本文關鍵詞：FIZZ1在吸煙大鼠COPD模型肺組織的表達及與氣道炎癥的相關性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《暨南大學》 2012年

FIZZ1在吸煙大鼠COPD模型肺組織的表達及與氣道炎癥的相關性

馮一  

【摘要】：目的： 探討FIZZ1(Found in Inflammatory Zone1)在吸煙所致大鼠COPD模型肺組織內的表達及其與COPD慢性氣道炎癥的相關性，以進一步闡明COPD的發(fā)病機制。 方法： （1）實驗動物及分組：選用70只全雄性Wistar大鼠（體重在150-200g），隨機平均分為對照組及COPD模型組，每組按制模時間分為3w、4w、8w、12、16w、20w、24w七個亞組，每個亞組5只。 （2）造模方法：采用吸入香煙煙霧制造大鼠COPD模型。具體作法：將模型組大鼠置于一個100×80×80厘米密閉箱內進行被動吸煙，每日兩次，每次1小時，2次間隔6h以上，每次使用12支香煙，持續(xù)六個月，建立吸煙致大鼠COPD模型。正常對照大鼠除不予以被動吸煙外，置于相同條件下飼養(yǎng)。 （3）標本采集及檢測方法、觀察指標 ①收集左側支氣管肺泡灌洗液(BALF)進行細胞分類計數(shù)。 ②HE染色觀察大鼠肺組織病理改變。 ③ELISA法定量檢測對照組及模型組不同時間點肺泡灌洗液及血清中IL-4、TNF-α的動態(tài)變化。 ④免疫組織化學法定性分析、Western Blot定量檢測對照組及模型組大鼠肺組織中FIZZ1蛋白在不同時間表達的動態(tài)變化。 結果： （1）COPD大鼠造模成功： HE染色顯示對照組大鼠各時間點肺組織未見明顯差異，無明顯病理變化。模型組第3周開始即出現(xiàn)符合人類COPD的病理形態(tài)學改變,第12周至第16周期間炎癥反應最重，第20周之后炎癥反應呈慢性過程，并逐漸出現(xiàn)肺內呼吸性細支氣管、肺泡管、肺泡囊及肺泡擴大,肺泡壁部分斷裂、融合形成肺大泡。 （2）BALF細胞分類計數(shù)：模型組大鼠BALF中炎癥細胞總數(shù)、中性粒細胞絕對數(shù)、淋巴細胞絕對數(shù)與對照組比較，在第3、4周無統(tǒng)計學差異，之后其余各時間點均顯著高于對照組(P均0.05)，并從第4周開始隨著COPD病情的進展而逐漸增多。而模型組的巨噬細胞絕對數(shù)在第3周即顯著高于對照組，一直持續(xù)增高至第24周(P均0.05)。中性粒細胞百分比模型組與對照組比較，在第3、4、8周無統(tǒng)計學差異，之后其余各時間點均顯著高于對照組(P均0.05)，模型16周、20周、24周組尤為顯著。模型組和對照組的單核巨噬細胞百分比及淋巴細胞百分比在第3、4周無統(tǒng)計學差異，之后模型組隨著造模時程的推移其表達呈下降趨勢。 （3）不同時間點肺泡灌洗液及血清中IL-4、TNF-α的動態(tài)變化：BALF中模型組的IL-4濃度在第3周、16周、20周、24周相比對照組輕度升高，在第8周輕度下降，其余時間點兩組之間沒有顯著性差異。血清中模型組IL-4在第4周、第8周低于對照組，第20周濃度輕度升高，其余時間點兩組之間沒有顯著性差異。BALF中模型組的TNF-α在第3周開始即顯著高于對照組，之后其表達逐漸增強，并在第16周、20周、24周持續(xù)維持峰值濃度(P0.05)。血清中模型組TNF-α的濃度在第3周、4周、12周、24周相比對照組升高，其余時間點兩組之間沒有顯著性差異。 （4）免疫組織化學分析發(fā)現(xiàn)，在正常對照組,FIZZ1蛋白表達較弱，主要分布于支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞及肺泡巨噬細胞，呈散在分布。在模型組,FIZZ1蛋白表達顯著增強，除聚集于支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞及肺泡巨噬細胞等炎癥細胞外，在大鼠各級細支氣管上皮細胞出現(xiàn)明顯損傷，支氣管平滑肌層的增生肥大，細胞外基質的沉積和肌成纖維細胞增生，粘膜下層纖維化，杯狀細胞增殖，及粘液腺上皮化生等氣道重構處，亦可以見到FIZZI蛋白表達相對較強。 （5）Western blot進一步證實了免疫組化的檢測結果，模型組大鼠在第3周、第12周與對照組相比無統(tǒng)計學意義（P＞0.05)，第4周模型組相比對照組輕度下降，之后FIZZ1蛋白在肺組織內的表達隨著炎癥反應的加劇而逐漸增強，并在第20周達到峰值（P＜0.05)，第24周稍有回落，但仍高于對照組。 （6）COPD模型組大鼠肺組織內FIZZ1蛋白與BALF中的白細胞總數(shù)及中性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞絕對數(shù)呈正相關，并隨著其細胞數(shù)量的增加，F(xiàn)IZZ1蛋白的表達呈上升趨勢（r分別＝0.585，0.357，0.535，0.578，P均0.05）。FIZZ1的表達水平與BALF中IL-4、TNF-a濃度呈正相關（r分別＝0.359，0.561，P均0.05），與血清中TNF-a濃度呈負相關（r＝—0.90，P0.05），與血清中IL-4濃度無顯著相關性（P＞0.05)。 結論： 1采用吸入香煙煙霧24周制造大鼠COPD模型，，所建模型符合人類COPD特點，提示COPD模型制造成功。 2FIZZ1蛋白隨著COPD病情的進展，其表達水平也隨之明顯增高，在第20周達到峰值，且主要分布于支氣管上皮細胞、肺泡上皮細胞、肺血管內皮細胞、肺泡巨噬細胞、支氣管平滑肌層及纖維化的肺間質。提示FIZZ1作為一種肺組織特異性表達的炎癥介質，參與了COPD炎癥反應的發(fā)生與發(fā)展。 3FIZZ1表達水平的升高可能促進了中性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞在氣道內的聚集，并促使其合成和分泌IL-4、TNF-a等炎性介質。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9
【目錄】：

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