目的:研究白介素35(IL-35)蛋白在小鼠銅綠假單胞肺炎中的作用,并同步觀察其對(duì)白介素8(IL-8)和白介素17(IL-17)表達(dá)水平的影響,探討白介素35蛋白在銅綠假單胞菌肺炎中的可能效用,期望為綠假單胞菌肺炎的臨床治療提供新的治療方式和途徑。方法:1.選用雄性健康清潔級(jí)昆明小鼠90只,其鼠齡為6-8周、體重約為20-30g,按隨機(jī)分配原則分成正常對(duì)照組(生理鹽水組:30只)、肺部感染組(PA組:30只)、干預(yù)組(30只)。PA組:造模前12小時(shí)自腹腔注射生理鹽水1ml,戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉小鼠后固定,待麻藥顯效后,常規(guī)消毒鋪巾,依次切開小鼠頸部皮膚、皮下、皮下組織,顯露氣管上段,從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入銅綠假單胞菌(PA)菌液0、03ml(2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛燃?×108cfu/ml),以建立小鼠肺炎模型;干預(yù)組:在造模前12小時(shí)自腹腔注射白介素35蛋白1ml(含白介素35蛋白2ug),然后用戊巴比妥鈉麻醉小鼠后固定,待麻藥顯效后,常規(guī)消毒鋪巾,依次切開小鼠頸部皮膚、皮下、皮下組織,顯露氣管上段,從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入銅綠假單胞菌(PA)菌液0、03ml(2個(gè)麥?zhǔn)蠁挝粷舛燃?×108cfu/ml),以建立小鼠干預(yù)組模型;正常對(duì)照組:操作同前兩組,在造模前12小時(shí)自腹腔注射生理鹽水1ml,戊巴比妥麻醉小鼠后固定,其后步驟同前兩組,最后從氣管環(huán)狀軟骨間隙內(nèi)穿刺注入生理鹽水0.03ml作為正常對(duì)照。造模成功后,三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均在第3、9、24小時(shí)隨機(jī)抓取10只小鼠,留置標(biāo)本后處死小鼠。2.取各個(gè)實(shí)驗(yàn)組在不同時(shí)間點(diǎn)小鼠右肺肺泡灌洗液,經(jīng)離心后,用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)檢測(cè)各組肺泡灌洗液中IL-17、IL-8的濃度;取處死小鼠左肺大部分肺組織經(jīng)甲醛固定后,行HE染色比較肺炎炎癥的范圍和程度,取處死小鼠左肺小部分肺組織,用于制作肺組織勻漿并行細(xì)菌培養(yǎng)及菌落計(jì)數(shù)。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS 19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果:1.感染組、干預(yù)組小鼠肺組織在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)存在明顯的炎癥改變,以24小時(shí)組炎癥改變最明顯,但干預(yù)組在3、9、24小時(shí)炎癥改變明顯輕于感染組,兩者比較存在顯著性差異(P0.05);2.干預(yù)組各時(shí)間組IL-17,IL-8表達(dá)水平明顯低于感染組,且有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均0.05)。結(jié)論:(1).IL-35對(duì)小鼠銅綠假單胞菌肺炎具有保護(hù)作用,可明顯減輕其炎癥反應(yīng)。(2)IL-35減輕小鼠銅綠假單胞菌肺炎炎癥反應(yīng)可能與抑制炎性介質(zhì)IL-8,IL-17有關(guān)。

【學(xué)位授予單位】：四川醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R563.1
【目錄】：

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