本文關(guān)鍵詞：甘草酸單銨鹽對(duì)煙草煙霧暴露下單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《廣西醫(yī)科大學(xué)》 2014年

甘草酸單銨鹽對(duì)煙草煙霧暴露下單核細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗的影響

張揚(yáng)  

【摘要】：目的探討甘草酸單銨鹽(glycyrrhizic acid ammonium salt，GA)對(duì)煙草煙霧提取物(cigarette smoke extract，CSE)刺激下THP-1細(xì)胞糖皮質(zhì)激素抵抗的作用及其減輕激素抵抗的可能機(jī)制。 方法以THP-1細(xì)胞（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）為研究對(duì)象進(jìn)行體外培養(yǎng)，四甲基偶氮唑藍(lán)（methyl thiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide，MTT）法確認(rèn)不同濃度CSE（體積分?jǐn)?shù)分別為5%、10%、20%）及GA（100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L）在不同時(shí)間點(diǎn)（24h、48h、72h）對(duì)細(xì)胞生長的影響，以確定其作用于THP-1細(xì)胞的合適濃度。（1）為檢測各組細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素-8（interleukin8，IL-8）的含量及HDAC2表達(dá)，將培養(yǎng)的細(xì)胞分為：對(duì)照組、CSE組及CSE+GA組。CSE+GA組以GA預(yù)孵育THP-1細(xì)胞1h后給予CSE刺激過夜，之后給予不同濃度地塞米松（10-5-10-11mol/L）孵育1小時(shí)后，予腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor α，TNF-α）刺激后過夜，CSE組除不用GA外，其余干預(yù)措施與GA組相同，對(duì)照組僅給予不同濃度激素及TNF-α。以酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme linked immunosorbentassay，ELISA）檢測法測定各組細(xì)胞培養(yǎng)上清白細(xì)胞介素-8（interleukin8，IL-8）的含量，并用蛋白印跡(Western blotting，WB)法分析細(xì)胞內(nèi)HDAC2的表達(dá)。(2)為研究GA對(duì)糖皮質(zhì)激素抵抗的作用機(jī)制，將細(xì)胞分為空白對(duì)照組、錯(cuò)義寡核苷酸鏈（scrambled oligonucleotide，SC）空轉(zhuǎn)組，HDAC2-siRNA轉(zhuǎn)染組、HDAC2-siRNA+GA組。HDAC2-siRNA+GA組用脂質(zhì)體為載體，將構(gòu)建好的含組蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase2，HDAC2）沉默RNA序列的質(zhì)粒（HDAC2-siRNA）轉(zhuǎn)染細(xì)胞，給予含目的基因HDAC2-siRNA的質(zhì)粒在LipofectamineTM2000介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染細(xì)胞，轉(zhuǎn)染48小時(shí)后加入GA孵育細(xì)胞過夜，而錯(cuò)義寡核苷酸鏈（scrambled SC）空轉(zhuǎn)組給予不含HDAC2-siRNA的空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞，其余干預(yù)措施與HDAC2-siRNA+GA組相同。空白對(duì)照組不予任何干預(yù)措施，以實(shí)時(shí)熒光定量PCR（real-time quantitative polymerasechain reaction，qRT-PCR）法檢測HDAC2mRNA的表達(dá)及WB法檢測糖皮質(zhì)激素受體α(glucocorticoid receptor α，GR-α)、核因子NF-κB（P65）（nuclear factor κB）、HDAC2的表達(dá)情況。并分析這些指標(biāo)之間的相關(guān)性。數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果（1）濃度為5%、10%（體積分?jǐn)?shù)）的CSE及濃度為100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L的GA對(duì)THP-1細(xì)胞生長無明顯影響；（2）CSE+GA組的地塞米松對(duì)IL-8抑制率明顯高于CSE組，但低于對(duì)照組（P＜0.05）；（3）GA+CSE組地塞米松半數(shù)抑制濃度（IC50-Dex）低于CSE組，而高于對(duì)照組（P＜0.05）；(4) HDAC2-siRNA轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后mRNA及HDAC2蛋白表達(dá)均明顯低于對(duì)照組及空轉(zhuǎn)組，，而加用GA后表達(dá)量均明顯上升（P＜0.05）；對(duì)照組和空轉(zhuǎn)組差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（5）CSE組GR-α的表達(dá)量較對(duì)照組明顯降低，而NF-κB的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，加用GA后GR-α表達(dá)量升高,NF-κB（P65）蛋白表達(dá)降低（P＜0.05）；（6）GR-α與NF-κB（P65）的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.697，P＜0.01）；HDAC2蛋白表達(dá)與NF-κB（P65）的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.667，P＜0.01）而HDAC2與GR-α的蛋白表達(dá)水平上呈正相關(guān)（r=0.646，P＜0.01）。 結(jié)論（1）體外培養(yǎng)的THP-1細(xì)胞經(jīng)CSE刺激后，其對(duì)地塞米松的敏感性降低，說明存在糖皮質(zhì)激素抵抗現(xiàn)象。（2）GA可能通過上調(diào)HDAC2及GR-α表達(dá)，減少NF-κB的活性，減輕氧化負(fù)荷下THP-1細(xì)胞的糖皮質(zhì)激素抵抗。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R563.9
【目錄】：

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