【摘要】：支氣管哮喘是由多種細(xì)胞和細(xì)胞組分參與的氣道慢性變態(tài)反應(yīng)性炎癥,引起氣道高反應(yīng)性,導(dǎo)致可逆性氣道阻塞性疾病。在哮喘的發(fā)病機(jī)制中,其細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)十分復(fù)雜。任何對細(xì)胞因子或者網(wǎng)絡(luò)中的某一環(huán)節(jié)產(chǎn)生影響的藥物或干預(yù)措施可影響哮喘的嚴(yán)重程度及預(yù)后。呼吸道病毒感染是年幼兒童急性喘息發(fā)作最常見的誘因,而細(xì)菌脂多糖可能是保護(hù)因素。 目的: 1.建立哮喘模型,從肺組織病理改變、高遷移率族蛋白B-1(HMGB1)等細(xì)胞因子的變化研究哮喘的免疫發(fā)病機(jī)制,探討吸入性糖皮質(zhì)激素和白三烯受體拮抗劑對其影響,評價兩者的抗炎效果。 2.低劑量照射對機(jī)體的效應(yīng)隨劑量不同而不同,研究低劑量照射對卵白蛋白(OVA)激發(fā)的哮喘小鼠肺組織病理、HMGB1等細(xì)胞因子的影響,探討低劑量照射對哮喘小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。 3.檢測不同病原感染后支氣管肺炎嬰幼兒外周血HMGB1mRNA表達(dá)水平及CRP、WBC計(jì)數(shù)、免疫球蛋白、T細(xì)胞亞群,分析其相關(guān)性,研究HMGB1在支氣管肺炎的臨床意義。 方法: 1.使用OVA建立小鼠過敏性哮喘模型,給予吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德和白三烯受體拮抗劑孟魯斯特進(jìn)行干預(yù),逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)法(RT-PCR)檢測各組小鼠肺組織HMGB1 mRNA的表達(dá),免疫組化標(biāo)記肺組織HMGB1、IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4蛋白的表達(dá)。 2.OVA致敏后的小鼠給予低劑量X射線全身照射(20mGy-400mGy),再激發(fā)建立哮喘模型,RT-PCR檢測各組肺組織小鼠HMGB1、TNF-αmRNA的表達(dá),免疫組化標(biāo)記肺組織IL-1β、IL-6、IL-10蛋白的表達(dá)。 3.檢測不同病原感染后支氣管肺炎患兒外周血的13個指標(biāo):RT-PCR檢測外周血HMGB1mRNA的表達(dá),流式細(xì)胞儀檢測外周血T細(xì)胞亞群,間接酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測外周血免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM),夾層酶聯(lián)免疫分析C-反應(yīng)蛋白(CRP),用細(xì)胞計(jì)數(shù)器進(jìn)行白細(xì)胞(WBC)計(jì)數(shù)。分析13個指標(biāo)相關(guān)性及預(yù)測病原菌95%可信區(qū)間曲線下面積。 結(jié)果 1.吸入性糖皮質(zhì)激素和白三烯受體拮抗劑治療后哮喘小鼠肺組織炎癥較哮喘組減輕。哮喘組肺組織HMGB1的表達(dá)較對照組增高,第二周出現(xiàn)高峰。吸入性糖皮質(zhì)激素治療后HMGB1的表達(dá)第一周出現(xiàn)高峰,然后逐漸減少;白三烯受體拮抗劑治療后HMGB1的表達(dá)第二周出現(xiàn)高峰。兩者不同程度地減少了IL-1β、IL-6的表達(dá),增加IL-10、TLR4的表達(dá)。 2 .在OVA激發(fā)小鼠哮喘模型組增加了低劑量X射線全身照射(20mGy-400mGy)后,HE染色示OVA+70mGy組肺組織炎癥較輕。OVA+50mGy和OVA+70mGy組與OVA+20mGy組相比,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)逐漸增強(qiáng),HMGB1的表達(dá)降低,OVA+100mGy、OVA+200mGy和OVA+400mGy組的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)下降,HMGB1的表達(dá)增強(qiáng)。 3.支氣管肺炎患兒外周血HMGB1的表達(dá):以1.0256為切點(diǎn),HMGB1對診斷是混合感染還是單一感染的靈敏度為88.0% ,特異度為67.9%;以0.7472為切點(diǎn),HMGB1對診斷是細(xì)菌感染還是病毒感染的靈敏度為73.1% ,特異度為11.1%。HMGB1與WBC、CRP、IgM、CD3+、CD4+CD25+細(xì)胞之間的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。病毒感染組HMGB1的表達(dá)低于健康對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),細(xì)菌感染組稍高于健康對照組。 結(jié)論: 1.HMGB1參與了哮喘的氣道炎癥反應(yīng),吸入性糖皮質(zhì)激素布地奈德對細(xì)胞因子HMGB1、IL-1β、IL-6、IL-10、TLR4的影響較白三烯受體拮抗劑孟魯司特明顯,推測吸入性糖皮質(zhì)激素抗過敏性炎癥作用優(yōu)于白三烯受體拮抗劑。 2.低劑量照射對哮喘小鼠的效應(yīng)隨劑量不同而不同,50-70mGy低劑量誘導(dǎo)興奮效應(yīng)的產(chǎn)生,100-400mGy導(dǎo)致免疫功能的抑制和組織細(xì)胞的損傷效應(yīng)。 3. HMGB1可作為兒童支氣管肺炎混合感染的有效指標(biāo),如HMGB1在外周血單個核細(xì)胞的表達(dá)小于1.0256可以排除混合感染。HMGB1小于1.0256同時WBC≥13×10~9/L單一細(xì)菌性肺炎的陽性預(yù)測價值是92.3%。適量的HMGB1表達(dá)增高可能是哮喘的保護(hù)因子。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：R562.25

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2614095