【摘要】： 目的: 建立具有穩(wěn)定性,可重復并且適用于研究煙霧吸入性肺損傷的動物模型。通過觀察煙霧吸入性肺損傷短期時間內(nèi)大鼠的表現(xiàn)、肺組織病理形態(tài)和含水量的改變來評價煙霧吸入肺損傷動物模型的可靠性及其肺損傷的程度。觀察煙霧吸入性肺損傷大鼠肺、腎組織中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE和ACE2表達的時程改變,從而分析ACE和ACE2在煙霧吸入傷后大鼠肺、腎內(nèi)可能的參與機制。 方法: 1.建立煙霧吸入性肺損傷大鼠模型 選用2月齡二級雄性SD(Sprague Dawley)大鼠30只,實驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,體重220±20克。按照序號完全隨機分為正常對照組(N)、致傷1h組(A)、致傷4h組(B)、致傷10h組(C)、致傷24h組(D),每組各6只。參照謝爾凡等第三軍醫(yī)大學西南醫(yī)院燒傷病研究所的方法建立煙霧吸入性肺損傷動物模型,予以吸煙10 min后間隔5 min,共3次。制模完畢立即測量大鼠呼吸頻率,呼吸頻率大于30次/分的可納入試驗。 2.致傷組大鼠肺組織損傷評價 在相應(yīng)時間點(致傷后1h, 4h, 10h及24h)分別脫頸處死對應(yīng)致傷組及正常對照組的大鼠,取其完整的肺組織做好標記,放入-80℃冰箱中凍存。分別取各組大鼠的左上肺及左下肺組織進行肺組織濕/干重測定,HE染色后觀察組織病理學改變,對致傷大鼠的肺組織損傷程度進行評價。 3.大鼠肺、腎組織ACE、ACE2表達的測定 按組別不同在相應(yīng)時間點(致傷后1h, 4h, 10h及24h)脫頸處死對應(yīng)組大鼠以及正常對照組大鼠,取其肺組織的同時暴露腹腔,取出完整腎組織,做好標記,放入-80℃冰箱中待用。取出剩余肺組織及腎組織分為兩部分分別應(yīng)用免疫組化及免疫印記法對各組大鼠肺、腎組織的ACE、ACE2進行半定量測定。 結(jié)果: 1.大鼠的一般情況致傷組大鼠呼吸頻率均大于30次/分,出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、哮鳴音、精神萎靡,行動遲緩等癥狀,均納入后續(xù)實驗。 2.大鼠造模后的評價 致傷組大鼠的肺組織濕/干重均顯著高于正常對照組(P0.05或P0.01)。光鏡下,正常肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁完整,肺間質(zhì)無滲出。致傷組可見:肺內(nèi)小血管及肺泡隔毛細血管擴張充血,肺泡壁破裂,肺泡隔及肺泡腔內(nèi)出血,肺泡塌陷實變,肺間質(zhì)水腫,肺泡隔增寬,小血管周圍、肺泡隔及肺泡腔內(nèi)單核/巨噬細胞增多,肺泡和肺間質(zhì)中有中性粒細胞浸潤。隨著時間進程,損傷加重。在損傷后10小時及24小時的大鼠肺組織較損傷后1小時和4小時在組織充血、中性粒細胞浸潤和間質(zhì)水腫等方面均更嚴重。 3.大鼠肺組織ACE、ACE2表達的變化 免疫組化的結(jié)果顯示ACE、ACE2在正常肺細胞膜上有表達。ACE與ACE2蛋白協(xié)同表達于肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細胞,細支氣管上皮細胞,內(nèi)皮細胞和肺血管平滑肌細胞。ACE2在細支氣管上皮細胞的密度與肺泡上皮和肺血管平滑肌大致相似。 肺內(nèi)ACE與ACE2在傷后不同實驗組的表達不同。致傷后各組與正常對照組相比,肺ACE表達升高(P0.05; N: 1.00, A: 1.37, B: 1.51, C: 1.73, D: 2.04),而且在傷后24h內(nèi)肺ACE表達不斷升高。肺ACE2在致傷后1 h組與正常對照組之間差別沒有統(tǒng)計學意義(A: 1.10, N: 1.00, P0.05),而致傷后4h、10h、24h組與正常對照組之間差別有統(tǒng)計學意義(N: 1.00, A: 1.10, B: 1.38, C: 1.59, D: 1.85, P0.05),因此肺ACE2表達在致傷后1-4 h開始明顯升高。 4.大鼠腎組織ACE、ACE2表達的變化 ACE與ACE2在腎臟中協(xié)同表達于腎小管,尤其是腎小管的刷狀緣,腎小球以及腎臟的細胞質(zhì)中。腎組織ACE表達在正常對照組與傷后1、4、10及24 h組之間的差別均無統(tǒng)計學意義(分別為9%、10%、12%、15%及16%,P0.05),而同樣的,腎組織ACE2在各組中的表達亦無統(tǒng)計學差異(分別為14%、13%、15%、17%及20%,P0.05),因此各組間腎組織ACE及ACE2表達無明顯差別,其蛋白測定結(jié)果與以上大致相同,結(jié)果未顯示。 結(jié)論: 反復多次煙霧吸入可誘導成年大鼠出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、精神萎靡等典型肺損傷表現(xiàn),表現(xiàn)出明顯的肺水腫等急性肺損傷的病理學改變,因此上述方法可制成穩(wěn)定、可靠的煙霧吸入肺損傷動物模型。 煙霧吸入性肺損傷后24小時內(nèi),肺組織ACE的表達從傷后即開始不斷增多,而肺組織ACE2的表達從傷后1～4h左右才開始不斷增多。但是在致傷大鼠的腎組織,ACE與ACE2的表達變化不大。說明ACE、ACE2具有組織特異性,不同于循環(huán)系統(tǒng)的作用,肺組織ACE可作為肺組織內(nèi)皮損傷嚴重程度的標志,肺組織ACE2的保護機制的啟動稍晚于ACE表達的增多,ACE/ACE2的不平衡性存在于煙霧吸入性肺損傷的發(fā)生機制中,在此過程中減少ACE或提高ACE2的表達水平可能對阻斷煙霧吸入性肺損傷的發(fā)生發(fā)展過程有利。
【圖文】：

圖1：RAS反應(yīng)級聯(lián)圖縮寫: AMP, aminopeptidase，氨基肽酶; D-Amp,dipeptidyl-aminopeptidase，二肽基氨肽酶；IRAP, insulin-regulatedaminopeptidase，胰島素調(diào)節(jié)的氨基肽酶; PCP, prolyl-carboxypeptidase，

圖 2：RAS中ACE與ACE2代謝的相同與不同點注：Bk, bradykinin.緩激肽；desArg9-BK:去精氨酸－9－緩激肽；Kallidin:血管舒張素，胰激肽。腎臟RAS對維持水電平衡有重要作用，而且腎臟中存在著較高水平的包
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R563.8;R692

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 史家欣;趙中蘇;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)和應(yīng)激在煙霧吸入性急性肺損傷中的作用[J];西北國防醫(yī)學雜志;2006年03期

2 謝爾凡，楊宗城，王孰，傅瓊芳，魏鉅菊;大鼠煙霧吸入性損傷模型的制作[J];中國實驗動物學雜志;1994年04期

3 張維;王導新;;肺泡上皮細胞與急性肺損傷水腫液清除的研究進展[J];中國呼吸與危重監(jiān)護雜志;2008年01期

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本文編號：2665327