【摘要】：目的探討NALP3炎性復合體在肺纖維化過程中的活化情況,并觀察阿魏酸鈉(sodium ferulate,SF)在肺纖維化過程中對炎性復合體的影響。方法體內(nèi)實驗以博萊霉素(BLM)氣管滴注構建小鼠肺纖維化模型(BLM組),治療組在用BLM建模后第2天以SF(100mg/kg)每日1次腹腔注射(SF組),對照組(不建模)和BLM組注射等量磷酸鹽緩充液,建模后第21天取肺組織行Masson染色,觀察肺組織膠原沉積(Ashcroft評分)情況;以堿水解法測定肺組織羥脯氨酸(HYP)含量;體外實驗以H_2O_2刺激小鼠胚胎成纖維細胞NIH-3T3以構建成纖維細胞氧化應激模型,干預組以SF 400μg/mL預處理2h,再用H_2O_2培養(yǎng)細胞,采用Real time-PCR檢測小鼠肺組織及體外實驗分組處理細胞相關炎性細胞因子NALP3、caspase-1、凋亡相關斑點樣蛋白(ASC)、collagen-1、α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)mRNA,Western blot檢測小鼠肺組織NALP3蛋白,分組處理細胞NALP3、collagen-1、α-SMA蛋白的表達;ELISA測定肺組織上清及細胞上清中IL-1β質(zhì)量濃度。結果體內(nèi)實驗SF處理后,肺纖維化模型小鼠Ashcroft評分及HYP含量較BLM組有所減少(P0.05);肺組織NALP3炎性復合體NALP3、ASC、caspase-1mRNA,NALP3蛋白的表達和IL-1β的合成較BLM組均有減少(P0.05)。體外實驗顯示H_2O_2能有效刺激NALP3炎性復合體NALP3、ASC、caspase-1mRNA的表達(P0.05)與IL-1β的分泌(P0.05),并且能有效促進成纖維細胞NALP3蛋白、collagen-1和α-SMA的表達(P0.05);SF預處理能在基因水平抑制NALP3、ASC、caspase-1、collagen-1和α-SMA的表達(P0.05),且在蛋白水平減少NALP3、collagen-1、α-SMA的表達(P0.05),降低IL-1β水平(P0.05)。結論阿魏酸鈉可能通過抑制氧化應激誘導的NALP3炎癥復合體活化,從而抑制成纖維細胞活化,展現(xiàn)其抗纖維化作用。
[Abstract]:Objective to investigate the activation of NALP3 inflammatory complex in the process of pulmonary fibrosis and to observe the effect of sodium ferulate (sodium ferulate,SF) on inflammatory complex during pulmonary fibrosis. Methods the mouse pulmonary fibrosis model (BLM group) was established by intratracheal drip of bleomycin (BLM) in vivo. SF (100mg/kg) was injected intravenously once a day in the treatment group (SF group) on the second day after BLM modeling. The control group (no modeling) and BLM group were injected with the same amount of phosphate buffer solution. On the 21st day after modeling, the lung tissue was stained with Masson to observe the collagen deposition (Ashcroft score) in the lung tissue. The content of hydroxyproline (HYP) in lung tissue was determined by alkali hydrolysis. Mouse embryonic fibroblasts NIH-3T3 were stimulated by H_2O_2 in vitro to establish the oxidative stress model of fibroblasts. In the intervention group, the cells were pretreated with SF 400 渭 g / mL for 2 h, and then cultured with H_2O_2. The lung tissue of mice was detected by Real time-PCR and the apoptosis-related spotted protein (ASC), collagen-1, of NALP3,caspase-1, was treated in vitro. The expression of NALP3 protein in lung tissue of mice was detected by 偽-smooth muscle actin (偽-SMA) mRNA,Western blot, and the expression of NALP3,collagen-1, 偽-SMA protein in cells treated with 偽-smooth muscle actin (偽-smooth muscle actin) was detected. ELISA was used to determine the concentration of IL-1 尾 in lung tissue culture and cell culture. Results after SF treatment in vivo, the Ashcroft score and HYP content of pulmonary fibrosis model mice were lower than those of BLM group (P 0.05), and the expression of NALP3 inflammatory complex NALP3,ASC,caspase-1mRNA,NALP3 protein and the synthesis of IL-1 尾 in lung tissue were lower than those in BLM group (P 0.05). In vitro experiments showed that H_2O_2 could effectively stimulate the expression of NALP3,ASC,caspase-1mRNA in NALP3 inflammatory complex (P 0.05) and the secretion of IL-1 尾 (P 0.05), and effectively promote the expression of NALP3 protein, collagen-1 and 偽-SMA in fibroblasts (P 0.05). SF pretreatment could inhibit the expression of NALP3,ASC,caspase-1,collagen-1 and 偽-SMA at gene level (P 0.05), and decrease the expression of NALP3,collagen-1, 偽-SMA (P 0.05) and IL-1 尾 level (P 0.05) at protein level. Conclusion Sodium ferulate may inhibit the activation of fibroblasts and show its anti-fibrosis effect by inhibiting the activation of NALP3 inflammatory complex induced by oxidative stress.
【作者單位】： 四川大學華西醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學科;
【基金】：四川省科技廳科技支撐計劃項目(No.0040205301A53)資助
【分類號】：R563

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本文編號：2510573