發(fā)布時(shí)間：2019-10-22 15:18

【摘要】：由結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, MTB)感染引起的肺結(jié)核(Pulmonary tuberculosis, PTB)是世界范圍內(nèi)的重大流行病和傳染病�？菇Y(jié)核常規(guī)有效藥物異煙肼(INH)、利福平(RFP)等對耐多藥(Multiple drug resistant-tuberculosis, MDR-TB)及廣泛耐藥結(jié)核的治療是無效的,對此類肺結(jié)核的早期、快速和靈敏診斷有利于臨床采取有效、合理的治療藥物與方案。利用基因芯片技術(shù)對耐多藥結(jié)核的診斷具有快速,靈敏和高通量等許多優(yōu)點(diǎn)。 采用羅氏固體培養(yǎng)法對結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)；利用博奧公司生產(chǎn)的晶芯⑧結(jié)核分枝桿菌耐藥檢測試劑盒和相關(guān)儀器通過核酸提取、PCR擴(kuò)增、芯片雜交與清洗和芯片掃描,分別對結(jié)核分枝桿菌的INH和RFP耐藥相關(guān)基因KatG315、inhA-15和rpoB常見突變位點(diǎn)進(jìn)行檢測和藥敏判斷；通過抽提結(jié)核分枝桿菌基因組DNA,采用PCR擴(kuò)增KatG和rpoB基因片段,核酸電泳鑒定后進(jìn)行純化和測序；將基因芯片檢測的耐藥情況與傳統(tǒng)藥敏試驗(yàn)結(jié)果的一致性進(jìn)行分析,并將基因芯片法檢測的位點(diǎn)突變情況與DNA測序結(jié)果進(jìn)行比較分析。 基因芯片法的研究結(jié)果表明：(1)相對于inhA-15突變(C→T),蘇州地區(qū)結(jié)核分枝桿菌INH耐藥相關(guān)基因KatG主要突變形式為(AGC→ACC) Ser→Thr(S315T),占耐藥突變總比例的96.3%；以羅氏固體培養(yǎng)法獲得的INH耐藥結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),基因芯片法對菌株INH藥敏檢測的準(zhǔn)確率為73.8%；以DNA測序法結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),基因芯片法對KatG315突變型檢測的準(zhǔn)確率為88.9%。(2)蘇州地區(qū)結(jié)核分枝桿菌RFP耐藥相關(guān)基因rpoB主要突變形式為RRDR-531(TCG→TTG) Ser→Leu為主要突變形式,占檢測標(biāo)本rpoB-RRDR相關(guān)位點(diǎn)總突變的76.9%；以羅氏固體培養(yǎng)法獲得的RFP耐藥結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),基因芯片法對菌株藥敏檢測的準(zhǔn)確率為93.3%；以DNA測序結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn),基因芯片法對rpoB基因的RRDR相關(guān)位點(diǎn)的檢測的準(zhǔn)確率為82.4%。上述研究獲得部分的結(jié)果已整理成文,并在投稿中。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R521

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本文編號(hào)：2551695