【摘要】：目的:研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)大鼠急性肺損傷模型的生物學(xué)影響和在損傷修復(fù)中的作用及可能的機(jī)制,探討急性肺損傷細(xì)胞治療的可能性。 方法:首先以密度梯度離心法分離、體外培養(yǎng)并擴(kuò)增成體大鼠骨髓MSCs,采用免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)MSCs抗原表達(dá),同時(shí)檢測(cè)MSCs向骨細(xì)胞及脂肪細(xì)胞的分化能力,并用BrdU或DAPI標(biāo)記MSCs;采用細(xì)菌內(nèi)毒素攻擊法建立大鼠急性肺損傷模型,進(jìn)行干細(xì)胞移植治療。將72只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組:(1)正常對(duì)照組(C,n=24),經(jīng)尾靜脈注入0.5ml生理鹽水;(2)單純肺損傷組(L,n=24):經(jīng)尾靜脈注射LPS(5mg/kg),然后立即經(jīng)另一條尾靜脈注入0.5ml生理鹽水;(3)急性肺損傷干細(xì)胞移植組(LM,n=24):經(jīng)尾靜脈注入LPS(5mg/kg),然后立即經(jīng)另一條尾靜脈注入培養(yǎng)并標(biāo)記的大鼠MSCs(1.0×10~6溶于0.5ml生理鹽水)。各組在實(shí)驗(yàn)后2h、4h、6h麻醉狀態(tài)下活殺動(dòng)物,每個(gè)時(shí)間點(diǎn)各8只。經(jīng)腹主動(dòng)脈取血、離心,分離血漿,采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定血漿中TNF-a、IL-6的含量;收集肺組織測(cè)定濕/干重比值、比色法測(cè)肺勻漿髓過(guò)氧化酶(MPO)活性、制作組織切片以HE和免疫組化法行病理學(xué)檢查。 結(jié)果:1.骨髓MSCs的分離、培養(yǎng)及抗原表達(dá)與多向分化能力:密度梯度離心法能成功分離純化大鼠骨髓MSCs。免疫細(xì)胞化學(xué)示大鼠MSCs表達(dá)CD29和CD44,不表達(dá)造血干細(xì)胞標(biāo)志CD34;BrdU標(biāo)記法陽(yáng)性率約為74%,DAPI標(biāo)記法陽(yáng)性率可達(dá)90%以上;流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,隨傳代次數(shù)的增多,MSCs增殖能力減弱;BrdU標(biāo)記和未標(biāo)記細(xì)胞增殖周期無(wú)明顯差異。體外誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)顯示,MSCs可向脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞等多向分化。2.LPS致傷作用及MSCs移植對(duì)ALI的影響:組織切片HE染色顯示,LM組肺組織炎癥改變較L組減輕。免疫組織化學(xué)染色顯示MSCs移植后在肺內(nèi)歸巢,并有細(xì)胞形態(tài)的變化,但未檢測(cè)到細(xì)胞分子表型的改變。與C組相比,LM組、L組在致傷后肺W/D值、組織MPO活性、血漿TNF-a及IL-6水平均升高(P0.01),但LM
【圖文】：

圖2大鼠MSCS的免疫細(xì)胞化學(xué)染色:A.傳代培養(yǎng)的大鼠MSCS(倒置相差顯微鏡，，X200);B.大鼠MSCS的CD29染色(光學(xué)顯微鏡DAB顯色X200);C.大鼠MSCS的CD44染色(光學(xué)顯微鏡DAB顯色X200);D.大鼠MSCS的CD34染色(光學(xué)顯微鏡DAB顯色X100)。

黃色;CD34在MSCs不表達(dá)(圖ZD)。流式細(xì)胞儀示大鼠MSCsCD29陽(yáng)性率約為70%，CD44約為90%，CD34的陽(yáng)性率則低于0.1%;陰性對(duì)照陽(yáng)性率為0.07%(圖3)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R563.8

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本文編號(hào)：2690621