【摘要】： 背景及目的 支氣管哮喘是一種比較高發(fā)的呼吸系統(tǒng)疾病,其中青少年占了相當(dāng)大的比例。在我國,隨著經(jīng)濟的高速增長、人們生活方式的轉(zhuǎn)變,哮喘的發(fā)病率在逐年提高。目前傳統(tǒng)經(jīng)典的哮喘治療方案一吸入性糖皮質(zhì)激素和β2受體激動劑對于防治哮喘發(fā)揮了重要的作用,但仍存在許多不盡如人意的地方,亟需尋找新的治療靶點和研制新型的抗哮喘藥物。隨著基因、分子技術(shù)的進步,目前已經(jīng)認(rèn)識到炎癥趨化因子及其受體在炎性細胞趨化、募集過程中扮演了重要角色。而CCL1-CCR8就是一對重要的趨化因子和受體,在體外實驗中CCL1具有趨化、募集CCR8+炎性細胞的作用,而作為受體-CCR8優(yōu)勢性地表達在Th2淋巴細胞上,Th2淋巴細胞又在支氣管哮喘氣道炎癥形成上發(fā)揮了重要作用。CCL1-CCR8參與了多種炎癥性疾病,但目前對其在支氣管哮喘發(fā)病機制中作用和地位存在許多爭議。另外糖皮質(zhì)激素作為重要的抗炎藥物,廣泛的應(yīng)用于哮喘治療,但其抗炎機制仍未完全明晰,特別是其能否抑制CCL1-CCR8的表達?是否通過抑制CCL1-CCR8的表達來發(fā)揮抗炎作用?為此,本實驗通過復(fù)制支氣管哮喘小鼠模型,在哮喘模型的基礎(chǔ)上于小鼠氣道內(nèi)滴注重組小鼠CCL1(rCCL1)來探索CCL1-CCR8在支氣管哮喘發(fā)病機制中的作用,并應(yīng)用地塞米松干預(yù)哮喘,研究其對CCL1-CCR8作用的影響。并藉此希望尋找到新的哮喘藥物治療靶點及糖皮質(zhì)激素抗炎新機制。 材料和方法 40只清潔級BALB/c雌性小鼠,隨機分為4組,每組10只,分別為哮喘組、rCCLl干預(yù)組、地塞米松干預(yù)組、正常對照組。將新鮮配制的OVA和AL(OH)3的混懸液按0.2ml/只的劑量(含OVA100ug和AL(OH)32.25mg)于第1天、第14天以腹腔、皮下多點注射方式致敏小鼠,第25-31天,連續(xù)7天每天將小鼠置于密閉有機玻璃箱(40cm×35cm×20cm)中應(yīng)用霧化器霧化吸入2%OVA液30分鐘激發(fā)小鼠哮喘,制作哮喘模型。rCCL1干預(yù)組小鼠哮喘制作同哮喘組,但于最后一次激發(fā)后以0.3%戊巴比妥(30mg/kg)麻醉后經(jīng)鼻道滴入rCCL1PBS液25ul/只(含2.5ugrCCL1)。地塞米松干預(yù)組小鼠哮喘制作同哮喘組,但在每次霧化激發(fā)前一小時給予腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液(2mg/kg)。正常對照組小鼠制作程序同哮喘組,但致敏液和霧化激發(fā)液均以生理鹽水代替。最后一次激發(fā)后24h殺死小鼠,行肺泡灌洗,灌洗液離心,進行細胞分類、計數(shù)。肺組織HE染色,采用ELISA法檢測肺泡灌洗液中的IL-4含量,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)半定量(RT-PCR)檢測肺組織中CCR8mRNA和CCL1mRNA表達的水平。實驗數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果 1癥狀比較：哮喘組小鼠OVA激發(fā)后出現(xiàn)典型的哮喘癥狀；rCCL1干預(yù)組哮喘癥狀更為明顯,且有2只小鼠因出現(xiàn)重度哮喘導(dǎo)致死亡；地塞米松組小鼠較哮喘組小鼠明顯減輕；正常對照組小鼠未見異常癥狀。 2肺組織病理：肺組織HE染色顯示哮喘組小鼠有較多炎性細胞浸潤,肺組織結(jié)構(gòu)有破壞；rCCL1干預(yù)組相比更為突出；地塞米松組小鼠較哮喘組減輕；正常對照組小鼠正常。 3 BALF中IL-4濃度和細胞總數(shù)及分類：哮喘組、rCCL1組、地塞米松組和正常組小鼠BALF中細胞總數(shù)分別為(9.1±0.9)×106,(9.7±0.8)×106,(4.2±0.5)×106,(1.7±0.4)×106；BALF中嗜酸性粒細胞占細胞總數(shù)比例分別為(32.4±3.4)%,(39.0±7.1)%,(8.9±0.9)%,(0.6±0.1)%；BALF中淋巴細胞占細胞總數(shù)比例分別為(14.0±3.0)%,(17.8±4.2)%,(6.3±0.6)%,(2.9±0.5)%；BALF中IL-4水平分別為(47.67±11.67)pg/ml,(57.95±9.24)pg/ml,(19.76±4.72) pg/ml,(5.16±1.23)pg/ml. 4肺組織CCL1mRNA-CCR8mRNA表達：哮喘組、rCCL1組、地塞米松組和正常組小鼠肺組織中CCL1mRNA表達水平分別為0.76±0.16,1.02±0.31,0.53±0.13,0.11±0.06：CCR8mRNA表達水平分別為1.26±0.13,1.43±0.26,0.79±0.12,0.18±0.09。 5統(tǒng)計學(xué)分析：BALF中IL-4水平、細胞總數(shù)、嗜酸性粒細胞、淋巴細胞數(shù)量均rCCL1干預(yù)組哮喘組地塞米松組正常對照組(差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05),同時在CCL1mRNA及CCR8mRNA的表達水平上也是rCCL1干預(yù)組哮喘組地塞米松組正常對照組(差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義P0.05)。 結(jié)論 1、CCL1-CCR8在哮喘小鼠肺內(nèi)表達增高,在哮喘氣道炎癥的形成上發(fā)揮了重要作用； 2、地塞米松可以抑制哮喘小鼠肺內(nèi)CCL1-CCR8的表達并以此減輕了哮喘氣道炎癥； 3、CCL1-CCR8可能是哮喘藥物治療的新靶點。
【圖文】：

，

本文編號：2674944