【摘要】： 目的: 建立具有穩(wěn)定性,可重復(fù)并且適用于研究煙霧吸入性肺損傷的動物模型。通過觀察煙霧吸入性肺損傷短期時(shí)間內(nèi)大鼠的表現(xiàn)、肺組織病理形態(tài)和含水量的改變來評價(jià)煙霧吸入肺損傷動物模型的可靠性及其肺損傷的程度。觀察煙霧吸入性肺損傷大鼠肺、腎組織中血管緊張素轉(zhuǎn)換酶ACE和ACE2表達(dá)的時(shí)程改變,從而分析ACE和ACE2在煙霧吸入傷后大鼠肺、腎內(nèi)可能的參與機(jī)制。 方法: 1.建立煙霧吸入性肺損傷大鼠模型 選用2月齡二級雄性SD(Sprague Dawley)大鼠30只,實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,體重220±20克。按照序號完全隨機(jī)分為正常對照組(N)、致傷1h組(A)、致傷4h組(B)、致傷10h組(C)、致傷24h組(D),每組各6只。參照謝爾凡等第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院燒傷病研究所的方法建立煙霧吸入性肺損傷動物模型,予以吸煙10 min后間隔5 min,共3次。制模完畢立即測量大鼠呼吸頻率,呼吸頻率大于30次/分的可納入試驗(yàn)。 2.致傷組大鼠肺組織損傷評價(jià) 在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(致傷后1h, 4h, 10h及24h)分別脫頸處死對應(yīng)致傷組及正常對照組的大鼠,取其完整的肺組織做好標(biāo)記,放入-80℃冰箱中凍存。分別取各組大鼠的左上肺及左下肺組織進(jìn)行肺組織濕/干重測定,HE染色后觀察組織病理學(xué)改變,對致傷大鼠的肺組織損傷程度進(jìn)行評價(jià)。 3.大鼠肺、腎組織ACE、ACE2表達(dá)的測定 按組別不同在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(致傷后1h, 4h, 10h及24h)脫頸處死對應(yīng)組大鼠以及正常對照組大鼠,取其肺組織的同時(shí)暴露腹腔,取出完整腎組織,做好標(biāo)記,放入-80℃冰箱中待用。取出剩余肺組織及腎組織分為兩部分分別應(yīng)用免疫組化及免疫印記法對各組大鼠肺、腎組織的ACE、ACE2進(jìn)行半定量測定。 結(jié)果: 1.大鼠的一般情況致傷組大鼠呼吸頻率均大于30次/分,出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、哮鳴音、精神萎靡,行動遲緩等癥狀,均納入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 2.大鼠造模后的評價(jià) 致傷組大鼠的肺組織濕/干重均顯著高于正常對照組(P0.05或P0.01)。光鏡下,正常肺組織結(jié)構(gòu)清晰,肺泡壁完整,肺間質(zhì)無滲出。致傷組可見:肺內(nèi)小血管及肺泡隔毛細(xì)血管擴(kuò)張充血,肺泡壁破裂,肺泡隔及肺泡腔內(nèi)出血,肺泡塌陷實(shí)變,肺間質(zhì)水腫,肺泡隔增寬,小血管周圍、肺泡隔及肺泡腔內(nèi)單核/巨噬細(xì)胞增多,肺泡和肺間質(zhì)中有中性粒細(xì)胞浸潤。隨著時(shí)間進(jìn)程,損傷加重。在損傷后10小時(shí)及24小時(shí)的大鼠肺組織較損傷后1小時(shí)和4小時(shí)在組織充血、中性粒細(xì)胞浸潤和間質(zhì)水腫等方面均更嚴(yán)重。 3.大鼠肺組織ACE、ACE2表達(dá)的變化 免疫組化的結(jié)果顯示ACE、ACE2在正常肺細(xì)胞膜上有表達(dá)。ACE與ACE2蛋白協(xié)同表達(dá)于肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細(xì)胞,細(xì)支氣管上皮細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞和肺血管平滑肌細(xì)胞。ACE2在細(xì)支氣管上皮細(xì)胞的密度與肺泡上皮和肺血管平滑肌大致相似。 肺內(nèi)ACE與ACE2在傷后不同實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)不同。致傷后各組與正常對照組相比,肺ACE表達(dá)升高(P0.05; N: 1.00, A: 1.37, B: 1.51, C: 1.73, D: 2.04),而且在傷后24h內(nèi)肺ACE表達(dá)不斷升高。肺ACE2在致傷后1 h組與正常對照組之間差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(A: 1.10, N: 1.00, P0.05),而致傷后4h、10h、24h組與正常對照組之間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(N: 1.00, A: 1.10, B: 1.38, C: 1.59, D: 1.85, P0.05),因此肺ACE2表達(dá)在致傷后1-4 h開始明顯升高。 4.大鼠腎組織ACE、ACE2表達(dá)的變化 ACE與ACE2在腎臟中協(xié)同表達(dá)于腎小管,尤其是腎小管的刷狀緣,腎小球以及腎臟的細(xì)胞質(zhì)中。腎組織ACE表達(dá)在正常對照組與傷后1、4、10及24 h組之間的差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(分別為9%、10%、12%、15%及16%,P0.05),而同樣的,腎組織ACE2在各組中的表達(dá)亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(分別為14%、13%、15%、17%及20%,P0.05),因此各組間腎組織ACE及ACE2表達(dá)無明顯差別,其蛋白測定結(jié)果與以上大致相同,結(jié)果未顯示。 結(jié)論: 反復(fù)多次煙霧吸入可誘導(dǎo)成年大鼠出現(xiàn)呼吸淺快、張口呼吸、精神萎靡等典型肺損傷表現(xiàn),表現(xiàn)出明顯的肺水腫等急性肺損傷的病理學(xué)改變,因此上述方法可制成穩(wěn)定、可靠的煙霧吸入肺損傷動物模型。 煙霧吸入性肺損傷后24小時(shí)內(nèi),肺組織ACE的表達(dá)從傷后即開始不斷增多,而肺組織ACE2的表達(dá)從傷后1～4h左右才開始不斷增多。但是在致傷大鼠的腎組織,ACE與ACE2的表達(dá)變化不大。說明ACE、ACE2具有組織特異性,不同于循環(huán)系統(tǒng)的作用,肺組織ACE可作為肺組織內(nèi)皮損傷嚴(yán)重程度的標(biāo)志,肺組織ACE2的保護(hù)機(jī)制的啟動稍晚于ACE表達(dá)的增多,ACE/ACE2的不平衡性存在于煙霧吸入性肺損傷的發(fā)生機(jī)制中,在此過程中減少ACE或提高ACE2的表達(dá)水平可能對阻斷煙霧吸入性肺損傷的發(fā)生發(fā)展過程有利。
【圖文】：

圖1：RAS反應(yīng)級聯(lián)圖縮寫: AMP, aminopeptidase，氨基肽酶; D-Amp,dipeptidyl-aminopeptidase，二肽基氨肽酶；IRAP, insulin-regulatedaminopeptidase，胰島素調(diào)節(jié)的氨基肽酶; PCP, prolyl-carboxypeptidase，

圖 2：RAS中ACE與ACE2代謝的相同與不同點(diǎn)注：Bk, bradykinin.緩激肽；desArg9-BK:去精氨酸－9－緩激肽；Kallidin:血管舒張素，胰激肽。腎臟RAS對維持水電平衡有重要作用，而且腎臟中存在著較高水平的包
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R563.8;R692

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 史家欣;趙中蘇;;腎素-血管緊張素系統(tǒng)和應(yīng)激在煙霧吸入性急性肺損傷中的作用[J];西北國防醫(yī)學(xué)雜志;2006年03期

2 謝爾凡，楊宗城，王孰，傅瓊芳，魏鉅菊;大鼠煙霧吸入性損傷模型的制作[J];中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)雜志;1994年04期

3 張維;王導(dǎo)新;;肺泡上皮細(xì)胞與急性肺損傷水腫液清除的研究進(jìn)展[J];中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2008年01期

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本文編號：2665327