【摘要】：第一部分茶堿對煙草煙霧暴露下人單核細(xì)胞分泌IL-8的影響 目的觀察煙草煙霧暴露下能否造成人單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗；茶堿能否減輕煙霧暴露下人單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗。 方法以人淋巴瘤單核細(xì)胞株U937為研究對象，用香煙煙霧提取物（cigarette smoke extract CSE）制造細(xì)胞煙草煙霧暴露氧化應(yīng)激模型。分為茶堿+CSE組、CSE組、對照組。各組細(xì)胞在腫瘤壞死因子（Tumor necrosisfactor-α TNF-α）（10ng/L）干預(yù)下，觀察7個不同濃度的地塞米松對各組細(xì)胞IL-8分泌的影響。 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(Enzyme-linked immunosorbent assay ELISA)檢測白細(xì)胞介素-8(Interleukin-8IL-8)，應(yīng)用Microsoft Excel2003計算不同濃度地塞米松對U937細(xì)胞分泌IL-8的抑制率及地塞米松對IL-8分泌的半數(shù)抑制濃度（dexamethasone half inhibitory concentration，IC50-Dex）。 結(jié)果IL-8抑制率及IC50-Dex：茶堿+CSE組IL-8抑制率低于對照組但高于CSE組，茶堿+CSE組IC50-Dex高于對照組但低于CSE組（P0.05）。煙草煙霧暴露可使細(xì)胞IL-8的分泌量增多；茶堿干預(yù)后可使細(xì)胞IL-8的分泌量明顯減少。 結(jié)論1.煙草煙霧暴露能使人單核細(xì)胞對糖皮質(zhì)激素的敏感性下降，造成糖皮質(zhì)激素抵抗。2.茶堿能減輕煙草煙霧暴露下人單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗，增加糖皮質(zhì)激素抗炎作用。 第二部分茶堿對煙草煙霧暴露下人單核細(xì)胞HDAC2表達及PI3K-δ/Akt傳導(dǎo)通路的影響 目的探討茶堿是否通過抑制煙草煙霧暴露對PI3K-δ/AKT通路的激活使HDAC2的表達上調(diào)從而減輕煙草煙霧暴露下人單核細(xì)胞的糖皮質(zhì)激素抵抗。 方法以人淋巴瘤單核細(xì)胞株U937為研究對象，用CSE制造細(xì)胞煙草煙霧暴露氧化應(yīng)激模型及轉(zhuǎn)染HDAC2-siRNA干擾細(xì)胞HDAC2的表達。分為(1)茶堿+CSE組、CSE組、對照組。（2）HDAC2-siRNA組、HDAC2-siRNA+茶堿組、SC組,對照組。（3）茶堿+CSE組、IC87114+CSE組、CSE組、對照組。 其中（2）、（3）在腫瘤壞死因子TNF-α（10ng/L）干預(yù)下，觀察7個不同濃度的地塞米松對各組細(xì)胞IL-8分泌的影響。 應(yīng)用ELISA檢測IL-8，應(yīng)用Microsoft Excel2003計算不同濃度地塞米松對U937細(xì)胞分泌IL-8的抑制率及地塞米松對IL-8分泌的IC50-Dex。 應(yīng)用實時熒光定量PCR(Real-time fluorescence quantitative polymerasechain reaction RT-PCR)檢測各組U937細(xì)胞組蛋白去乙�；窱（IHistonedeacetylase2HDAC2）mRNA的表達水平。 應(yīng)用蛋白印跡法（Western blotting WB）檢測各組U937細(xì)胞磷脂酰激醇3-激酶（Phosphoinositide-3-kinase PI3K）蛋白、磷酸化細(xì)胞蛋白激酶B （Phosphorylase-Protein Kinase B P-Akt）、蛋白激酶B（Protein KinaseB AKT）蛋白及HDAC2蛋白的表達水平。 應(yīng)用免疫熒光法檢測各組U937細(xì)胞PI3K蛋白表達，應(yīng)用免疫組化法檢測各組U937細(xì)胞AKT、P-AKT蛋白表達。 結(jié)果1.IL-8抑制率及IC50-Dex：（1）HDAC2-siRNA+茶堿組IL-8抑制率低于SC組和對照組但高于HDAC2-siRNA組，HDAC2-siRNA+茶堿組IC50-Dex高于SC組和對照組但低于HDAC2-siRNA組（P0.05）。（2）IC87114+CSE組IL-8抑制率低于對照組但高于CSE組，IC87114+CSE組IC50-Dex高于對照組但低于CSE組（P0.05）。IC87114+CSE組與茶堿+CSE組相比，，IL-8抑制率及IC50-Dex差別均無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。沉默細(xì)胞HDAC2后可增加IL-8的分泌量；用茶堿或選擇性PI3K-δ抑制劑IC87114干預(yù)后均可使細(xì)胞IL-8的分泌量明顯減少。 2.HDAC2mRNA表達：（1）茶堿+CSE組HDAC2mRNA表達水平高于CSE組而低于對照組（P0.05）。（2）HDAC2-siRNA+茶堿組的HDAC2mRNA表達水平高于HDAC2-siRNA組但低于SC組和對照組（P0.05）。煙草煙霧暴露可使細(xì)胞HDAC2的基因表達降低；使用HDAC2-siRNA沉默細(xì)胞內(nèi)HDAC2后也使細(xì)胞HDAC2的基因表達降低；茶堿或IC87114干預(yù)后均可使細(xì)胞HDAC2的基因表達明顯增高。 3.PI3K蛋白、P-Akt蛋白、AKT蛋白及HDAC2蛋白表達：(1)各組PI3K蛋白表達水平差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。(2)各組AKT蛋白表達水平差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（3）茶堿+CSE組P-Akt蛋白表達水平低于CSE組但高于對照組（P0.05）。（4）IC87114+CSE組P-Akt蛋白表達水平低于CSE組但高于對照組（P0.05）；IC87114+CSE組P-Akt蛋白表達水平與茶堿+CSE組相比差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。（5）茶堿+CSE組HDAC2表達水平高于CSE組而低于對照組（P0.05）。（6）HDAC2-siRNA+茶堿組的HDAC2蛋白表達水平高于HDAC2-siRNA組但低于SC組和對照組（P0.05）。（7）IC87114+CSE組HDAC2表達水平高于CSE組而低于對照組（P0.05）；IC87114+CSE組HDAC2蛋白表達水平與茶堿+CSE組相比差別無統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。煙草煙霧暴露可使細(xì)胞P-AKT蛋白表達增高，用茶堿或IC87114干預(yù)后可顯著降低P-AKT蛋白表達水平。煙草煙霧暴露及使用HDAC2-siRNA沉默HDAC2后細(xì)胞HDAC2的蛋白表達均降低；茶堿或IC87114干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)HDAC2的蛋白表達均增高。 結(jié)論煙草煙霧暴露能激活PI3K/AKT通路使HDAC2表達減少從而造成糖皮質(zhì)激素激素抵抗；茶堿及選擇性PI3K-δ抑制劑IC87114能通過抑制煙草煙霧暴露對PI3K/AKT通路的激活使HDAC2的表達上調(diào)從而減輕煙草煙霧暴露下人單核細(xì)胞的糖皮質(zhì)激素抵抗。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R563.9

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本文編號：2375716