【摘要】：研究目的急性呼吸道感染(acute respiratory tract infection,ARTI)是人類致病和致死的最主要原因之一,病原學(xué)復(fù)雜[1]。呼吸道病毒作為重要的病原體,感染力強、傳播快、潛伏期短、發(fā)病急[2],如果未能及時明確病原體,容易造成病情迅速進展及抗生素濫用�？焖贉蚀_的病原學(xué)分析不僅是確定臨床診斷的重要依據(jù),也是合理選擇治療方案的基礎(chǔ)。加強呼吸道疾病病原學(xué)診斷意識,對于呼吸道感染性疾病的正確診治及有效防止交叉感染和抗生素濫用至關(guān)重要。本研究收集解放軍三0七醫(yī)院住院和門診呼吸道感染患者的咽拭子標本,對流感病毒(influenza virus,IFV)及其亞型、副流感病毒(parainfluenza virus,PIV)及其亞型、人偏肺病毒(human metapneumovirus,HMPV)、呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)及其亞型、人博卡病毒(human bocavirus,HBOV)、鼻病毒(human rhinovirus,RHV)、腺病毒(adenovirus,ADV)和人冠狀病毒(human coronavirus,h Co V)進行檢測,研究本院呼吸道病毒在感染性疾病中的分布及變異規(guī)律,探討呼吸道病毒感染及流行特點變化,快速準確地鑒別病原微生物,動態(tài)掌握呼吸道病毒的分布特征、變異趨勢,旨為本地區(qū)呼吸道感染性疾病流行病學(xué)及預(yù)防性干預(yù)措施的制定,應(yīng)對新發(fā)、突發(fā)呼吸道感染性疾病及呼吸道傳染性疾病傳播,制定正確的控制方案提供有力的科學(xué)根據(jù)。為呼吸道感染患者早期明確病原診斷及個體化針對性治療提供實驗室依據(jù)。以有效避免抗生素濫用導(dǎo)致的二重感染和交叉感染,進一步提高呼吸道感染性疾病的診療水平。研究對象收集2015年9月至2016年12月解放軍三0七醫(yī)院發(fā)熱呼吸道癥候群患者咽試子1080份,檢測8種呼吸道病毒及亞型。其中男性584份,女性496份,患者年齡在12~83歲之間,中位年齡42歲,其中發(fā)熱門診387份,住院患者693份。本研究所收集發(fā)熱呼吸道癥候群病例納入標準符合國家重大傳染病防治科技重大專項傳染病監(jiān)測技術(shù)平臺項目“發(fā)熱呼吸道癥候群監(jiān)測技術(shù)方案”,采集病例信息時使用統(tǒng)一標準問卷(見附件1)。門診患者發(fā)病時間按季節(jié)分為秋季(9月~11月)、冬季(第一年12月~第二年2月)、春季(3月~5月)和夏季(6月~8月);住院病房患者涵蓋內(nèi)科各系統(tǒng)疾病,以惡性血液病住院患者為主。臨床診斷標準參考《內(nèi)科學(xué)》(第8版)。1.咽拭子留取門診患者均在當天留取咽試子樣本,住院患者于入院時或首次發(fā)熱的72h內(nèi)采集咽拭子,咽拭子按照運輸和保存規(guī)定嚴格操作。送檢樣本附送檢單(見附件2)。樣本預(yù)處理后,提取病毒核酸,核酸提取成功后進行檢測。2.病毒及亞型檢測使用Real-time PCR和普通PCR方法對呼吸道病毒及亞型進行檢測。各病毒及亞型按照各自的引物探針、反應(yīng)體系和擴增條件擴增,針對不同情況對PCR產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳和測序。根據(jù)結(jié)果曲線、反應(yīng)條帶及測序結(jié)果對陽性結(jié)果進行判定。3.病毒及亞型檢測結(jié)果分析通過分析呼吸道病毒檢測結(jié)果,探討8種呼吸道病毒及亞型構(gòu)成比和檢出率與時間的關(guān)系,呼吸道病毒檢出率與性別、季節(jié)、年齡、住院時間等因素的關(guān)系,呼吸道病毒檢出率與不同的呼吸道感染性疾病和其他原發(fā)病的關(guān)系,呼吸道病毒與其他病原體合并感染等情況,從而了解呼吸道病毒的流行趨勢、易感因素和對疾病發(fā)生發(fā)展的影響。4.統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進行分析,計數(shù)資料采用例數(shù)和百分比,計數(shù)資料采用卡方檢驗,行列表卡方檢驗中兩兩比較時采用Bonferroni法校正檢驗水準,P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。實驗方法實驗結(jié)果1.第一部分發(fā)熱呼吸道癥候群患者呼吸道病毒病原學(xué)分布特征(1)8種呼吸道病毒及亞型檢測結(jié)果共檢測發(fā)熱呼吸道癥候群病人咽試子1080份,其中男性584份,女性496份,患者年齡在12~83歲之間,中位年齡42歲,共檢出陽性樣本429例,總檢出率39.72%。單一病毒感染414例,IFVA陽性158例,IFVB陽性122例,RHV陽性45例,PIV-3陽性36例,h Co V陽性17例,RSVB陽性12例,ADV陽性8例,PIV-4和HMPV陽性各5例,HBOV陽性4例,PIV-1和RSVA陽性各1例,兩種病毒混合感染15例。未出現(xiàn)三種及三種以上病毒混合感染。(2)不同月份、季節(jié)呼吸道病毒檢出率的變化不同時間呼吸道病毒檢出率不同,2016年3月檢出率最高,為62.50%,2016年7月檢出率最低,為18.75%,冬春季呼吸道病毒檢出率明顯高于夏秋季。(3)不同月份呼吸道病毒陽性構(gòu)成比情況不同月份檢出呼吸道病毒的種類和陽性構(gòu)成比不同,分別檢出4~9種不同的呼吸道病毒及亞型。(4)不同月份IFV檢出率的變化、IFVA兩種亞型構(gòu)成比IFVA和IFVB最高檢出率均為2016年3月,分別為26.04%和29.17%,IFVA最低檢出率在2016年7月,為4.17%,IFVB最低檢出率在2016年9月,為1.67%。2016年1月H3N2亞型構(gòu)成比最高為75.00%,2016年7月和2016年10月無H3N2亞型檢出。H1N1亞型趨勢與H3N2亞型趨勢相反。(5)PIV各亞型構(gòu)成比和不同月份PIV檢出率的變化PIV-3占全部PIV陽性樣本的86.67%,PIV-2未檢出。PIV-3在各月份均有檢出,檢出率最高在2016年6月,為6.67%,檢出率最低在2015年12月,為1.45%。(6)不同時間RHV檢出率的變化2016年11月檢出率最高為7.81%,2016年1月檢出率最低為2.27%,2016年6月和7月未檢出RHV陽性樣本。2.第二部分門診發(fā)熱患者呼吸道癥候群病毒病原學(xué)分布特征(1)8種呼吸道病毒及亞型檢測結(jié)果對發(fā)熱呼吸道癥候群門診部分277例ARTI患者的咽拭子標本進行分析,共檢出陽性樣本138例,總檢出率49.82%,單一病毒感染134例,IFVA陽性61例,IFVB陽性57例,RHV和PIV-3陽性各5例,h Co V陽性3例,ADV陽性2例,HMPV陽性1例,兩種病毒混合感染4例,未出現(xiàn)三種及三種以上病毒混合感染。(2)性別與呼吸道病毒檢出率的關(guān)系男性呼吸道病毒檢出率為46.03%;女性檢出率為52.98%,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)不同呼吸道感染疾病與呼吸道病毒檢出率的關(guān)系急性上呼吸道感染檢出率為51.63%,肺炎檢出率為49.21%,急性支氣管炎檢出率為40.00%,組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)(4)季節(jié)與呼吸道病毒檢出率的關(guān)系秋季檢出率為29.51%;冬季檢出率為66.67%;春季檢出率為57.32%,夏季檢出率為23.68%,冬春季呼吸道病毒檢出率高于夏秋季(P0.05)。(5)不同年齡段呼吸道病毒檢測結(jié)果18~39歲檢出率為47.62%,40~59歲檢出率為56.19%,≥60歲檢出率為36.00%。(6)不同月份IFV檢出率的變化、IFVA兩種亞型構(gòu)成比IFV在2016年1月檢出率最高,2015年9月和2016年7月、8月未檢出IFVB,2016年2月H3N2亞型構(gòu)成比最高為80.00%,部分月份無H3N2亞型檢出,H1N1亞型趨勢與H3N2亞型趨勢相反。(7)臨床血常規(guī)白細胞檢查結(jié)果6名呼吸道病毒陽性結(jié)果患者NEUT%70%,其余132名呼吸道病毒陽性結(jié)果患者NEUT%平均為(69.08±0.04)%。3.第三部分惡性血液病患者呼吸道感染病毒病原學(xué)分布特征(1)8種呼吸道病毒及亞型檢測結(jié)果對發(fā)熱呼吸道癥候群惡性血液病患者部分361例咽拭子進行分析,共檢出陽性樣本98例,總檢出率27.15%。IFVA陽性28例,其PIV-3陽性26例,RHV陽性24例,IFVB陽性9例,h Co V陽性6例,PIV-4陽性3例,RSVB陽性1例,PIV-3與RHV混合感染1例,未出現(xiàn)三種及三種以上病毒混合感染。(2)8種呼吸道病毒與HCMV、EBV復(fù)合感染情況98例呼吸道病毒檢測結(jié)果陽性的患者中有12例與HCMV和(或)EBV復(fù)合感染,未出現(xiàn)2種及2種以上呼吸道病毒與HCMV和EBV共同感染。(3)呼吸道病毒與其他病原體合并感染情況單純呼吸道病毒感染83例,與其他呼吸道病原體混合感染15例,其他病原體包括G-性桿菌、G+性球菌、支原體和真菌。(4)不同年齡段呼吸道病毒檢測結(jié)果12~16歲呼吸道病毒陽性率為45.95%,17~59歲陽性率為22.30%,≥60歲陽性率為41.30%。12~16歲年齡組和≥60歲年齡組檢出率顯著高于17~59歲年齡組(P0.05)。(5)不同原發(fā)病呼吸道病毒檢測結(jié)果98例呼吸道病毒檢測結(jié)果陽性患者中,急性髓系白血病患者所占比例最大。(6)住院天數(shù)與呼吸道病毒感染的關(guān)系≤7天組呼吸道病毒陽性率為11.21%,8~14天組陽性率為22.89%,15~28天組陽性率為34.52%,≥28天組陽性率為43.68%。不同住院時間呼吸道病毒感染率有差異(P0.05),≥28天組呼吸道病毒感染率顯著增高實驗結(jié)論1.IFV是2015年9月~2016年12月期間引起發(fā)熱呼吸道癥候群患者發(fā)病的主要呼吸道病毒,冬春季為呼吸道病毒特別是IFV的高發(fā)季節(jié),H3N2亞型檢出比例較H1N1亞型高;2.呼吸道病毒是2015年8月~2016年9月發(fā)熱門診成人急性呼吸道感染患者的主要病原體;3.呼吸道病毒是2015年8月~2016年12月間引起惡性血液病患者急性呼吸道感染的主要病原體之一,易合并其他病原體感染;4.兒童和老年惡性血液病患者是呼吸道病毒的易感人群;5.住院時間延長是惡性血液病患者急性呼吸道感染的重要危險因素;6.不同惡性血液系統(tǒng)原發(fā)病患者的呼吸道病毒易感性不同;7.Real-time PCR法、PCR法能夠快速準確檢測呼吸道病毒。
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【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R56
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本文編號：2331163