【摘要】：目的： 建立大鼠慢性哮喘模型的基礎(chǔ)上觀察口服卡介苗多糖核酸(BCG-PSN)干預(yù)后哮喘大鼠氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性、脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目、外周血清中工L-4和IFN-γ含量及腸粘膜sIgA含量的變化,探討口服BCG-PSN防治哮喘的可行性及免疫調(diào)節(jié)作用。 方法： 1.取雄性成年SD大鼠(體重160±20g)50只,分為五組：對(duì)照(Control)組、模型(Model)組、口服卡介苗(BCG)組、口服BCG-PSN組即BCG-PSN(A)組和肌注BCG-PSN組即BCG-PSN(B)組,各組10只。2.除Control組以外的其余四組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)第1天和第15天腹腔注射10%OVA混合液lml(含OVA100mg、氫氧化鋁100mg)致敏。第21天后再進(jìn)行激發(fā),2%OVA2ml泵霧化吸入,每周3次,激發(fā)連續(xù)9周,構(gòu)建大鼠慢性哮喘模型,Control組致敏和激發(fā)均以生理鹽水代替。 3.藥物干預(yù)從實(shí)驗(yàn)的第1天起開(kāi)始,BCG組予BCG灌胃(50ug／次,2次／周,12周)；BCG-PSN (A)組予BCG-PSN灌胃(250ug/kg·次,2次／周,12周)；BCG-PSN(B)組予BCG-PSN肌注(45ug/kg·次,2次／周,12周)。 4.末次激發(fā)24小時(shí)內(nèi)麻醉動(dòng)物,氣管插管后行氣道高反應(yīng)性(airway hyper responsiveness,AHR)檢測(cè)；制備脾細(xì)胞懸液,通過(guò)流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目變化,了解BCG-PSN對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響；采用ELISA法檢測(cè)外周血清中IFN-γ和工L-4及腸道粘膜sIgA的含量,明確口服BCG-PSN對(duì)TH1/TH2細(xì)胞因子平衡及局部黏膜免疫的調(diào)節(jié)情況；腹主動(dòng)脈放血處死大鼠,取各組動(dòng)物BALF測(cè)定炎性細(xì)胞總數(shù)和EOS百分比,并行肺臟組織病理學(xué)檢查。 結(jié)果： 1.大鼠慢性哮喘模型的建立：與Control組相比,在激發(fā)過(guò)程中,Model組大鼠逐漸出現(xiàn)煩躁不安、呼吸急促、撓鼻、發(fā)紺、活動(dòng)進(jìn)食減少或俯臥不動(dòng)、出現(xiàn)豎毛、毛發(fā)失去光澤甚至脫毛、反應(yīng)遲滯等哮喘樣表現(xiàn)；同時(shí)Model組大鼠動(dòng)物氣道高反應(yīng)性測(cè)定顯示氣道阻力明顯增高,與Control組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),且肺組織病理顯示：Model組氣道周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),支氣管管壁增厚、管腔狹窄,氣道上皮細(xì)胞脫落,粘液分泌明顯增加。BALF細(xì)胞學(xué)顯示炎性細(xì)胞總數(shù)及EOS百分比與Control組比較明顯增加(P0.05),提示哮喘大鼠模型復(fù)制成功。 2.各組大鼠氣道高反應(yīng)性值變化：各組大鼠用鹽酸組胺激發(fā),鹽酸組胺濃度從0.32mg/ml起,Model組、BCG組、BCG-PSN(A)組和BCG-PSN(B)組氣道阻力均明顯高于Control組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而組胺濃度從0.64mg/ml起,BCG-PSN(A)組氣道阻力明顯低于Model組(P0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但明顯高于BCG-PSN(B)組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而與BCG組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 3.各組大鼠病理組織學(xué)變化：Model組氣道周圍炎癥改變明顯、支氣管管壁增厚、管腔狹窄,氣道上皮細(xì)胞脫落,粘液分泌明顯增加。BCG-PSN(A)組、BCG組及BCG-PSN(B)組與Model組相比,氣道周圍炎癥明顯減輕,氣道周圍炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道分泌物減少、支氣管壁增厚及上皮細(xì)胞脫落現(xiàn)象明顯改善。 4. BALF細(xì)胞學(xué)變化：BCG-PSN(A)組炎性細(xì)胞總數(shù)及EOS百分比明顯低于Model組(P＜0.05),但明顯高于BCG-PSN(B)組(P＜0.05),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而與BCG組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 5.外周血清中工FN-γ、IL-4含量：致敏、激發(fā)后Model組血清中IL-4的含量較Control組明顯升高(P0.05),IFN-γ的含量較Control組顯著降低(P0.05)；BCG-PSN(A)組工L-4含量明顯低于Model組(P0.05),而IFN-γ的含量明顯高于Model組(P0.05)；BCG-PSN(A)組IFN-γ含量明顯低于BCG-PSN(B)組(P0.05),而與BCG組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而B(niǎo)CG-PSN(A)組、BCG組與BCG-PSN(B)組三者之間血清IL-4的含量?jī)蓛杀容^差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 6.脾臟CD4+CD25+Treg/CD4+T細(xì)胞百分比：致敏、激發(fā)后Model組脾臟CD4+CD25-Treg/CD4+T細(xì)胞百分比較Control組明顯降低(P＜0.05)；BCG-PSN(A)組明顯高于Model組(P＞0.05),但顯著低于BCG-PSN(A)組(P＜0.05),與BCG組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 7.腸粘膜sIgA含量：Control組、Model組、BCG組、BCG-PSN(A)組和BCG-PSN(B)組相互之間sIgA含量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.OVA致敏,激發(fā)能夠成功構(gòu)建大鼠慢性哮喘模型。 2.口服BCG-PSN能夠降低哮喘大鼠氣道高反應(yīng)性,部分抑制氣道炎癥、抑制EOS的募集。 3.口服BCG-PSN能升高血清中IFN-γ含量,降低血清中IL-4的含量,可調(diào)節(jié)THl/TH2平衡；哮喘大鼠脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目下降,口服BCG-PSN干預(yù)CD4+CD25+Treg細(xì)胞數(shù)目上升. 4.口服BCG-PSN與肌注BCG-PSN在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫方面有類似的作用,但其程度弱于肌注BCG-PSN。
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R562.25

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本文編號(hào)：2544409