【摘要】：目的探討異鉤藤堿對血小板源性生長因子BB(PDGF-BB)誘導(dǎo)的肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)增殖的影響及其機(jī)制。方法建立PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖模型,通過MTT比色法和臺盼藍(lán)拒染法檢測異鉤藤堿對PASMCs增殖的影響及細(xì)胞毒性,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變化,Western blotting檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)及血小板源性生長因子受體β(PDGF-Rβ)信號通路蛋白表達(dá)及磷酸化的影響。結(jié)果與正常對照相比,加入PDGF-BB(20 ng/m L)培養(yǎng)24 h,可促進(jìn)PASM Cs增殖約2.5倍;異鉤藤堿劑量依賴性地抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的PASM Cs增殖;異鉤藤堿(25μmol/L)明顯抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的S期細(xì)胞比例升高;Western blotting結(jié)果顯示,異鉤藤堿可抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的cyclin D1、CDK6的表達(dá)和p27kip1的降解,下調(diào)PDGF-Rβ及其下游信號分子AKT、糖原合成激酶(GSK)3β的磷酸化。結(jié)論異鉤藤堿通過將細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期來抑制PDGF-BB誘導(dǎo)的PASMCs增殖,其機(jī)制可能為通過抑制PDGF-Rβ及其下游信號通路的磷酸化、進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的合成和降解來實(shí)現(xiàn)。
【圖文】：

in，刮勺收集蛋白，BCA法測定提取蛋白濃度。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳后，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%牛血清白蛋白室溫封閉1h后，加入相應(yīng)的抗PDGF-Ｒβ、P-PDGF-Ｒβ、AKT、P-AKT、GSK3β、P-GSK3β、cyclinD1、CDK6、p27kip1抗體4℃過夜，TBST洗膜后，加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的IgG抗體，室溫作用1h，TBST洗膜后，，滴加ECL發(fā)光試劑檢測蛋白。1．3統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS16．0軟件，數(shù)據(jù)以xs

本文編號：2559008