【摘要】：目的探討外源性C8-神經(jīng)酰胺(C8-ceramide)對肺泡Ⅱ型上皮細胞體外生存率的影響,以及C8-神經(jīng)酰胺對肺泡Ⅱ型上皮細胞的誘導(dǎo)凋亡作用。方法取妊娠18天的ICR孕鼠一只,分離、培養(yǎng)原代胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞(alveolar type II epithelial cell,AECⅡ),使用免疫細胞化學(xué)鑒定法和透射電子顯微鏡對所獲取的細胞進行鑒定。分別加入0、20、40、80μmol/L的C8-神經(jīng)酰胺溶液,繼續(xù)培養(yǎng)24 h,使用MTT法檢測外源性C8-神經(jīng)酰胺對AECⅡ增殖的影響,然后使用80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液分別培養(yǎng)AECⅡ3、6、12、24 h,MTT法檢測AECⅡ活力,并計算體外細胞生存率的變化。使用0、20、40、80μmol/L C8-神經(jīng)酰胺溶液對AECⅡ進行體外干預(yù),于12 h和24 h后,分別使用流式細胞術(shù)和TUNEL法檢測各組細胞的凋亡率。結(jié)果細胞鑒定結(jié)果證明,通過本實驗提取的細胞為胎鼠肺泡Ⅱ型上皮細胞,具有肺泡Ⅱ型上皮細胞的特征性結(jié)構(gòu)。MTT結(jié)果提示,C8-神經(jīng)酰胺對AECⅡ增殖具有明顯抑制作用,并且具有濃度效應(yīng)和時間效應(yīng)。碘化丙啶染色法結(jié)果顯示,C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時,12 h和24 h細胞總凋亡率分別為:(5.80±0.30)%、(7.00±0.10)%、(9.97±0.50)%、(12.67±0.67)%和(5.67±1.39)%、(8.87±0.49)%、(13.97±1.33)%、(18.80±0.46)%,各劑量組凋亡率與對照組相比差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,且隨著藥物濃度的上升和時間的延長,細胞凋亡率呈上升趨勢。AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法實驗結(jié)果提示,C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時,12 h和24 h細胞總凋亡率分別為:(20.63±0.86)%、(22.67±1.72)%、(42.03±1.34)%、(50.40±1.30)%和(20.93±2.51)%、(28.93±3.19)%、(47.00±1.08)%、(57.77±3.04)%(除12小時20μmol/L組外,相同時間點,其他各組與對照組相比,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,均P0.05)。TUNEL法提示,C8-神經(jīng)酰胺溶液濃度為0、20、40、80μmol/L時,12 h和24 h的凋亡率分別為:(5.51±1.41)%、(13.24±2.62)%、(35.10±4.59)%、(75.07±4.37)%和(5.56±1.36)%、(21.34±2.09)%、(37.12±2.11)%、(91.33±0.72)%(相同時間點,各濃度組與對照組相比,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,均P0.05)。結(jié)論外源性C8-神經(jīng)酰胺可抑制肺泡Ⅱ型上皮細胞的生存率,并可誘導(dǎo)肺泡Ⅱ型上皮細胞凋亡。
[Abstract]:Aim to investigate the effect of exogenous C8-ceramide (C8-ceramide) on the survival rate of alveolar type 鈪，

本文編號：2447999