發(fā)布時(shí)間：2018-08-20 07:32

【摘要】：目的建立模仿肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(ATⅡ)暴露于云錫煉廠煙塵環(huán)境的離體研究模型。方法以永生化ATⅡ(RLE-6TN細(xì)胞株)為實(shí)驗(yàn)對象,分為高、低劑量染毒組和空白對照組。前2組分別使用終濃度為200、50 mg/L的煙塵懸濁液在第1、3、5、7、9代對細(xì)胞染毒,同代對照組不加煙塵懸濁液同步培養(yǎng)。從第10代起,高、低劑量染毒組常規(guī)傳代直至軟瓊脂克隆形成檢測實(shí)驗(yàn)呈陽性。采用透視電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu),流式細(xì)胞術(shù)觀察細(xì)胞周期,免疫印跡法及免疫組織化學(xué)觀察各組細(xì)胞肺表面活性蛋白(SP)-B、SP-C、鼠雙微體2(MDM2)蛋白、脆性組氨酸三聯(lián)體(FHIT)蛋白的改變。結(jié)果染毒24 h后即可觀察到煙塵對RLE-6TN細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)造成損傷,主要表現(xiàn)為板層小體變性且數(shù)量減少,以及細(xì)胞凋亡和壞死;轉(zhuǎn)化后的細(xì)胞由圓形或類圓形鋪路石樣生長變?yōu)殚L梭形。高、低劑量染毒組細(xì)胞培養(yǎng)至25代時(shí)軟瓊脂克隆形成檢測實(shí)驗(yàn)均呈陽性,克隆形成率分別為3.33‰和1.67‰;繼續(xù)培養(yǎng)至35代觀察高、低劑量染毒組克隆形成率分別為12.50‰和10.00‰,空白對照組始終沒有克隆形成。高、低劑量染毒組克隆形成率與染毒培養(yǎng)代數(shù)相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),但與煙塵染毒劑量相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。流式細(xì)胞儀檢測示高、低劑量染毒組G2/M期+S期的比例較空白對照組增高。高、低劑量染毒組第25、30代細(xì)胞MDM2蛋白陽性、SP-B及FHIT蛋白陰性,而空白對照組同代細(xì)胞MDM2蛋白陰性、SP-B及FHIT蛋白陽性。高、低劑量染毒組第25、30、35代細(xì)胞示SP-C失表達(dá),空白對照組SP-C有表達(dá)。結(jié)論 ATⅡ長期暴露于云錫煉廠煙塵中可導(dǎo)致其惡性轉(zhuǎn)化。ATⅡ特異性蛋白SP-B、SP-C、FHIT失表達(dá),MDM2陽性表達(dá)可作為RLE-6TN細(xì)胞轉(zhuǎn)化的參考指標(biāo)。
[Abstract]:Objective to establish an in vitro model of simulated alveolar type 鈪，

本文編號：2192883