毒基因表達(dá)[18]。靶向病毒 mRNA 的反義技術(shù)是當(dāng)今控制

NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2（M2-1/M2-2）-L-5，（圖1-1），共編碼11個(gè)病毒蛋白[1-3]（圖1-2），分別為：核衣殼蛋白N、磷蛋白P、多聚酶亞單位L、轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)因子M2-1、黏附蛋白G、融合蛋白F、小疏水蛋白SH、非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NS2、基質(zhì)蛋白M和M2-2。 RSV外層為包膜，，內(nèi)層為衣殼，核心是RNA核酸，衣殼緊緊包繞RNA核酸，形成病毒的核衣殼。RSV基因組編碼產(chǎn)物依功能而言主要分為兩部分，一部分為與病毒感染有關(guān)的三個(gè)蛋白F、G、SH，另一部分為與病毒轉(zhuǎn)錄復(fù)制相關(guān)蛋白。RSV M2基因位于F和L基因之間
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R56

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

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本文編號(hào)：2704439