發(fā)布時間：2020-04-15 11:20

【摘要】： 肺纖維化是一組由多種病因所引起的間質(zhì)性肺疾病,是許多慢性肺病的共同結(jié)局。其病理特點(diǎn)包括肺泡上皮損傷、肺成纖維細(xì)胞積聚以及細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積,最終導(dǎo)致不可逆性損傷。肺纖維化病因復(fù)雜、發(fā)病機(jī)制尚不明確。近年研究表明,免疫機(jī)制參與了肺纖維化的發(fā)病。主要組織相容性抗原(MHC)II類分子是抗原呈遞細(xì)胞將外源性抗原提呈給CD4+Th細(xì)胞的必要載體,同時影響著T細(xì)胞的選擇、免疫耐受的誘導(dǎo)及抗體產(chǎn)生等,是機(jī)體免疫反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。II類反式激活蛋白(CIITA)是MHC II類分子表達(dá)的限速因子,人白細(xì)胞抗原(HLA)-DR是經(jīng)典的MHC II類抗原。MHC II類抗原在靶器官的異常表達(dá)是組織特異性炎癥免疫性疾病的重要標(biāo)記。研究表明,MHC II類分子參與了肝、腎纖維化的發(fā)病過程。MHC II類分子參與肝臟纖維化的機(jī)制可能是MHC II類分子相關(guān)的抗原呈遞導(dǎo)致B細(xì)胞的分化,由此產(chǎn)生高免疫球蛋白血癥;而在腎臟則認(rèn)為與MHC II類分子的抗原呈遞作用刺激初始T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答,Th1/Th2極化失衡有關(guān)。MHC II類分子與肺纖維化之間的關(guān)系目前尚不清楚。 目的:在博來霉素誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型上,觀察肺組織MHC II類分子及其上游調(diào)控因子CIITA表達(dá)水平的變化,臨床實(shí)驗(yàn)觀察HLA-DR在特發(fā)性肺纖維化的表達(dá),探討MHC II類分子在肺纖維化發(fā)病中可能的病理生理意義。 方法:(1)雄性Wistar大鼠20只,隨機(jī)分為對照組、肺纖維化組(經(jīng)氣管內(nèi)注入BLMA5 5mg/kg),分別于造模后第7天、28天取肺組織行HE染色、Masson染色,并依據(jù)szapiel方法對肺部病變進(jìn)行半定量評分;生化方法檢測肺組織羥脯氨酸含量;(2)免疫組化染色觀察大鼠肺組織MHC II類分子表達(dá),實(shí)時定量PCR技術(shù)測定肺組織總CIITA及I型、III型、IV型CIITAmRNA和TGF-β1mRNA表達(dá);(3)ELISA法檢測大鼠肺泡灌洗液中IFN-γ及IL-4水平變化;(4)收集肺活檢的特發(fā)性肺纖維化(IPF)患者肺組織石蠟標(biāo)本10例,免疫組化染色觀察肺組織HLA-DR的表達(dá)情況。 結(jié)果:(1)氣管內(nèi)給予博萊霉素后第7天及第28天,大鼠肺組織MHC II陽性細(xì)胞明顯增多(P0.05, P0.01),第28天較第7天增多(P0.05);(2)第7天時,纖維化組大鼠肺組織總CIITA較對照組升高170.4%(P0.05),I型CIITA較對照組升高258.8%(P0.05),IV型CIITA較對照組降低87.2%(P0.01);第28天時,纖維化組大鼠肺組織總CIITA較對照組升高98.6%(P0.05),I型CIITA較對照組升高137.1%(P0.05),IV型CIITA仍較對照組低,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義;纖維化組肺組織IV型CIITA在第28天時較第7天時升高667.3%(P0.01);(3)纖維化組肺組織第7天TGF-β1mRNA水平升高,達(dá)對照組的8倍多(P0.01),第28天TGF-β1mRNA較第7天略有下降,但仍顯著高于對照組(P0.01),約為對照組的4倍;(4)纖維化組大鼠第7天及第28天BALF中IFN-γ含量均較對照組下降(均P0.01),而同時期BALF中IL-4含量均較對照組升高(均P0.01);(5)IPF肺組織細(xì)支氣管肺泡上皮HLA-DR表達(dá)上調(diào),與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(Z=-3.002, P=0.001)。 結(jié)論:肺組織MHCII/CIITA體系參與了博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化的病理生理過程,這可能是通過調(diào)節(jié)肺組織局部的Th1/Th2平衡實(shí)現(xiàn)的;纖維化肺組織上皮細(xì)胞異常表達(dá)MHC II類抗原,推測這可能使這些上皮組織更易遭受MHC II類分子介導(dǎo)的免疫損傷,導(dǎo)致上皮損傷及異常修復(fù)的持續(xù)存在,最終導(dǎo)致肺纖維化形成并持續(xù)進(jìn)展。
【圖文】：

(二) 病理改變：1. 對照組：光鏡下HE 染色見支氣管粘膜完整、無脫落，肺泡腔內(nèi)無分泌物，肺泡壁結(jié)構(gòu)完整，無炎性細(xì)胞浸潤（圖1①）；Masson染色肺組織肺泡壁未見纖維化（圖1②）。2. 纖維化組：光鏡下第 7 天 HE 染色見支氣管壁明顯炎癥浸潤，不同大小支氣管均有炎癥，粘膜脫落，肌層明顯增厚，支氣管周圍肺組織炎癥明顯，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡間隔顯著增厚，肺泡腔內(nèi)可見出血，明顯炎性細(xì)胞浸潤，并見纖維蛋白滲出，肺實(shí)變，未見明顯的纖維化（圖 1③），Masson 染色肺泡壁未見藍(lán)色（圖 1④）；第 28 天肺組織彌漫性炎癥已明顯減輕（圖1⑤），僅見少量炎癥細(xì)胞浸潤，，但肺泡結(jié)構(gòu)進(jìn)一步破壞、結(jié)構(gòu)紊亂，纖維組織成條索樣、斑片狀分布，可見纖維結(jié)節(jié)形成（圖 1⑥）。(三) 形態(tài)學(xué)半定量評分：肺組織切片 HE 染色顯示大鼠肺組織從注入 BLM 后第 7 天出現(xiàn)明顯炎癥

圖8 TGF-β1 熒光擴(kuò)增圖及標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 8 Real time PCR amplification kinetics curve and standard curve of TGF-β1表 6 大鼠肺內(nèi)灌注博來霉素 TGF-β1 mRNA 表達(dá)變化趨勢(x ±S)Table 6 Real time PCR results of the mRNA expression of TGF-β1 (x ±S)Groups 7thday 28thdayC(n=4) 0.73±0.39 1.25±0.49F(n=6) 6.46±1.83* 5.29±1.91**P <0.01 vs control group圖9 大鼠肺組織TGF-β1 mRNA表達(dá)的實(shí)時定量PCR結(jié)果（x ±S）**9cintcontrol fibrosis
【學(xué)位授予單位】：北京大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R563.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫桂芝,周同,吳開胤,李曉,陳玉英,胡慶沈,張冬青,陳楠;樹突狀細(xì)胞在大鼠單側(cè)輸尿管梗阻后腎組織中的分布與作用[J];上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2004年03期

2 周同,吳開胤,孫桂芝,張玉梅,張冬青,胡慶沈,陳玉英,陳楠;樹突狀細(xì)胞在5/6腎切除大鼠中分布及與腎間質(zhì)纖維化的關(guān)系[J];上海醫(yī)學(xué);2004年08期

本文編號：2628494