本文關(guān)鍵詞：抵抗素樣分子-β調(diào)控FAK信號(hào)傳導(dǎo)通路促進(jìn)人肺動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞增殖的機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：1)觀察不同濃度人抵抗素樣分子-β（resistin-like molecule-β，RELM-β）對(duì)體外培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中黏著斑激酶（focal adhesion kinase，F(xiàn)AK）、生存素（survivin）表達(dá)的影響；2）觀察RELM-β、FAK、survivin三者之間的關(guān)系，探討RELM-β調(diào)控FAK信號(hào)通路促進(jìn)HPAMSCs增殖的機(jī)制。 方法：取材肺癌周圍的正常組織,體外培養(yǎng)至第5-6代。將細(xì)胞隨機(jī)分為4組：control組（對(duì)照組），，重組人RELM-β（recombinant human RELM-β，rhRELM-β）25ng/ml組，50ng/ml組，100ng/ml組。RT-PCR檢測(cè)FAK及survivin mRNA表達(dá)水平。WB檢測(cè)FAK及survivin的蛋白表達(dá)量，免疫熒光觀察FAK在HPASMCs中的定位表達(dá)，PI單染流試細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期。同時(shí)，構(gòu)建FAK和survivin的siRNA，分別轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HPASMCs內(nèi)。RT-PCR分別檢測(cè)FAK、survivin mRNA表達(dá)水平。以了解RELM-β對(duì)HPASMCs中FAK、survivin表達(dá)的影響， 結(jié)果：與對(duì)照組比較,不同濃度rhRELM-β刺激HPASMCs，其FAK、survivin mRNA及蛋白表達(dá)均顯著增高，于50ng/ml組最為顯著（P 0.01)，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05)。rhRELM-β明顯升高了HPASMCs S期細(xì)胞比例，同時(shí)降低了HPASMCs G0/G1期比例。FAK siRNA能下調(diào)HPASMCs survivin mRNA表達(dá)水平，而survivin siRNA未能下調(diào)HPASMCs中FAK的mRNA表達(dá)水平。 結(jié)論：RELM-β促進(jìn)人肺血管平滑肌細(xì)胞增殖的同時(shí),也上調(diào)了HPASMCs中FAK、survivin的表達(dá)。FAK siRNA能抑制survivin在HPASMCs中的表達(dá)，反之不然，說(shuō)明FAK在細(xì)胞增殖信號(hào)傳導(dǎo)通路中位于survivin上游，且兩者均在RELM-β誘導(dǎo)的HPASMCs異常增殖過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 目的:探討FAK-survivin信號(hào)通路在RELM-β刺激下人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用。 方法:進(jìn)行人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果，選擇rhRELM-β濃度(50nmol/ml)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，探討在相同濃度下的延時(shí)效應(yīng)。將細(xì)胞分為2組：control組，RELM-β重組蛋白50nmol/ml組。于1、2、4、8h收集細(xì)胞，WB檢測(cè)FAK和pFAK、survivin蛋白表達(dá)水平。于48小時(shí)流式細(xì)胞術(shù)PI單染法檢測(cè)細(xì)胞周期的分布及FITC-AnnexinV/PI雙染色雙變量流式細(xì)胞分析細(xì)胞凋亡率。同時(shí)，構(gòu)建FAK的siRNA，轉(zhuǎn)染至體外培養(yǎng)的HPASMCs內(nèi)以降低HPASMCs中FAK的表達(dá)，并以rhRELM-β刺激培養(yǎng)HPASMCs，實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)FAK和survivin mRNA表達(dá)水平。Western blotting檢測(cè)FAK和pFAK、survivin的蛋白表達(dá)水平。使用BrdU摻入法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。 結(jié)果:在體外培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中，F(xiàn)AK siRNA有效抑制了RELM-β刺激培養(yǎng)的HPASMCs中FAK和survivin的mRNA和蛋白表達(dá)，并部分抑制細(xì)胞增殖。 結(jié)論: FAK在RELM-β誘導(dǎo)的HPASMCs異常增殖中發(fā)揮重要作用，其部分原因是通過(guò)上調(diào)survivin的表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：抵抗素樣分子-β 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 增殖 粘著斑激酶 生存素 siRNA RELM-β FAKsiRNA survivin 人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 細(xì)胞增殖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

• 主要英文縮略語(yǔ)索引4-6
• 摘要6-9
• Abstract9-13
• 第一部分13-32
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-29
• 參考文獻(xiàn)29-32
• 第二部分32-51
• 材料與方法33-40
• 結(jié)果40-45
• 討論45-48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 全文總結(jié)51-52
• 附錄52-70
• 綜述70-80
• 參考文獻(xiàn)76-80
• 致謝80

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本文編號(hào)：254137