【摘要】：目的：從分子水平上探討紅霉素(EM)的抗炎作用機(jī)制，為臨床防治慢性阻塞性肺疾病(COPD)提供新的思路。 方法：體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)，將細(xì)胞隨機(jī)分為8組，先加入紅霉素干預(yù)，后加入腫瘤壞死因子(TNF-α)刺激。分組如下：1．空白對照組；2．TNF-α(20ng／ml,16h)；3．EM(0.3ug／ml，24h)+TNF-α(20ng／ml，16h)；4．EM(3ug／ml，24h)+TNF-α(20ng／ml，16h)；5．EM(30ug／ml，24h)+TNF-α(20ng／ml，16h)；6．EM(0.3ug／ml，48h)+TNF-α(20ng／ml，16h)；7．EM(3ug／ml，48h)+TNF-α(20ng／ml，16h)；8．EM(30ug／ml，48h)+TNF-α(20ng／ml，16h)。然后收集各組細(xì)胞分別提取RNA及核蛋白，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測白介素-8(IL-8)mRNA、細(xì)胞間粘附分子-1(ICAM-1)mRNA的表達(dá)，并應(yīng)用電泳遷移率改變分析法(EMSA)檢測轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(NF-κB)的活性。 結(jié)果：EMSA結(jié)果顯示，用前炎因子TNF-α刺激人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)后，細(xì)胞內(nèi)NF-κB表達(dá)增高；RT-PCR結(jié)果顯示細(xì)胞IL-8mRNA、ICAM-1mRNA表達(dá)增高。先加入不同濃度及作用時(shí)間的紅霉素，后加入前炎因子TNF-α刺激人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)，EMSA結(jié)果顯示各組細(xì)胞NF-κB表達(dá)均降低，且提示有隨著紅霉素濃度增加，作用時(shí)間延長，，NF-κB表達(dá)受抑制愈明顯的趨勢，但隨著紅霉素濃度增加及作用時(shí)間延長到一定的范圍，NF-κB表達(dá)受抑制差別不明顯。RT-PCR結(jié)果顯示各組細(xì)胞IL-8mRNA表達(dá)均降低，但其降低的水平與紅霉素作用濃度及時(shí)間無明顯關(guān)系；各組細(xì)胞ICAM-1mRNA表達(dá)均降低，且提示有隨著紅霉素濃度增加，作用時(shí)間延長，ICAM-1mRNA表達(dá)受抑制越明顯的趨勢。 結(jié)論：1．前炎因子TNF-α能激活人支氣管上皮細(xì)胞NF-κB，而NF-κB可能參與了IL-8基因、ICAM-1基因的表達(dá)調(diào)控，使其表達(dá)增高，促 進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展，在炎癥進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。 2.紅霉素能抑制人支氣管上皮細(xì)胞NF-KB的激活水平，且可能通過 抑制NF一B的激活水平，下調(diào)與炎癥密切相關(guān)的細(xì)胞因子幾一8、 ICAM一1的基因表達(dá)，從而抑制炎癥進(jìn)程，這可能是紅霉素的抗炎作 用機(jī)制之一。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R563.9

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本文編號：2665671