本文選題：非肌肉肌球蛋白重鏈ⅡA + 骨髓間充質(zhì)細(xì)胞��； 參考：《廣東醫(yī)學(xué)》2016年16期

【摘要】：目的觀察慢病毒介導(dǎo)shRNA沉默非肌肉球蛋白重鏈ⅡA(MYH9)對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)旁分泌功能的影響。方法采用脂質(zhì)體法將含MYH9干擾序列的pHBLV-U6-ZsGreen-Puro(實(shí)驗(yàn)組)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞,以轉(zhuǎn)染pHBLV-U6-ZsGreen-Puro空載質(zhì)粒的細(xì)胞為空載組,以正常未轉(zhuǎn)染細(xì)胞為對(duì)照組,包裝產(chǎn)生的病毒液感染BMSCs。用熒光顯微鏡觀察熒光蛋白表達(dá);以β-actin為內(nèi)參,分別用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)和免疫印跡(Western blot)檢測(cè)MYH9 mRNA及蛋白表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)檢測(cè)其培養(yǎng)基上清液中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、促血管生成素1(ANG-1)和促血管生成素2(ANG-2)的含量。結(jié)果成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro,轉(zhuǎn)染293 T細(xì)胞產(chǎn)生高滴度慢病毒,熒光顯微鏡下可見(jiàn)被慢病毒感染的rBMSCs表達(dá)強(qiáng)綠色熒光蛋白,qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示2條慢病毒感染MYH9 mRNA表達(dá)水平明顯下調(diào),顯著低于對(duì)照組和空載組(P0.05);沉默MYH9基因后,實(shí)驗(yàn)組的ANG-1和bFGF在增殖末期較對(duì)照組和空載組有明顯上升(P0.05),ANG-2和VEGF未見(jiàn)明顯差異(P0.05)。結(jié)論 pHBLV-U6-MYH9-ZsGreen-Puro慢病毒包裝質(zhì)粒轉(zhuǎn)染BMSCs后,BMSCs旁分泌能力未受明顯影響。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lentivirus-mediated shRNA silencing non-myosin heavy chain 鈪，

本文編號(hào)：2087796