【摘要】：第一章Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在肺功能正常吸煙者及慢性阻塞性肺疾病患者肺部組織中的表達(dá)及意義 目的：本研究旨在觀察Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell, Treg細(xì)胞)在肺功能正常的吸煙者和吸煙的穩(wěn)定期慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者肺組織中的表達(dá),并探討Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在COPD肺部炎癥反應(yīng)及獲得性免疫反應(yīng)發(fā)生機(jī)制中的作用。 方法：將需手術(shù)治療的周圍型肺癌患者分為肺功能正常非吸煙組(N組,10例)、肺功能正常吸煙組(S組,10例)、吸煙穩(wěn)定期COPD組(COPD組,10例)。于手術(shù)切除標(biāo)本中選取距肺癌病灶5cm以上的新鮮正常肺組織,蘇木精-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色觀察各組平均肺泡面積,免疫組化法檢測CD4+T細(xì)胞、Foxp3+T細(xì)胞在肺泡壁的表達(dá),熒光定量PCR法和Western blot法檢測肺組織勻漿中Foxp3mRNA和蛋白表達(dá)水平,分析Foxp3+T細(xì)胞與肺泡肺氣腫破壞和肺功能降低的相關(guān)關(guān)系。 結(jié)果：COPD組平均肺泡面積(152345±24497μ m2)明顯大于S組(106551±15815μ m2)和N組(50708±14125μ m2),S組與N組對(duì)比也有明顯差異(P值均0.05)。肺泡壁CD4+T細(xì)胞數(shù)在COPD組(22±8個(gè)/m)明顯高于S組(16±6個(gè)/mm)和N組(6±2個(gè)/mm)；Foxp3+T細(xì)胞在COPD組(3±1個(gè)/mm)明顯低于S組(4±1個(gè)/mm)和N組(5±1個(gè)/mm),并且S組明顯低于N組(P值均0.05)。肺組織勻漿中Foxp3的mRNA表達(dá)水平在COPD組(0.431±0.109)明顯降低,其次是S組(0.930±0.413),在N組為1.391±0.312(P值均0.05)。肺組織勻漿Foxp3蛋白表達(dá)水平與mRNA表達(dá)結(jié)果一致,在N組為0.824±0.180,S組0.504±0.218,COPD組0.307±0.051(P值均0.05)。肺泡壁上表達(dá)的Foxp3+細(xì)胞與CD4+細(xì)胞表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(R=-0.681,P0.001),與平均肺泡面積呈負(fù)相關(guān)(R=-0.797,P0.001)。肺組織勻漿中Foxp3mRNA和蛋白含量分別與FEV1%pred呈正相關(guān)(R=0.601,P0.001；R=0.573,P=0.001)。 結(jié)論：Foxp3+T細(xì)胞在肺功能正常吸煙者和穩(wěn)定期COPD患者肺部表達(dá)明顯減少,與肺泡壁肺氣腫破壞程度和肺功能降低密切相關(guān),提示Foxp3+T細(xì)胞減少參與了COPD肺部炎癥和獲得性免疫失調(diào)。 第二章調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺功能正常吸煙者和 不同分級(jí)慢性阻塞性肺疾病患者外周血的表達(dá)及意義 目的：本研究旨在觀察調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg細(xì)胞)核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3在肺功能正常吸煙者和不同分級(jí)慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)患者外周血中的表達(dá),并探討其意義。 方法：以病人外周血為研究對(duì)象,分為4組即肺功能正常非吸煙組(N組,20例)、肺功能正常吸煙組(S組,20例)、吸煙穩(wěn)定期COPD1-2級(jí)組(COPD1-2級(jí)組,20例),吸煙穩(wěn)定期COPD3-4級(jí)組(COPD3-4級(jí)組,20例)。收集病人外周血做熒光定量PCR,檢測Foxp3mRNA表達(dá)水平,分析其與COPD分級(jí)、肺功能降低的關(guān)系。 結(jié)果：外周血Foxp3的mRNA表達(dá)水平在COPD3-4組(0.498±0.235)和COPD1-2組0.931±0.237)明顯降低,其次是S組(1.215±0.258),在N組表達(dá)最高(1.452±0.254),四組間兩兩比較均有差別(P值均0.05),并且Foxp3mRNA表達(dá)水平與FEV1%pred呈正相關(guān)關(guān)系(R=0.758,P0.001)。 結(jié)論：Foxp3mRNA表達(dá)水平在吸煙肺功能正常者和COPD病人體內(nèi)表達(dá)明顯降低,并且隨著COPD病情分級(jí)加重而降低更明顯,提示Foxp3+Treg細(xì)胞減少很可能與COPD病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。 第三章調(diào)節(jié)性T細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3單核苷酸多態(tài)性與慢性阻塞性肺疾病關(guān)聯(lián)的研究 目的：探討調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory T cell,Treg細(xì)胞)核轉(zhuǎn)錄因子Foxp3單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphism, SNP)與慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)的關(guān)系,以及SNP出現(xiàn)的相關(guān)危險(xiǎn)因素。 方法：以病人外周血為研究對(duì)象,分為4組即肺功能正常非吸煙組(N組,61例)、肺功能正常吸煙組(S組,81例)、吸煙穩(wěn)定期COPD1-2級(jí)組(COPD1-2級(jí)組,65例),吸煙穩(wěn)定期COPD3-4級(jí)組(COPD3-4級(jí)組,117例),采用Taqman探針法熒光定量PCR對(duì)Foxp3基因四個(gè)位點(diǎn)rs2280883. rs3761548、rs3761549、rs5902434進(jìn)行基因分型。 結(jié)果：FOXP3基因四個(gè)SNP位點(diǎn)均符合哈迪-溫伯格(Hardy-Weinberg)遺傳平衡定律。SNP位點(diǎn)rs5902434在COPD3-4級(jí)組,COPD1-2級(jí)組,S組,N組中分布有差異(P0.05)。logistic多因素回歸分析發(fā)現(xiàn)攜帶-/-基因型個(gè)體罹患COPD1-2級(jí)和3-4級(jí)風(fēng)險(xiǎn)均降低(COPD1-2級(jí)：OR=0.278,95%CI=0.079-0.974;COPD3-4級(jí)：OR=0.235,95%CI=0.074-0.747)。-／-基因型對(duì)FEVl%pred=30-50的病人有保護(hù)作用(OR=0.222,95%CI=0.094-0.525);對(duì)FEV1/FVC50和FEV1/FVC=50-70的病人均有保護(hù)作用(FEV1/FVC50:OR=0.295,95%CI=0.130-0.666; FEV1/FVC=50-70:OR=0.337,95%CI=0.131-0.866).-/ATT基因型對(duì)FEV1%pred=30-50的病人有保護(hù)作用(OR=0.359,95%CI=0.150-0.863)。單倍體分析發(fā)現(xiàn)-單倍體對(duì)吸煙的非COPD者易感(OR=1.746,95%CI=1.048-2.914);-單倍體對(duì)FEV1%pred=30-50和FEV1/FVC50的病人均有保護(hù)作用(FEV1%pred=30-50:OR=0.582,95%CI=0.358-0.946; FEV1/FVC50:OR=0.622,95%CI=0.403-0.961).對(duì)吸煙史、年齡、BMI、民族因素綜合分析發(fā)現(xiàn),非漢族人群較漢族人群更容易出現(xiàn)-/ATT基因型(OR=2.277,95%CI=1.022-5.072)。 結(jié)論：FOXP3基因位點(diǎn)rs5902434與男性罹患COPD有關(guān),并且-/-基因型和-單倍體型對(duì)COPD病人及肺功能降低有保護(hù)作用；但吸煙和年齡因素并非該位點(diǎn)突變的影響因素。該結(jié)果提示Foxp3+Treg細(xì)胞單核苷酸多態(tài)性可能是COPD發(fā)病的上游危險(xiǎn)因素,其多態(tài)性不受吸煙和年齡等COPD危險(xiǎn)因素的影響。
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【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R563.9

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1 張飚;張p，

本文編號(hào)：2285457