本文關(guān)鍵詞：Derlin-1在RLE-6TN細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)性凋亡中的作用研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探索抑制Derlin-1表達(dá)是否增加香煙煙霧(CSE)誘導(dǎo)的RLE-6TN細(xì)胞凋亡,以及其作用機(jī)理是否與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)機(jī)制相關(guān),從而初步探討Derlin-1在香煙煙霧誘導(dǎo)的RLE-6TN細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)性凋亡中作用。方法：RLE-6TN細(xì)胞培養(yǎng)；用攜帶Derlin-1干擾序列的siRNA侵染RLE-6TN細(xì)胞沉默Derlin-1基因,用加入等量空白質(zhì)粒組作為對(duì)照；制備CSE；用10%CSE處理對(duì)照組、沉默組RLE-6TN細(xì)胞0h、3h、6h、12h、24h后：流式細(xì)胞儀檢測(cè)干預(yù)前后細(xì)胞凋亡率；免疫熒光技術(shù)、Western blot、Realtime-PCR技術(shù)檢測(cè)干預(yù)前后Derlin-1、P-IRE1、 Hrd1、P-JNK、CHOP蛋白及mRNA的表達(dá)；結(jié)果：1.流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡：RLE-6TN細(xì)胞在10%CSE處理0h、3h、6h、12h、24h后,大鼠肺Ⅱ型上皮細(xì)胞在對(duì)照組早期凋亡率分別為：5.8%、7.1%、12.2%、14.5%、22.1%,沉默組早期凋亡率分別為為15.4%、15.7%、33%、43.3%、48.9%,對(duì)照組與沉默組細(xì)胞隨時(shí)間延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢(shì),沉默組細(xì)胞凋亡在早期和晚期都明顯高于對(duì)照組,差異具有顯著性(P0.05)。2.免疫熒光技術(shù)檢測(cè)Derlin-1蛋白質(zhì)熒光表達(dá)顯示：自然生長(zhǎng)的RLE-6TN細(xì)胞經(jīng)CSE處理后,Derlin-1蛋白質(zhì)表達(dá)水平(0.117±0.011)高于對(duì)照組(0.095±0.005),差異具有顯著性(P0.05)；Derlin-1沉默組RLE-6TN細(xì)胞經(jīng)CSE處理后,Derlin-1蛋白表達(dá)水平(0.064±0.003)高于對(duì)照組(0.014±0.001),差異具有顯著性(P0.05)。 Derlin-1干擾前后CSE處理組Derlin-1蛋白表達(dá)水平均增加。3. Western blot檢測(cè)Derlin-1蛋白表達(dá)顯示：對(duì)照組RLE-6TN細(xì)胞在CSE處理Oh、3h、6h、12h、24h后Derlin-1表達(dá)分別為(1.76±0.19、1.97±0.223.75±0.23.4.85±0.70、1.01±0.11),Derlin-1蛋白在12h表達(dá)最高,24h組表達(dá)降低,不同時(shí)間時(shí)間點(diǎn)組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P均0.05)。沉默組Derlin-1蛋白表達(dá)分別為(0.18±0.05、0.34±0.08、0.49±0.07、0.66±0.09、0.89±0.12), Derlin-1在CSE作用早期0h、3h、6h表達(dá)無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P0.05),晚期12h、24h組表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；與對(duì)照組比沉默組Derlin-1蛋白表達(dá)明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；RT-PCR結(jié)果顯示Derlin-1 mRNA檢測(cè)結(jié)果與Westen blot結(jié)果一致。4. Western blot檢測(cè)ERS通路相關(guān)因子結(jié)果顯示：對(duì)照組總IRE1,P-IRE1、Hrd1、總JNK、P-JNK、CHOP蛋白在CSE作用Oh、3h、6h、12h、24h組的表達(dá)別為(15.08±2、17.42±1.44、15.38±2.02、17.24±1.24、14.18±1.14；0.95±0.01、1.62±0.02、2.26±0.03、7.13±0.31、9.12±0.20;0.21±0.01、0.69±0.08、1.21±0.23、1.70±0.34、2.18±0.40;0.97±0.07、0.94±0.11、1.11±0.06、1.05±0.04、1.12±0.09：0.29±0.02、0.66±0.02、0.63±0.01、0.60±0.11、0.71±0.15;1.32±0.40、2.92±0.50、4.53±0.60、10.54±1.04、9.01±1.4),在總IRE、總JNK的表達(dá)不同時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯差異(P0.05), P-IRE1、Hrd1、P-JNK、CHOP著CSE作用時(shí)間延長(zhǎng)呈遞增趨勢(shì),不同時(shí)間時(shí)間點(diǎn)組之間兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(P均0.05)。沉默組總IRE1、P-IRE1、Hrd1、總JNK、P-JNK、CHOP蛋白表達(dá)隨CSE作用不同時(shí)間分別為(1.67±0.14、1.62±0.21、1.74±0.45、1.78±0.39、1.69±0.25;0.33±0.02、0.48±0.02、0.84±0.04、0.36±0.01、0.32±0.03;0.32±0.01、0.38±0.03、0.42±0.04、0.48±0.05、0.56±0.07;0.87±0.24、0.65±0.031、0.85±0.15、0.82±0.033、0.872±0.19;0.22±0.01、0.46±0.07、0.64±0.08、0.24±0.03、0.28±0.04;0.41±0.06、0.80±0.08、1.70±0.19、1.99±0.21、1.60±0.19),在總IRE1、JNK蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化,各時(shí)間點(diǎn)組之間統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)明顯差異(P0.05)；沉默Derlin-1基因后P-IRE1、P-JNK、CHOP早期表達(dá)升高,晚期逐漸下降,P-IRE1、P-JNK在3h、6h組與其他組之間兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而在0h、12h、24h組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Hrdl在CSE作用早期0h、3h、6h表達(dá)無(wú)明顯變化,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P0.05),晚期12h、24h組表達(dá)升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),沉默組在3h,6h組明顯低于對(duì)照組,組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CHOP在3h、6h、12h時(shí)間點(diǎn)表達(dá)同其他各時(shí)間點(diǎn)組之間之間兩兩比較,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在0h、24h之間無(wú)明顯差異(P0.05)。5. RT-PCR結(jié)果顯示：Derlin-1沉默組IRE1、Hrd1、JNK、CHOP mRNA隨時(shí)間表達(dá)變化同Westen blot結(jié)果基本一致。結(jié)論：CSE能夠誘導(dǎo)AECII發(fā)生ERS并進(jìn)一步介導(dǎo)ERAD, Derlin-1基因沉默下調(diào)ERAD作用,致使CSE誘導(dǎo)的Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞凋亡增加,研究結(jié)果提示Derlin-1可能對(duì)吸煙所致RLE-6TN細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激性凋亡具有保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：慢性阻塞性肺疾病 Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞 Derlin-1 香煙煙霧提取物 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激 凋亡 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性降解
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 摘要4-8
• Abstract8-14
• 主要縮略詞14-16
• 前言16-18
• 實(shí)驗(yàn)材料18-20
• 實(shí)驗(yàn)方法20-28
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-34
• 討論34-40
• 結(jié)論40-42
• 參考文獻(xiàn)42-46
• 附圖46-54
• 綜述54-66
• 參考文獻(xiàn)62-66
• 碩士期間撰寫論文66-68
• 致謝68

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2 宋今丹,Chen Lan Bo,劉冬杰;應(yīng)用高錳酸鉀固定劑對(duì)整裝培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)的固定[J];中國(guó)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1986年04期

3 馬云濤;范學(xué)文;趙巍;;胸水肺癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的激光共聚焦顯微鏡研究[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;2010年06期

4 溫靜靜;謝汝佳;韓冰;楊婷;錢程;楊勤;;肝纖維化大鼠肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)及GRP78表達(dá)的研究[J];中國(guó)病理生理雜志;2011年11期

5 徐斌;李樂慧;楊天瑤;鄧宇;王瀾霖;岳燁;徐兆發(fā);;錳對(duì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號(hào)分子的影響[J];實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué);2013年10期

6 王曉文;吳彥瑞;靳雁斌;馬鑫;吳燕;范文紅;范明;;外源表達(dá)人CPNE5誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2007年06期

7 吳曄;缺氧缺血后腦細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體Ca~(2+)濃度變化[J];新生兒科雜志;1997年04期

8 張亞樓;劉開泰;;氟化鈉誘導(dǎo)成骨細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激特征[J];環(huán)境與健康雜志;2010年03期

9 岳劍寧,孔凡元,吳若芬,劉菊年,潘月英;應(yīng)用LSCM對(duì)腦脊液淋巴瘤細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的研究[J];寧夏醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

10 李玄;賀曉麗;童元峰;吳松;畢明剛;;6'-羥基爵床素A對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及胞內(nèi)Ca~(2+)的影響[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志;2013年13期

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4 張開陽(yáng);李祥;謝明;王春燕;唐小卿;;硫化氫通過(guò)上調(diào)SIRT-1拮抗甲醛誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[A];湖南省生理科學(xué)會(huì)2013年度學(xué)術(shù)年會(huì)論文摘要匯編[C];2013年

5 鄔姍;陸付耳;董慧;趙炎;徐麗君;楊明煒;王開富;鄒欣;;小檗堿對(duì)衣霉素誘導(dǎo)的MIN6細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的干預(yù)作用[A];內(nèi)分泌代謝病中西醫(yī)結(jié)合研究——臨床與基礎(chǔ)[C];2010年

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7 宋今丹;王明武;孫寶棟;李艷春;張福會(huì);王蕓慶;;侵襲性大腸癌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第七次會(huì)議論文摘要匯編[C];1999年

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1 錢錚;細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)正常釋放鈣離子的機(jī)制被發(fā)現(xiàn)[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2007年

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1 孫銀輝;Derlin-1在RLE-6TN細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)性凋亡中的作用研究[D];南華大學(xué);2015年

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本文編號(hào)：258966