【摘要】：哮喘（Asthma）作為一種慢性呼吸道疾病，正日益成為嚴(yán)重威脅人類健康的重大問題。令人遺憾的是，科學(xué)界對哮喘病的病因和發(fā)展過程至今還沒有完全認(rèn)識清楚，其病理機制也一直是醫(yī)學(xué)上的重要難題。 氣道是氣體進(jìn)出肺的通道。有哮喘的人呼吸道發(fā)炎，這使得呼吸道變腫脹也非常敏感。他們往往對某些吸入物質(zhì)反應(yīng)強烈。當(dāng)哮喘發(fā)生時，氣道周圍的肌肉收緊，氣道縮小，造成流入肺部的氣體不足，甚至腫脹會進(jìn)一步惡化，使氣道更窄。 氣道平滑肌的增生則是哮喘的主要發(fā)病癥狀之一，有報道證明在哮喘個體中肌細(xì)胞的增生速度遠(yuǎn)高于非哮喘個體。雖然皮質(zhì)類固醇通過減少細(xì)胞周期蛋白D1的表達(dá)以及視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白磷酸化，能抑制正常氣道中肌細(xì)胞的增生，但是在哮喘個體中卻沒有效果。盡管做了如此多的研究，但是關(guān)于氣道平滑肌增生還有很多問題額待解決。 氣道上皮組織在呼吸道系統(tǒng)的防御中起著至關(guān)重要的作用，氣道上皮組織通過其攔截系統(tǒng)阻止外源有害刺激對氣道上皮的損害，從而保護(hù)呼吸道，上皮脫落(特別是在痰中有成團(tuán)的上皮細(xì)胞時)，以及支氣管中的上皮脫落是上皮受損的明顯現(xiàn)象，在接下來的上皮修復(fù)過程中，氣道上皮會分泌促進(jìn)細(xì)胞生長、遷移的信號因子，這些因子中很多都能刺激氣道平滑肌的增生。 氣道中無論是氣道平滑肌還是氣道上皮在哮喘發(fā)生時都有顯著的病理特征，但是兩者之間存在怎樣的信號交流，目前還沒有完整的理論解釋。目前研究人員做了大量關(guān)于氣道平滑肌的研究，但是關(guān)于氣道上皮組織對氣道平滑肌增生的影響尚未有報道。本課題組在體外用多聚左旋精氨酸(poly—L—arginine，PLA)構(gòu)建氣道上皮細(xì)胞（AEC）損傷模型，并與正常平滑肌細(xì)胞(ASMC)共培養(yǎng)（在哮喘發(fā)病過程中，嗜酸性粒細(xì)胞是主要的效應(yīng)細(xì)胞，嗜酸性粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)是其主要效應(yīng)成分。PLA作為ECP的類似物，可以在體外模擬細(xì)胞受損傷的狀態(tài)）。而為了更真實地模擬哮喘發(fā)生時氣道上皮組織的狀況，本課題還在共培養(yǎng)過程中對AEC施加外部壓力。最后檢測共培養(yǎng)系統(tǒng)中ASMC增殖情況，從而探索病理狀態(tài)下氣道上皮組織對氣道平滑肌增生的影響作一個初步探索： ①為了構(gòu)建體外模型：本課題在體外收集并培養(yǎng)AEC和ASMC，并用形態(tài)學(xué)和免疫熒光學(xué)方法對收集到的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。鑒定結(jié)果表明，用組織塊貼壁法獲得了大量的原代ASMC，用胰蛋白酶冷消化法獲得了大量的AEC。 ②PLA對大鼠氣道上皮細(xì)胞活性影響研究：設(shè)置0-50μM（每5μM濃度差為一個間隔梯度）共10個濃度梯度的PLA對AEC進(jìn)行處理，處理時間為24h。然后用臺盼藍(lán)進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。最后結(jié)果顯示，與對照組比較，即使小濃度的PLA（5μM）對氣道上皮細(xì)胞也有明顯的毒性作用（P0.01）.而在PLA濃度大于20μM時，毒性作用的變化不再明顯（PLA濃度20μM時各組分之間的P0.05）. ③AEC損傷模型構(gòu)建：對AEC用高濃度（50μM）PLA進(jìn)行短時間處理（10分鐘），構(gòu)建氣道上皮細(xì)胞損傷模型。 ④共培養(yǎng)裝置的設(shè)計：為了在共培養(yǎng)時能對氣道上皮細(xì)胞進(jìn)行單獨施壓，我們改進(jìn)了共培養(yǎng)的壓力裝置。最后，我們在設(shè)計的裝置能提供我們需要的穩(wěn)定壓力（14KPa）。 ⑤本實驗設(shè)置5個實驗組： ASMC單獨培養(yǎng)為對照組（A）、ASMC與AEC共培養(yǎng)（B）、ASMC與受損傷的AEC共培養(yǎng)（C）、 ASMC與未受損傷的AEC共培養(yǎng)并施加外部壓力(D)、ASMC與受損傷的AEC共培養(yǎng)并施加外部壓力(E) ⑥共培養(yǎng)條件下ASMC增值檢測：每12h用MTT測量一次ASMC的生長OD值，共取5個時間點，既12h、24h、36h、48h、60h分別測量一次每組細(xì)胞的OD值，用軟件進(jìn)行相關(guān)的分析結(jié)果顯示：60h時，BCDE組與A組以及BCDE組之間p均0.01.E組的OD最大， E組中ASMC的生長速度明顯高于其他組。而E組與D組以及E組與C組比較都有顯著性差異（p0.01）,說明了外部壓力和AEC損傷對ASMC的增值有獨立的作用。 我們最后得出結(jié)論，在體外研究中，氣道上皮在損傷和接受外部壓力刺激后，加劇了氣道平滑肌的增生。
[Abstract]:Asthma (Astma), as a chronic respiratory disease, is becoming a serious threat to human health. Unfortunately, the scientific community has not yet fully recognized the etiology and development of asthma, and its pathological mechanism has always been an important issue in medicine. The airway is gas in and out of the lungs Channel: Inflammation of the respiratory tract of a person with asthma, which causes the respiratory tract to become swollen and swollen. Sensitive. They tend to react to certain inhaled substances Severe. When asthma occurs, the muscles around the airway tighten, the airway is deflated, causing insufficient gas flowing into the lungs, and even swelling will further deteriorate, causing the airway More narrow. The proliferation of airway smooth muscle is one of the main symptoms of asthma. It is reported that myocyte proliferation is much higher in asthmatic individuals. Non-asthmatic individuals. Although corticosteroids inhibit myocyte proliferation in normal airways by reducing the expression of cyclin D1 and phosphorylation of retinoblastoma proteins, in asthma individuals No effect. Despite so many studies, there are many questions about airway smooth muscle proliferation The upper airway of the airway plays a vital role in the defense of the respiratory tract system, which prevents the damage to the airway epithelium through its intercepting system, thus protecting the respiratory tract and the epithelium (especially in the sputum). When the epithelial cells of the group), and the epithelial exfoliation in the bronchi are the obvious phenomena of epithelial damage, in the next epithelial tissues, the airway epithelium will secrete signaling factors that promote cell growth and migration, and many of these factors can stimulate the epithelial cells. Airway smooth muscle hyperplasia, airway smooth muscle or airway epithelium have significant pathological characteristics in the occurrence of asthma, but there is signal communication between them. There is no complete theoretical explanation. Now researchers have done a lot of research on airway smooth muscle, but on the airway smooth muscle is smooth In vitro, we constructed airway epithelial cell (AEC) injury model with poly L arginine (PLA) in vitro and co-cultured with normal smooth muscle cells (ASMC) (acidophilic in the course of asthma). Grangranulocytes are the main effector cells, eosinophil cationic proteins (E CP) is its main effect component. As an ECP analog, PLA can be used in vitro The subject is also co-cultured in order to simulate the condition of the airway epithelium in the event of asthma more realistically. In order to explore the proliferation of ASMC in co-culture system, the proliferation of ASMC in co-culture system was detected. In order to build an in vitro model: this topic is to build an in vitro model: AEC and ASMC were collected and cultured, and morphology and immunofluorescence were used The results showed that a large amount of primary ASMC was obtained by tissue block attachment, and pancreatic protein was used. A large number of AEC was obtained by the enzyme-cold digestion method. The effects of PLA on the activity of airway epithelial cells in rats were studied: a total of 10 concentrations of PLA with a concentration of 0-50. m u.M (one interval gradient per 5. mu.M concentration) were set. Processing AEC, processing time Cell counts were then performed with trypan blue. The results showed that, compared with the control group, even small concentrations of PLA (5. mu.M) were fine for the airway epithelium. There were also significant toxic effects on the cells (P0.01). However, when the concentration of PLA was greater than 20. m u.M, the change of toxicity was no longer significant (PLA concentration). P0. 05) between the components at 20 & mu; M. AEC damage model construction: AEC high concentration (50. mu.M) PLA for a short time Histology (10 minutes) to construct an airway epithelial cell damage model. Design of a co-culture device: To be able to treat the airway during co-culture The skin cells were pressed separately, and we improved the pressure device for co-culture. Finally, we're setting up The device provided by the invention can provide the stable pressure required by us (14KPa), and five experimental groups are arranged in the experiment: the ASMC is independently cultured as a control group (A), the ASMC is co-cultured with the AEC (B), the ASMC is co-cultured with the damaged AEC (C), ASMC co-culture with undamaged AEC and external pressure applied (D) ASMC was co-cultured with the damaged AEC and applied external pressure (E) under co-culture conditions for ASMC value-added detection: the growth OD value of an ASMC was measured by MTT every 12h, and 5 time points were taken, not only 12h, The OD values of each group of cells were measured at 24h, 36h, 48h and 60h, respectively. The correlation analysis results showed that when 60h, the p between the group A and the group A and the group B was 0. 0. 1. The OD of group E was the largest, and the growth rate of ASMC in group E was significantly higher than that in other groups. It is shown that external pressure and AEC damage have an independent effect on the value-added value of ASMC. We conclude that in vitro research
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號】：R562.25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 萬小健,周欽海,傅誠章,張國樓;氯胺酮舒張氣道平滑肌作用機制的研究進(jìn)展[J];臨床麻醉學(xué)雜志;2002年12期

2 趙麗敏,徐永健,熊盛道,張珍祥,程東軍;反義Kv1·5寡核苷酸轉(zhuǎn)染對人氣道平滑肌增殖的影響[J];中華內(nèi)科雜志;2005年09期

3 Barnes PJ;凌亦凌;;肺的第三神經(jīng)系統(tǒng):生理學(xué)及臨床展望[J];國際呼吸雜志;1985年02期

4 陳奮華;陳壯桂;陳虹;紀(jì)經(jīng)智;陳巖峰;彭碧秀;鹽田清二;;哮喘患者氣道網(wǎng)狀基底膜厚度與氣道壁重塑相關(guān)性探討[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年07期

5 王超智;許繼德;白洪波;;改良組織塊消化法建立大鼠氣道平滑肌細(xì)胞模型[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2009年14期

6 白燕;熊瑛;;氣道平滑肌支氣管哮喘氣道重塑研究進(jìn)展[J];中華哮喘雜志(電子版);2009年04期

7 陳海兵,修清玉,羅文侗,石昭泉,顧明君;維生素K對氣道平滑肌作用的實驗研究及治療哮喘急性發(fā)作的臨床研究[J];中華結(jié)核和呼吸雜志;1997年03期

8 任光民,趙鳴武,唐朝樞;香煙煙霧提取物對兔氣道平滑肌細(xì)胞毒性損傷及對一氧化氮生成的影響[J];徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;1998年03期

9 白晶;劉先勝;徐永健;謝敏;倪望;;細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶對哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞周期的影響[J];中國呼吸與危重監(jiān)護(hù)雜志;2010年01期

10 石昭泉;氣道平滑肌細(xì)胞表現(xiàn)型在慢性哮喘中的作用[J];國外醫(yī)學(xué).呼吸系統(tǒng)分冊;1996年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 林燕萍;;氣道平滑肌與支氣管哮喘(摘要)[A];第五屆全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

2 林燕萍;;氣道平滑肌與支氣管哮喘[A];第五屆全國中西醫(yī)結(jié)合變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

3 張立文;劉持;向陽;劉惠君;劉彩霞;劉穎;郭縵;秦曉群;;整合素β4參與調(diào)節(jié)氣道上皮的Th1免疫炎癥通路[A];中南地區(qū)第八屆生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要匯編[C];2012年

4 萬力生;朱錦善;王霞靈;魯艷芳;范紅霞;邱靜宇;;喘敷靈巴布劑對哮喘大鼠氣道上皮癌基因c-fos表達(dá)的影響[A];第24屆全國中醫(yī)兒科學(xué)術(shù)研討會、中醫(yī)藥高等教育兒科教學(xué)研討會、兒科名中醫(yī)講習(xí)班論文匯編[C];2007年

5 亓慧娟;李艷麗;李鴻佳;董亮;;哮喘患者氣道上皮TSLP表達(dá)及激活DCs加重氣道炎癥的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第七屆全國哮喘學(xué)術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第三次大會論文匯編[C];2010年

6 李東培;才麗平;方秀斌;;哮喘豚鼠氣道上皮和BALF中NGF免疫反應(yīng)的變化[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

7 周勇;周慧芳;孫國瑛;謝輝;宋卓慧;管茶香;;EETs對脂多糖應(yīng)激的氣道上皮細(xì)胞增殖和凋亡的影響[A];傳承與發(fā)展，創(chuàng)湖南省生理科學(xué)事業(yè)的新高——湖南省生理科學(xué)會2011年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2011年

8 謝敏;程曉明;;辯題:哮喘是/不是一種氣道平滑肌疾病[A];中華醫(yī)學(xué)會第七屆全國哮喘學(xué)術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第三次大會論文匯編[C];2010年

9 何麗;張惠蘭;趙建平;張波;;哮喘模型小鼠氣道上皮鈣激活氯離子通道蛋白3與氣道炎癥的關(guān)系[A];中華醫(yī)學(xué)會第七屆全國哮喘學(xué)術(shù)會議暨中國哮喘聯(lián)盟第三次大會論文匯編[C];2010年

10 管茶香;張長青;秦曉群;楊芝春;羅自強;孫秀泓;;血管活性腸肽在氣道上皮應(yīng)激性損傷修復(fù)中的作用探討[A];中國生理學(xué)會第21屆全國代表大會暨學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2002年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 姜之炎 吳玉晶;小兒敷貼粉可改善哮喘大鼠氣道反應(yīng)[N];中國醫(yī)藥報;2005年

2 成吉;“放倒”哮喘有好招[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

3 楊鋒;使用喘息停 須防心跳停[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2000年

4 是明啟;硝笨吡啶用途廣[N];廣東科技報;2000年

5 健康時報特約記者　 劉業(yè)奇;小兒哮喘如何使用激素？[N];健康時報;2006年

6 魏開敏;護(hù)衛(wèi)哮喘患兒的『圣斗士』[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2006年

7 董飛俠;五種武器打敗哮喘[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2007年

8 毛杉杉;β_(2)—受體激動劑申請豁免后可以吸入方式使用[N];中國醫(yī)藥報;2008年

9 唐夕美 唐夕坤;治療咳嗽變異性哮喘[N];農(nóng)村醫(yī)藥報（漢）;2005年

10 中國工程院院士 中華醫(yī)學(xué)會呼吸分會主任委員 鐘南山 呼吸內(nèi)科學(xué)副教授 李靖;咳嗽性哮喘的診斷及治療[N];中國老年報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 宋愛晶;大氣污染物二氧化硫?qū)Υ笫笙∧Ｐ蜌獾榔交∩锪W(xué)行為影響的研究[D];重慶大學(xué);2011年

2 龍皎月;哮喘易感基因ADAM33對氣道平滑肌細(xì)胞力學(xué)行為的影響[D];重慶大學(xué);2012年

3 藍(lán)海兵;腫瘤抑制基因PTEN對人氣道平滑肌細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

4 高海鵬;β_2腎上腺素能受體的變化在支氣管哮喘發(fā)病中的作用及其分子機制[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1996年

5 蔣雄斌;CD8～+T細(xì)胞在呼吸道合胞病毒誘導(dǎo)的哮喘中的作用研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

6 白晶;ERK信號通路對慢性哮喘大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控作用[D];華中科技大學(xué);2007年

7 劉穎格;反義c-myc寡核苷酸、反義c-myc真核表達(dá)載體和反義c-myc重組腺病毒載體在大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

8 王英;Ryanodine及inositol-1，4，， 5-triphosphate受體在氣道平滑肌中的表達(dá)及其在哮喘氣道重塑中的作用研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2004年

9 王光鎖;供體脾細(xì)胞聯(lián)合抗CD154輸注誘導(dǎo)小鼠肺移植慢性排斥反應(yīng)免疫耐受基因表達(dá)譜研究[D];華中科技大學(xué);2009年

10 王凱;鼠抗人CCR3抗體的制備以及對哮喘治療作用的研究[D];浙江大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 謝鵬;模擬病理狀態(tài)下氣道上皮組織對氣道平滑肌增生的影響研究[D];重慶大學(xué);2012年

2 田艷;尼古丁對大鼠氣道平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及膜瞬時受體電位通道TRPC表達(dá)的影響[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

3 盛娜;纈沙坦對氣道平滑肌增殖的影響及機制探討[D];南京醫(yī)科大學(xué);2009年

4 周瑩;火藥煙霧刺激損傷氣道上皮及葛根素防護(hù)作用的機制研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2012年

5 高楊;改變PTEN基因的表達(dá)對人氣道平滑肌遷移的影響[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

6 張庭庭;姜黃素抑制氣道重塑中氣道平滑肌增殖的作用及機制[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

7 孫海文;糖皮質(zhì)激素快速抑制氣道平滑肌收縮的非基因組機制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

8 李艷麗;哮喘小鼠氣道上皮TSLP表達(dá)及激活DCs加重氣道炎癥的研究[D];山東大學(xué);2010年

9 張彩蓮;氨茶堿對大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖抑制和促凋亡作用及其機制的實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 宋穎芳;血小板活化因子對大鼠氣道平滑肌細(xì)胞增殖及核因子-κB活性的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

本文編號：2282579