發(fā)布時間：2018-12-18 17:20

【摘要】：慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease, COPD)是危及全球人類健康的重大疾病。目前,慢性阻塞性肺疾病是第四位最常見的死亡原因,僅次于心臟疾病,也是第二位造成勞動力喪失的重要原因�；诼宰枞苑渭膊�(yán)重影響人類健康,且發(fā)病機制尚未明確,因此在其預(yù)防、診斷和治療上還存在很大的缺口,現(xiàn)有的臨床治療藥物中也存在長期的副作用或難吸收等各種各樣的問題。隨著近幾年對氧化應(yīng)激機制研究的深入,一些抗氧化劑也相繼問世,并表現(xiàn)出能夠改善慢性阻塞性肺疾病患者的癥狀,延緩疾病進(jìn)展等方面的作用。因此研發(fā)出高效低毒易吸收的抗氧化劑具有較好的商業(yè)前景。本研究的目的就是針對慢性阻塞性肺疾病的氧化應(yīng)激機制環(huán)節(jié),評價白藜蘆醇二聚體衍生物—Vam3對香煙煙霧誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致肺部自噬形成的影響,以期開發(fā)出優(yōu)于白藜蘆醇的抗氧化劑。 本研究通過體內(nèi)體外實驗首次證明了Vam3可通過抑制香煙煙霧誘導(dǎo)的自噬過度激活而發(fā)揮防治慢性阻塞性肺疾病的作用。首先,用不同濃度的煙霧凝集物處理人支氣管上皮細(xì)胞不同時間,通過Western Blot與免疫熒光方法檢測自噬標(biāo)志性蛋白LC3的表達(dá),發(fā)現(xiàn)自制的煙霧凝集物能夠誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞過度自噬,且300mg/L煙霧凝集物處理細(xì)胞12小時誘導(dǎo)的自噬最為明顯,后續(xù)實驗均以此濃度和時間為處理條件。其次,我們采用自噬抑制劑巴佛洛霉素處理細(xì)胞,并與煙霧凝集物聯(lián)合應(yīng)用,通過Western Blot檢測自噬相關(guān)蛋白LC3和p62的表達(dá),進(jìn)一步顯示了煙霧凝集物能夠顯著誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞產(chǎn)生自噬。 我們以白藜蘆醇為陽性對照藥,通過Western Blot和免疫熒光法觀察到Vam3能夠抑制煙霧凝集物誘導(dǎo)的自噬,1μmol/L濃度尤為顯著,且抑制作用優(yōu)于白藜蘆醇。為了探討Vam3抑制自噬的分子作用機制,我們用IP, Western Blot方法檢測了Sirt1和Fox03a的表達(dá)及活性,實驗結(jié)果顯示煙霧凝集物處理細(xì)胞后,Sirt1的表達(dá)及活性水平均下調(diào),而Vam3能夠上調(diào)或維持Sirt1的表達(dá)及活性。另外,煙霧凝集物能夠下調(diào)總FoxO3a和磷酸化FoxO3a的表達(dá),促進(jìn)FoxO3a入核,并上調(diào)其乙�；�,而Vam3則能逆轉(zhuǎn)FoxO3a的上述改變,且作用效果好于白藜蘆醇。為了進(jìn)一步驗證Vam3是否是通過Sirt1發(fā)揮作用的,我們敲降人支氣管上皮細(xì)胞中Sirt1的表達(dá)發(fā)現(xiàn),Vam3幾乎不能夠逆轉(zhuǎn)自噬的過度激活。此外,我們通過檢測細(xì)胞內(nèi)ROS及GSH-Px的含量發(fā)現(xiàn),Vam3能夠抑制煙霧凝集物誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。體內(nèi)實驗我們建立了熏煙小鼠模型,病理切片HE染色顯示Vam3能夠改善熏煙小鼠肺部的病理變化。肺組織均漿的Western Blot檢測及肺組織石蠟切片的免疫組化檢測均顯示Vam3能夠抑制熏煙小鼠肺部的自噬,并逆轉(zhuǎn)香煙煙霧誘導(dǎo)的Sirt1和FoxO3a表達(dá)下調(diào)。 綜上所述,本文首次發(fā)現(xiàn)了Vam3具有抗氧化、抗自噬的作用,且作用效果優(yōu)于白藜蘆醇；Vam3可通過抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)和調(diào)節(jié)Sirtl/FoxO3a通路,抑制香煙煙霧誘導(dǎo)的自噬激活,進(jìn)而發(fā)揮防治慢性阻塞性肺疾病的作用。本研究也為進(jìn)一步開發(fā)出防治COPD的抗氧化藥物提供了理論依據(jù)和可靠的先導(dǎo)物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R563.9;R285

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2386211