【摘要】：目的:為了研究PBA對于博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化及肺纖維化發(fā)生過程中肺泡上皮細(xì)胞上皮-間葉轉(zhuǎn)化的影響;方法:取成年ICR雄性小鼠(28-32g)。隨機分為四組:空白對照組(Control),單純PBA對照組(PBA),肺纖維化模型組(BLM),PBA保護(hù)組(BLM+PBA)。在肺纖維化模型組中,一次性給予小鼠氣管內(nèi)注射博萊霉素(3.0mg/kg)。在PBA保護(hù)組中,同時給予小鼠每天腹腔注射PBA(150mg/kg),給予小鼠博萊霉素21天后處死小鼠,取出肺組織。留取部分肺組織福爾馬林固定,石蠟包埋后切片HE染色了解各組小鼠肺組織中炎癥浸潤情況,天狼星紅染色了解各組肺組織纖維化情況,同時留取切片用于免疫組織化學(xué)檢測了解α-SMA及NF-κb在各組小鼠肺組織中的表達(dá)。提取肺組織總蛋白用于測定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、p-e IF2α、e IF2α、IRE1α、p-IRE1α及EMT特異性分子α-SMA等在肺組織中的表達(dá)。提取肺組織RNA,利用RT-PCR測定TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1等炎性因子及膠原基因Col1α1和Col1α2在各組小鼠肺中的表達(dá)。結(jié)果:在肺纖維化模型組中,給予小鼠氣管內(nèi)注入博萊霉素21天后,蛋白印跡試驗證實纖維化模型組小鼠肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、p-e IF2α、p-IRE1α表達(dá)較正常對照小鼠明顯升高,而給予PBA后可以明顯抑制小鼠肺組織中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白的水平的升高;HE染色證明肺纖維化模型組小鼠肺組織中炎癥浸潤明顯,給予PBA后可以抑制小鼠肺組織中炎癥浸潤程度;免疫組化提示纖維化模型組小鼠中NF-κb陽性細(xì)胞明顯增多,而給予PBA后可以明顯減少NF-κb陽性細(xì)胞的數(shù)量;RT-PCR結(jié)果提示肺纖維化模型組小鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IFN-γ和TGF-β1基因表達(dá)水平明顯升高,給予PBA后可以明顯抑制這些炎性因子基因的表達(dá);免疫組化及蛋白印跡實驗證實肺纖維化模型組小鼠肺組織中α-SMA表達(dá)明顯升高,PBA可以明顯抑制α-SMA在小鼠肺組織中的表達(dá);天狼星紅染色提示給予小鼠氣管內(nèi)注射博萊霉素21天后可見肺組織中膠原蛋白明顯增多,PBA可以減輕博萊霉素所致的肺纖維化程度;同時RT-PCR提示肺纖維化模型組中膠原基因Col1α1和Col1α2表達(dá)水平明顯升高,而PBA可以抑制Col1α1和Col1α2表達(dá)的升高。結(jié)論:PBA可能抑制博萊霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維化過程中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。
[Abstract]:Aim: to study the effect of PBA on alveolar epithelial epithelial-mesenchymal transformation in bleomycin induced pulmonary fibrosis and pulmonary fibrosis in mice. Methods: adult ICR male mice (28-32 g) were selected. Four groups were randomly divided into four groups: blank control group, (Control), control group, simple PBA control group, (PBA), pulmonary fibrosis model group, (BLM), PBA protection group, (BLM PBA). In the pulmonary fibrosis model group, mice were given intratracheal injection of bleomycin (3.0mg/kg). In the PBA protection group, mice were given intraperitoneal injection of PBA (150mg/kg) every day, and the mice were killed 21 days after Bleomycin was given, and lung tissue was taken out. Partial lung tissue was fixed by formalin, HE staining of paraffin embedded sections was used to investigate the inflammatory infiltration in lung tissue of mice in each group, and Sirius red staining was used to investigate the fibrosis of lung tissue in each group. The expression of 偽-SMA and NF- 魏 b in lung tissues of each group was detected by immunohistochemistry. Lung tissue total protein was extracted to determine the expression of endoplasmic reticulum stress pathway related proteins GRP78,CHOP,p-e IF2 偽, IRE1 偽, p-IRE1 偽 and EMT specific molecule 偽 -SMA in lung tissue. The expression of TNF- 偽, IL-1 尾, IFN- 緯 and TGF- 尾 1 and collagen genes Col1 偽 1 and Col1 偽 2 in the lungs of mice were determined by RT-PCR. Results: in the pulmonary fibrosis model group, the endoplasmic reticulum stress-related protein (GRP78,CHOP,p-e IF2 偽) was confirmed by Western blotting after intratracheal administration of bleomycin 21 days later. The expression of p-IRE1 偽 was significantly higher than that of normal control mice, but the level of endoplasmic reticulum stress-related protein in lung tissue was significantly inhibited by PBA. HE staining showed that the inflammatory infiltration in lung tissue was obvious in the model group of pulmonary fibrosis, and the degree of inflammatory infiltration in the lung tissue could be inhibited by PBA. Immunohistochemical staining showed that the number of NF- 魏 b positive cells in the fibrotic model group was significantly increased, but the number of NF- 魏 b positive cells was significantly decreased after the administration of PBA. The results of RT-PCR indicated that the expression of TNF- 偽, IL-1 尾, IFN- 緯 and TGF- 尾 1 in lung tissue of pulmonary fibrosis model group was significantly increased, and the expression of these inflammatory factor genes could be significantly inhibited by PBA. Immunohistochemistry and Western blot analysis showed that the expression of 偽-SMA in lung tissue of the model group was significantly increased, and that PBA could inhibit the expression of 偽-SMA in the lung tissue of mice. Sirius red staining showed that the collagen in lung tissue was significantly increased 21 days after intratracheal injection of bleomycin in mice, and PBA could alleviate the degree of pulmonary fibrosis induced by bleomycin. At the same time, RT-PCR indicated that the expression of collagen gene Col1 偽 1 and Col1 偽 2 in pulmonary fibrosis model group was significantly increased, while PBA could inhibit the increase of Col1 偽 1 and Col1 偽 2 expression. Conclusion: PBA may inhibit the epithelial-interstitial transformation mediated by endoplasmic reticulum stress during bleomycin induced pulmonary fibrosis in mice.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R563

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本文編號：2357245