【摘要】：目的：通過在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染β-catenin蛋白敲除載體(SCF～(β-TrCP)-Ecad),來觀察β-catenin蛋白敲除對TGF-β1誘導(dǎo)的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響作用,進(jìn)一步探討β-catenin信號通路在TGF-β1致上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)中的作用及β-catenin蛋白敲除對EMT的治療作用。 方法：在體外培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(RLE-6TN),分別采用空質(zhì)粒(pcDNA3)、β-catenin蛋白敲除載體(SCF～(β-TrCP)-Ecad)轉(zhuǎn)染RLE-6TN后,TGF-β1(5ng/mL)干預(yù)24h,分為正常對照組(A組)、RLE-6TN加TGF-β1組(B組)、pcDNA3轉(zhuǎn)染加TGF-β1組(C組)、SCF～(β-TrCP)-Ecad轉(zhuǎn)染加TGF-β1組(D組),采用Western blot檢測各組細(xì)胞E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)和纖維連接蛋白(Fn)的表達(dá)；采用RT-PCR技術(shù)檢測β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)。 結(jié)果： 1. Western blot檢測各組細(xì)胞E-cadherin、α-SMA、Fn蛋白水平：與A組比較,B組、C組其α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著升高,E-cadherin表達(dá)顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；B組與C組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,與B組、C組比較,D組其α-SMA、Fn蛋白表達(dá)顯著降低,而E-cadherin表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；A組與D組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。 2、各組細(xì)胞β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)的實時定量PCR結(jié)果：與A組比較,B組、C組其β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)增高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；B組與C組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異,與B組、C組比較,D組其β-catenin途徑下游轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物Snail表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；A組與D組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。 結(jié)論： 1、TGF-β1可誘導(dǎo)RLE-6TN上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,表現(xiàn)為間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物表達(dá)上調(diào),上皮細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)下調(diào),β-catenin是TGF-β1致上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化途徑中重要的信號因子。 2、β-catenin蛋白敲除通過減少細(xì)胞內(nèi)β-catenin表達(dá),阻斷TGF-β1介導(dǎo)的上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化,阻止纖維化進(jìn)程。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of 尾 -catenin protein knockout vector (SCF~ (尾 -TrCP) -Ecad) on the TGF- 尾 1-induced interstitial transformation of alveolar type 鈪，

本文編號：2226162