kB p65對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的影響
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《南方醫(yī)科大學(xué)》 2009年
RNAi沉默NF-kB p65對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的影響
石榴
【摘要】： 研究背景和目的 肺炎是呼吸系統(tǒng)常見(jiàn)疾病,重癥肺炎(severe community-acquired pneumonia,SCAP)因其療效差,病情發(fā)展迅猛,易引發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemicinflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障礙綜合征(MultipleSystem Organ dysfunction,MODS)等嚴(yán)重并發(fā)癥甚至造成人員死亡,成為威脅人類(lèi)健康的一大問(wèn)題。引起SCAP的原因很多,發(fā)病機(jī)制復(fù)雜,一般由嚴(yán)重的細(xì)菌或/和病毒感染所致。在感染或非感染因素作用下,肺內(nèi)的炎性細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等活化后產(chǎn)生內(nèi)源或外源性炎性物質(zhì)如細(xì)胞因子、凝血和纖溶物質(zhì)、血管活性肽、黏附因子、遲發(fā)性炎性物質(zhì)如高遷移率蛋白分子等引起炎癥反應(yīng),發(fā)揮機(jī)體的防御作用。既往認(rèn)為,重癥肺炎造成病情加重、多組織器官出現(xiàn)損傷及功能不全是病原體或毒素直接作用的結(jié)果�，F(xiàn)階段看法不盡然,大量研究表明,初始炎癥信號(hào)經(jīng)過(guò)活化擴(kuò)大后,上述的內(nèi)、外源性炎癥介質(zhì)表達(dá)迅速上調(diào),失控性釋放,激發(fā)連鎖“瀑布效應(yīng)”(cascade effect,CE),使炎性/抗炎反應(yīng)失衡,免疫功能紊亂,機(jī)體組織細(xì)胞發(fā)生凋亡及壞死,最終導(dǎo)致重癥肺炎及嚴(yán)重并發(fā)癥。 在上述的各種炎癥介質(zhì)中,促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子的平衡失調(diào)是感染進(jìn)一步發(fā)展為SIRS及膿毒癥的關(guān)鍵。目前已知的促炎細(xì)胞因子主要有腫瘤壞死因子(Tumor Necrosis Factor,TNF)、白介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)等,抗炎性細(xì)胞因子主要有白介素-4(Interleukin-4,IL-4)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白介素-13(Interleukin-13,IL-13)等。 TNF-a與靶細(xì)胞膜表面的TNF受體作用,激活多種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑、激酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,活化細(xì)胞基因,產(chǎn)生廣泛的生物學(xué)作用。業(yè)已明確,在機(jī)體處于嚴(yán)重創(chuàng)傷感染的狀態(tài)下,腫瘤壞死因子TNF可以通過(guò)誘導(dǎo)次級(jí)炎性介質(zhì)的釋放,引起“炎癥級(jí)聯(lián)效應(yīng)”,介導(dǎo)機(jī)體高代謝狀態(tài),激活內(nèi)皮細(xì)胞、各臟器實(shí)質(zhì)細(xì)胞凋亡通路等一系列復(fù)雜的病理生理學(xué)作用,使各系統(tǒng)臟器由細(xì)胞損傷破壞進(jìn)而發(fā)展為臟器功能衰竭。TNF-a可誘發(fā)IL-1、IL-6、IL-8以及繼發(fā)性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,并由此進(jìn)一步激發(fā)炎癥連鎖反應(yīng);同時(shí)可激活凝血及補(bǔ)體系統(tǒng),促進(jìn)黏附分子、前列腺素E2、血小板刺激因子、糖皮質(zhì)激素等強(qiáng)效致炎因子的釋放和表達(dá),進(jìn)一步加重肺組織損傷。TNF-a被認(rèn)為是重癥肺炎發(fā)病中的重要促炎介質(zhì),在肺部炎癥中,TNF-a通過(guò)促進(jìn)中性粒細(xì)胞表面細(xì)胞黏附分子CD11/18表達(dá)及自由基釋放,介導(dǎo)粒細(xì)胞在心肺循環(huán)中黏附于肺毛細(xì)血管內(nèi)皮上,進(jìn)而損傷血管內(nèi)皮。研究發(fā)現(xiàn)TNF-a在SIRS早期普遍升高,在發(fā)生MODS時(shí)增高更為明顯,血中的TNF-a水平對(duì)判斷重癥肺炎的病情進(jìn)展具有預(yù)警作用。 白細(xì)胞介素家族(interleukins,ILs)多個(gè)成員被證實(shí)與肺炎關(guān)系密切,如促炎細(xì)胞因子IL-1、IL-6及抗炎細(xì)胞因子IL-10等。IL-1是急性期免疫反應(yīng)的主要調(diào)節(jié)因子,可通過(guò)刺激下丘腦前部的前列腺激動(dòng)中樞而誘導(dǎo)典型的炎癥發(fā)熱反應(yīng),此外還可通過(guò)改變內(nèi)皮細(xì)胞中黏附分子的表達(dá)和分布而發(fā)揮重要作用。研究表明,脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是單核一巨噬細(xì)胞合成分泌IL-1的強(qiáng)烈刺激劑。IL-6在過(guò)度炎癥反應(yīng)時(shí)大量分泌,誘發(fā)血管內(nèi)皮細(xì)胞及微循環(huán)的一系列炎癥改變,對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及炎癥細(xì)胞具有直接激活和毒性作用,促進(jìn)肝細(xì)胞分泌急性期蛋白。目前大量研究發(fā)現(xiàn)IL-6水平增高是最早出現(xiàn)的感染指標(biāo),比常規(guī)的C.反應(yīng)蛋白要提前很多,血漿高水平的IL-6與CAP和ARDS的高病死率有關(guān)。Monton等發(fā)現(xiàn),在重癥肺炎中使用糖皮質(zhì)激素使IL-6下降,病死率有降低。IL-10是一個(gè)以免疫抑制為主的多向免疫調(diào)節(jié)因子,主要生物活性表現(xiàn)為直接抑制炎癥細(xì)胞的活化進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生。它能在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后兩個(gè)階段上影響前炎癥因子的水平。IL-10不僅能抑制前炎性細(xì)胞因子相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄而阻斷其合成,同時(shí)還能影響前炎性細(xì)胞因子mRNA的穩(wěn)定性,使得其水平下降。另外它還可以通過(guò)抑制核因子-κB(NF-κB)的激活,從而抑制內(nèi)毒素性ALI大鼠模型的肺泡巨噬細(xì)胞釋放TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-8等前炎性細(xì)胞因子,減少使白細(xì)胞聚集的炎性介質(zhì)和黏附分子,減輕炎癥反應(yīng)。 TNF-a、IL-1、IL-6、IL-10等細(xì)胞因子在重癥肺炎的發(fā)生發(fā)展的作用不可忽略。如何針對(duì)重癥肺炎時(shí)出現(xiàn)的炎性/抗炎失衡進(jìn)行深入研究,尋求治療新途徑是目前人類(lèi)面臨的課題,以往對(duì)細(xì)胞因子、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化劑治療的探索火熱,特別是細(xì)胞因子拮抗劑方面的研究,部分動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究中確實(shí)有較多結(jié)果提示炎癥細(xì)胞因子有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值,但在臨床試驗(yàn)中并沒(méi)有得到類(lèi)似結(jié)果。相反,還有一些使病死率增加的數(shù)據(jù),可見(jiàn),炎癥反應(yīng)是一個(gè)及其復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng),單純的拮抗炎癥細(xì)胞因子的治療不能取得滿意的療效。近年來(lái)隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展,利用siRNA干擾使靶基因沉默從而調(diào)節(jié)目的蛋白功能,顯示出巨大的應(yīng)用潛力。NF-κB因其在炎癥反應(yīng)中參與多種炎癥介質(zhì)基因的轉(zhuǎn)錄和調(diào)控,引起國(guó)內(nèi)外學(xué)者的極大關(guān)注和興趣,目前在一些疾病如類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的基礎(chǔ)研究及前期臨床研究中已經(jīng)取得一些成效。 NF-κB最初在鼠成熟B細(xì)胞和粒細(xì)胞瘤中發(fā)現(xiàn)并命名為細(xì)胞核Kappa輕鏈基因表達(dá)的調(diào)節(jié)子,后來(lái)研究發(fā)現(xiàn)其存在于多種細(xì)胞中。NF-κB通常以同源或異源二聚體p50/p65非活性形式存在于幾乎所有類(lèi)型細(xì)胞的胞質(zhì),P65具有使調(diào)控基因轉(zhuǎn)錄活性增強(qiáng)的作用,而P50則與調(diào)控基因結(jié)合的親和力有關(guān)。在靜態(tài)細(xì)胞,p50/p65二聚體在血漿中與I-κBa、I-κBβ和I-κBγ等NF-κB抑制家族蛋白(Iκds)結(jié)合,隱藏p65與靶DNA結(jié)合的關(guān)鍵的氨基酸殘基,抑制NF-κB與靶DNA調(diào)節(jié)區(qū)的特異性結(jié)合。NF-κB在炎癥介質(zhì)的過(guò)度釋放中起著關(guān)鍵作用。炎癥反應(yīng)發(fā)生時(shí),前炎性因子TNF-a,IL-1β及脂多糖(LPS)等多種因素可誘導(dǎo)多種細(xì)胞如人外周血單核細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和肺組織的NF-κB的活化。IκBs的氨基末端第32,36位絲氨酸殘基從NF-κB-IκBs復(fù)合物中突起,很容易被IκBs蛋白激酶磷酸化,磷酸化的IκBs進(jìn)一步被蛋白酶降解,使NF-κB從NF-κB-IκBs復(fù)合物中解離出并轉(zhuǎn)位于細(xì)胞核,與相應(yīng)的靶基因結(jié)合,調(diào)節(jié)靶基因的轉(zhuǎn)錄。有報(bào)道NF-κB/Relp50和p65亞單位在體內(nèi)對(duì)抑制膿毒血癥或感染性休克時(shí)的高死亡率起著重要作用。經(jīng)NF-κB調(diào)控的基因超過(guò)150余種,與免疫細(xì)胞的活化,T、B淋巴細(xì)胞的發(fā)育,炎性反應(yīng),細(xì)胞凋亡等多種細(xì)胞活動(dòng)有關(guān),更與多種炎癥介質(zhì)的相關(guān)基因的表達(dá)有關(guān),如炎性蛋白質(zhì)包括單核細(xì)胞趨化因子MCP-1,MCP-2,MCP-3;巨噬細(xì)胞炎性蛋白MIP-1a,MIP-1b,MIP-2;細(xì)胞因子TNF-a,IL-1β,IL-8;趨化因子IL-8和誘導(dǎo)性一氧化氮合酶iNOS;黏附因子如細(xì)胞間黏附因子(ICAM-1)、血管細(xì)胞黏附因子(VCAM-1)和E選擇素等。 RNA干擾(RNA interference,RNAi)是正常生物體內(nèi)抑制特定基因表達(dá)的一種現(xiàn)象,是生物界一種古老而且進(jìn)化上高度保守的基因表達(dá)調(diào)節(jié)機(jī)制。其實(shí)質(zhì)是通過(guò)雙鏈RNA使目的mRNA降解,從而特異性地抑制目的蛋白表達(dá)。與常規(guī)的基因敲除、反義寡核苷酸和小分子阻斷劑相比,siRNA有明顯的優(yōu)勢(shì):基因敲除技術(shù)雖然很有效,但需要大量的人力和財(cái)力,同時(shí)致死變異可能阻礙胚胎發(fā)育;反義寡核苷酸和小分子阻斷劑雖然簡(jiǎn)單便宜,但穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性稍差;而siRNA不但有效而且特異性高,從而為研究大量基因的功能和廣泛應(yīng)用提供了保證。目前NF-κB在不同疾病中的重要作用以及與之相關(guān)的治療策略成為熱點(diǎn),尤其是利用siRNA技術(shù)對(duì)NF-κB相應(yīng)基因的沉默來(lái)改變其對(duì)目的基因的調(diào)控以及對(duì)炎性調(diào)控機(jī)制的進(jìn)一步探索,使得很多疾病有望得以控制,如移植、腫瘤、凋亡、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等方面的基礎(chǔ)研究已經(jīng)取得一些成效。盡管NF-κB和炎性反應(yīng)關(guān)系密切,可以增強(qiáng)多種炎性介質(zhì)如TNF-a、IL-1β、IL-8以及黏附因子的轉(zhuǎn)錄,且可被內(nèi)毒素、TNF-a、IL-1β所激活,但利用NF-κB的沉默來(lái)控制和治療肺炎方面的研究卻鮮有報(bào)道。從基因水平對(duì)肺炎進(jìn)行干預(yù)在理論上是一種很有潛力的新方法。 為了研究NF-κB p65基因在炎癥中的作用和地位,本課題選擇增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(EGFP)作為報(bào)告分子,利用化學(xué)合成方法合成3對(duì)針對(duì)NF-κB p65基因的siRNA,通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)篩選出干擾效果最佳的NF-κB p65 mRNA的siRNA序列,在體外培養(yǎng)的小鼠巨噬細(xì)胞株Ana-1中,擬通過(guò)RNAi技術(shù)沉默巨噬細(xì)胞NF-κB p65基因,探討對(duì)其下游多個(gè)對(duì)重癥肺炎發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切的細(xì)胞因子表達(dá)的影響,為重癥肺炎從基因?qū)用孢M(jìn)行防治提供理論依據(jù)。 方法 1、設(shè)計(jì)并合成NF-kB p65 siRNA。 美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫(kù)中尋找小鼠NF-kB p65的mRNA序列全長(zhǎng),根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行目標(biāo)序列選取,使用BLAST將潛在的序列和相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較,排除和其他編碼序列同源的序列,確定小鼠NF-kBp65的siRNA目標(biāo)基因序列。 2、細(xì)胞培養(yǎng)、瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NF-kB p65 siRNA。 Ana-1細(xì)胞用高糖的1640培養(yǎng)基加10%小牛血清進(jìn)行培養(yǎng),無(wú)需胰酶消化,直接吸管吹打即可傳代,選用指數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞六孔板鋪板。根據(jù)脂質(zhì)體Lipofectamine ~(TM)2000說(shuō)明書(shū)對(duì)siRNA和脂質(zhì)體用量進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn),以提高轉(zhuǎn)染效率。最終選用siRNA的濃度為50pmol,Lipofectamine ~(TM)2000體積為5ul作為每孔細(xì)胞的轉(zhuǎn)染劑量。將3對(duì)siRNA通過(guò)Lipofectamine ~(TM)2000共轉(zhuǎn)染Ana-1細(xì)胞株,通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光強(qiáng)度,挑選出轉(zhuǎn)染率最高的一對(duì)siRNA用于下一步實(shí)驗(yàn)。 3、轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-kB p65 mRNA表達(dá),Western blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NF-kB p65蛋白表達(dá)。 將轉(zhuǎn)染率最高的siRNA、陰性對(duì)照siRNA、陽(yáng)性對(duì)照siRNA通過(guò)轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入Ana-1細(xì)胞株,同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組(即無(wú)任何siRNA組),轉(zhuǎn)染24小時(shí)后利用RT-PCR方法進(jìn)行檢測(cè)各組NF-kB p65 mRNA的表達(dá);Western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞內(nèi)NF-kB p65蛋白的表達(dá)。 4、LPS刺激NF-kB p65基因干擾后和未干擾的巨噬細(xì)胞Ana-1,通過(guò)ELISA方法檢測(cè)兩者細(xì)胞上清中TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-10含量。 培養(yǎng)Ana-1細(xì)胞至指數(shù)生長(zhǎng)期,一組細(xì)胞經(jīng)NF-kB p65 siRNA干擾24小時(shí)后,另一組細(xì)胞未經(jīng)干擾,兩組同時(shí)予LPS刺激,通過(guò)ELISA方法檢測(cè)兩組細(xì)胞上清中與感染進(jìn)展關(guān)系密切的各細(xì)胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-10含量的變化。 結(jié)果 1、細(xì)胞內(nèi)NF-kB p65的變化 NF-kB p65 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h后,RT-PCR結(jié)果顯示:ANA-1細(xì)胞未經(jīng)LPS刺激時(shí),沉默組與對(duì)照組相比NF-kB p65 mRNA表達(dá)顯著降低(0.483±0.085vs.0.903±0.069),具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),而陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組與空白組相比較,無(wú)顯著差異(P=0.712,P=0.358)。LPS刺激ANA-1細(xì)胞后,沉默組與對(duì)照組相比NF-kB p65 mRNA表達(dá)顯著降低(0.404±0.068 vs.1.067±0.064),具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),而陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組與空白組相比較,無(wú)顯著差異(P=0.346,P=0.361)。 NF-kB p65 siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞24h后,Westem blot結(jié)果顯示:ANA-1細(xì)胞未經(jīng)LPS刺激時(shí),沉默組與對(duì)照組相比NF-kB p65蛋白表達(dá)顯著降低(0.429±0.087vs.0.889±0.059),具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.000),而陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組與空白組相比較,無(wú)顯著差異(P=0.271,P=0.360)。LPS刺激ANA-1細(xì)胞后,沉默組與對(duì)照組相比NF-kB p65蛋白表達(dá)顯著降低(0.589±0.107 vs.1.074±0.059),具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000),而陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組與空白組相比較,無(wú)顯著差異(P=0.523,P=0.809)。 2、Ana-1細(xì)胞NF-kB p65基因沉默后TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-10動(dòng)態(tài)變化TNF-a:LPS刺激后4h、12h、24h TNF-a表達(dá)量增多,較未刺激時(shí)(0h)有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01),刺激后12h出現(xiàn)峰值,RNA干擾組TNF-a表達(dá)量相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(除0h外)較對(duì)照組均有不同程度降低(P＜0.05)。IL-1β:LPS刺激后4h、12h、24h IL-1β表達(dá)量增多,較未刺激時(shí)(0h)有明顯差異(P＜0.05或P＜0.01),刺激后12h出現(xiàn)峰值,RNA干擾組IL-1β表達(dá)量相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(除0h外)較對(duì)照組不同程度降低(P＜0.05)。 IL-6:LPS刺激后4h、12h、24h IL-6表達(dá)量增多,較未刺激時(shí)(0h)有顯著差異(P＜0.01),刺激后12h出現(xiàn)峰值,RNA干擾組相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)(除0h外)IL-6表達(dá)量較對(duì)照組均有顯著差異(P＜0.05或P＜0.01)。 IL-10:LPS刺激后4h、12h、24h IL-10表達(dá)量增多,較未刺激時(shí)(0h)有差異(P＜0.05或P＜0.01),RNA干擾后12h、24h IL-10表達(dá)量較對(duì)照組增多(P＜0.05),其余時(shí)間點(diǎn)未見(jiàn)明顯差異。 結(jié)論 本研究發(fā)現(xiàn): 1、通過(guò)RNAi技術(shù)沉默巨噬細(xì)胞Ana-1 NF-kB p65基因,24h后用RT-PCR與Western blot方法檢測(cè)LPS刺激組與LPS未刺激組NF-kB p65的表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)無(wú)論LPS刺激與否,沉默組與對(duì)照組相比,NF-kB p65表達(dá)都出現(xiàn)顯著降低。即采用RNAi技術(shù)沉默Ana-1 NF-kB p65基因,24小時(shí)即可基本抑制其表達(dá)。 2、Ana-1細(xì)胞NF-kB p65基因沉默24h后給予LPS(1ug/m1)刺激,通過(guò)ELISA方法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(0h、4h、12h、24h)細(xì)胞上清中TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-10的含量,并與未沉默組相對(duì)照,發(fā)現(xiàn)經(jīng)NF-kB p65基因沉默的Ana-1細(xì)胞受LPS刺激后促炎因子TNF-a、IL-1β、IL-6的表達(dá)明顯減少,抑炎因子IL-10的表達(dá)增多。 3、NF-kB p65對(duì)早期炎癥細(xì)胞因子TNF-a、IL-1β、IL-6、IL-10的表達(dá)具有調(diào)控作用。
【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類(lèi)號(hào)】：R563.1;R459.7
【目錄】：
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【參考文獻(xiàn)】
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【共引文獻(xiàn)】
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6 朱瑞芳;樂(lè)勝;馬中富;劉志紅;;p38 MAPK抑制劑對(duì)膿毒癥大鼠肝損傷的保護(hù)作用[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2006年07期
7 楊曉娟;王淑賢;李佚妹;左濤;;血液凈化治療多器官功能障礙綜合征的臨床療效分析[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2007年S1期
8 周偉;新生兒全身炎癥反應(yīng)綜合征[J];實(shí)用兒科臨床雜志;2004年02期
9 姜巍;安志紅;羅利;劉新橋;稱(chēng)匡;楊錫燕;牛莉;;參麥注射液參與治療全身炎癥反應(yīng)綜合征1108例臨床療效觀察[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2006年08期
10 紀(jì)樹(shù)國(guó),張波,于紅,王東;重癥SARS與SIRS-MODS關(guān)系的思考[J];心肺血管病雜志;2004年02期
中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條
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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條
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2 張楠;活血清下法對(duì)小腸缺血再灌注大鼠腸道免疫屏障的影響[D];天津醫(yī)科大學(xué);2006年
3 張?jiān)平?血必凈注射液對(duì)小腸缺血再灌注大鼠腸道免疫屏障的影響[D];山東中醫(yī)藥大學(xué);2008年
4 劉熾;清心培土法對(duì)特應(yīng)性皮炎患者IL-2/TNF-α及其受體的影響和療效評(píng)價(jià)[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年
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7 王宇歆;涼血活血方有效組分治療腹腔感染性疾病的實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年
8 馬俊勛;嚴(yán)重創(chuàng)傷后胰島素強(qiáng)化治療臨床實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年
中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條
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3 劉靖;潰結(jié)湯對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎治療作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年
4 許必芳;鼻淵舒口服液對(duì)治療實(shí)驗(yàn)性急性鼻竇炎大鼠作用機(jī)理的研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2005年
5 孫振濤;腦死亡模型建立的麻醉管理及肺保護(hù)的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2005年
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7 陳玉珍;抗人分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑和白介素-28A單克隆抗體的制備與鑒定[D];汕頭大學(xué);2006年
8 黃有成;創(chuàng)傷、嚴(yán)重膿毒癥和MODS免疫調(diào)理治療的臨床研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2006年
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10 徐建波;針對(duì)TLR4基因的短發(fā)夾結(jié)構(gòu)表達(dá)對(duì)RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用[D];華中科技大學(xué);2006年
【相似文獻(xiàn)】
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10 萬(wàn)鈞;中藥（強(qiáng)脊1號(hào)）對(duì)活動(dòng)期強(qiáng)直性脊柱炎作用的臨床研究[D];中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院;2006年
本文關(guān)鍵詞：RNAi沉默NF-kB p65對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
本文編號(hào)：235075
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