【摘要】： 目的:研究腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)對(duì)培養(yǎng)的大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞(pulmonary microvascular endothelial cell,PMVEC)中Src抑制的蛋白激酶C底物(Src-suppressed C kinase substrate,SSeCKS)表達(dá)的影響及甲基強(qiáng)的松龍(甲強(qiáng)龍)對(duì)TNF-α所致大鼠PMVEC單層通透性損傷和SSeCKS表達(dá)的干預(yù)作用。 方法:根據(jù)TNF-α刺激時(shí)間與濃度的差異,將培養(yǎng)的大鼠PMVEC隨機(jī)分為TNF-α?xí)r間刺激組與濃度刺激組,前組以5000 U/ml的TNF-α分別與PMVEC作用0.5h,1.5h,3h,6h,12h;后組分別以200U/ml,1000U/ml,5000U/ml的TNF-α與PMVEC作用3h。藥物干預(yù):分別以5000U/ml的TNF-α和0.2mg/ml的甲強(qiáng)龍+5000U/ml的TNF-α與PMVEC作用1.5h。以上均設(shè)立正常對(duì)照組,運(yùn)用RT-PCR法及Western-blot法檢測(cè)SSeCKS mRNA及蛋白的表達(dá)變化。用針頭式濾器檢測(cè)TNF-α(5000 U/ml)組及甲強(qiáng)龍(0.2mg/ml)+TNF-α(5000 U/ml)組作用1.5h后大鼠PMVEC單層通透系數(shù)(Kf),以正常PMVEC單層通透性作對(duì)照。 結(jié)果:1.體外成功分離培養(yǎng)出大鼠PMVEC,并經(jīng)形態(tài)學(xué)及FITC-PHA結(jié)合實(shí)驗(yàn)證實(shí)。2.通過對(duì)正常對(duì)照組大鼠PMVEC的RT-PCR法及Western-blot法檢測(cè),均發(fā)現(xiàn)SSeCKS特異性條帶。3.正常情況下大鼠PMVEC低表達(dá)SSeCKS。5000U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表達(dá)自0.5h開始增高,3h達(dá)到高峰,隨后漸行性下降但維持較高表達(dá)水平至12h,以上各時(shí)間點(diǎn)mRNA及蛋白的表達(dá)均明顯高于正常對(duì)照組。表明TNF-α可以時(shí)間依賴的方式上調(diào)SSeCKS的mRNA及蛋白的表達(dá)。4.200 U/ml,1000 U/ml,5000 U/ml的TNF-α作用PMVEC后,SSeCKS mRNA及蛋白的表達(dá)依次遞增,均明顯高于正常對(duì)照組。表明TNF-α可以濃度依賴的方式上調(diào)SSeCKS的mRNA及蛋白的表達(dá)。5.甲強(qiáng)龍+TNF-α組SSeCKS的蛋白表達(dá)明顯低于TNF-α組,而甲強(qiáng)龍+TNF-α組PMVEC單層通透系數(shù)(Kf)也明顯低于TNF-α組。表明甲強(qiáng)龍抑制TNF-α所致大鼠PMVEC單層通透性增加的同時(shí),降低SSeCKS蛋白高表達(dá)水平。 結(jié)論:1.體外成功培養(yǎng)鑒定大鼠PMVEC。2.從mRNA及蛋白水平證實(shí)大鼠PMVEC表達(dá)SSeCKS。3.TNF-α以時(shí)間及濃度依賴的方式上調(diào)大鼠PMVEC中SSeCKS的mRNA及蛋白表達(dá)。4.甲強(qiáng)龍?jiān)谝种芓NF-α所致大鼠PMVEC單層通透性增加的同時(shí),降低SSeCKS蛋白高表達(dá)水平。提示SSeCKS參與TNF-α誘導(dǎo)大鼠PMVEC單層通透性損傷,可能具有調(diào)控PMVEC單層通透性的作用。
【圖文】：

圖2單層匯合的原代大鼠PMVEC(xl00倒置顯微鏡)PrimaryeulturedratPMVECmonolayerunderPhase一on甘ast而erosP柳〔C的鑒定的細(xì)胞與FITC一PHA結(jié)合呈黃綠色熒光，見圖3，符合血

Fig2PrimaryeulturedratPMVECmonolayerunderPhase一on甘ast而 eroseoPex100 3.1.2大鼠P柳〔C的鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞與FITC一PHA結(jié)合呈黃綠色熒光，，見圖3，符合血管內(nèi)皮細(xì)胞特性。圖3大鼠PMVEC植物凝血素結(jié)合特性觀察(xZoo熒光顯微鏡) Fig3RatPMVECboundtoFll℃一 PllAunderfluoreseeneemicroseoPeX200
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R563.8

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本文編號(hào)：2679794